流感病毒感染介导的免疫病理损伤研究

流感病毒感染介导的免疫病理损伤研究

聂贵军

聂贵军(吉林省敦化市中医院病理科133700)

【摘要】目的：探讨流行病毒感染介导引起的免疫病理性损伤进行研究。方法：对病毒感染小鼠的感染细胞凋亡情况行免疫组织化学染色法进行观察，并采用乳酸脱氢酶释放法对感染的小鼠脾淋巴细胞CTL杀伤活性以及NK活性。结果：小鼠因缺乏穿孔素可使流感病毒在其肺部进行大量繁殖，并增加患者的病毒清除时间，感染的病毒细胞因缺乏穿孔素引起细胞凋亡周期延长。检测小鼠脾脏细胞中的CTL杀伤活性以及NK活性均发生明显降低。结论：流感病毒感染介导应用的穿孔素对初次病毒感染具有显著的效果，能够快速的清除感染的病毒，值得临床上推广应用。

【关键词】流行病毒感染介导治疗穿孔素

【中图分类号】R36【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2014）25-0045-02

流行病毒作为一种重要的病原体作用在呼吸道,导致流感病毒感染。有调查显示[1]，近年来，流感病毒传染呈现每年都会呈现周期性的流行性传播。其中甲型流感病毒属于正粘病毒是一种反义单链分节段的RNA病毒，随着病毒的深入和不断变化则如何使病毒快速被清除成为了现今医学界的热点研究的课题[2]。

1、资料和方法

1.1一般资料获得人类流感病毒H1N1（A/PR/8/34）的小鼠适应株，并将常规实验室贮存的病毒菌株接种在10d龄的鸡胚胎的尿囊腔中，在37℃下进行3d培养，并在3d后收集感染的鸡胚胎尿囊液。利用猴肾细胞株在感染病毒后易形成空斑数目的原理，对其尿囊液中的病毒滴度[3]。同时，选取穿孔基因敲除鼠和C57BL/6小鼠各30只，其中所有小鼠均为8～10周龄的成年雄性小鼠。将小鼠经腹部用药苯巴比妥对其进行轻度麻醉，并将A型流感病毒通过小鼠的左鼻进行接种感染。

1.2方法免疫组化技术检测流感病毒抗原和凋亡细胞应用DAKO试剂盒(DAKOEnvision+TM,CA,USA),过氧化物酶染色法检测肺组织切片中A型流感病毒PR8抗原。抗流感病毒特异性抗体为兔抗PR8多克隆抗体,来源于用纯化流感病毒A/PR/8/34免疫的新西兰大耳白兔,血清抗体工作浓度为1B400。显微镜下观察病毒抗原的分布这些结果表明，局部的AMs与中性粒细胞浸润在流感病毒感染的总体致病中发挥作用，同时，它们在控制病毒生长及促进病毒清除的过程中也发挥着至关重要的作用．因此，在高致病性流感病毒感染过程中，AMs与浸

润的中性粒细胞可以增加细胞因子的产生，进而加重肺部的炎症并趋化相关的单核/巨噬细胞及T淋巴细胞至肺组织．尽管这些将导致严重的病理损伤，但这些反应也可能防止宿主发生流感病毒诱导

1.3统计处理将笔者在实验过程中获得的数据输入spss16.0统计学软件中进行处理。其中计量资料采用t检验。若检验结果p<0.05，说明两种不同的病例技术之间差异具有统计学意义。

2、结果

小鼠因缺乏穿孔素可使流感病毒在其肺部进行大量繁殖，并增加患者的病毒清除时间，感染的病毒细胞因缺乏穿孔素引起细胞凋亡周期延长。检测小鼠脾脏细胞中的CTL杀伤活性以及NK活性均发生明显降低。具体结果见表1～表2。

表（1）小鼠进行流感病毒感染0、2、3、5、8d后NK活性的情况（x-±s%）

感染流感病毒的天数（n）小鼠个数（n）NK活性的变化(x-±s%)

0505.9±8.2

25015.3±1.9

34830.1±1.4

54811.4±2.1

8476.9±4.2

表（2）小鼠进行流感病毒感染0、5、8、10、12d后CTL杀伤细胞活性情况（x-±s%）

感染流感病毒的天数（n）小鼠个数（n）脾淋巴细胞CTL杀伤活性（x-±s%）

0503.8±1.4

54813.4±3.1

84728.7±7.2

104721.4±8.4

124712.6±6.5

3、讨论

笔者在实验过程中发现，一般在流感病毒感染的第五天,染病小鼠的感染细胞出现大量凋亡现象，随之流感病毒将会被大量清除，进而减少细胞的凋亡情况。从而，提示我们流感病毒感染机体后发生的免疫防御机制中,依赖早期感染细胞杀伤机制的穿孔素具有快速清除病毒的作用，在早期的流感病毒清除中占有重要地位。而在实验过程中，穿孔素基因敲除的小鼠在病毒感染的后期亦出现感染细胞快速凋亡的现象，则表明除穿孔素诱导细胞凋亡的发生以外，仍旧存在其他的清除病毒机制。

有研究者研究发现[4]，在体外感染实验中，呼吸道上皮细胞可以调动这些促炎调节因子的翻译和表达量。甲型流感病毒特别是高致病性H5N1病毒感染后，体内被感染的肺上皮细胞及肺泡巨噬细胞(AMs)初始释放的炎症调节因子可能导致大量的中性粒细胞浸润、巨噬细胞，并招募外周血中的大量T细胞穿过上皮细胞内屏障渗透至感染的肺组织[5]，造成早期的炎症性病理损伤，加重疾病的严重程度。同时，在穿孔素蛋白经常发生欠缺情况下，机体对流感病毒的清除作用减弱，从而感染扩大，危害机体的健康[6-7]。故在感染细胞的免疫防御机制以及清除流感病毒过程中,穿孔素依赖细胞毒性效应在清除流感病毒感染细胞方面作用巨大[6]。

总之，流感病毒感染介导应用的穿孔素对初次病毒感染具有显著的效果，只得临床上的应用。

参考文献

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[3]郭峰,虞紫茜,赵中平.红细胞免疫功能的初步研究[J].中华医学杂志.1982.62(12):715-716.

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