用酶联法检测肿瘤病人红细胞免疫功能及其临床意义

用酶联法检测肿瘤病人红细胞免疫功能及其临床意义

陈利

陈利

【摘要】介绍用酶联法检测红细胞免疫粘附（redcellimmuneadherenceRCIA）活性及红细胞膜免疫复合物（ciculatingimmunecompleCIC）水平的测定方法。并测定42例正常人和28例病症患者。结果正常对照组RCIA活性为4.56±0.35ngAHC/10RBC。实验组为2.74±0.40，P＜0.001，对照组CIC水平为4.28±0.23ngAHG/10RBC，实验组为3.12±0.22，P＜0.001.本研究初步证实用酶联法测定肿瘤患者红细胞免疫功能，方法可靠，定量准确，适合临床推广应用。

【关键词】酶联法；RCIA活性；RBC膜CIC

【中图分类号】R477【文献标识码】B【文章编号】1005-0515(2011)06-0287-01

自1981年美国学者Siegel等提出红细胞不经具有呼吸功能，而且与白细胞一样具有免疫功能1982年郭峰等用酵母菌花环法进行红细胞免疫功能测定，并在临床免疫上取得很大成效，完善了对红细胞免疫功能的认识。但由于酵母菌花环法影响因素多，手工操作，要求熟练，仅为半定量。笔者根据曹东[3]用ELISA法检查白血病患者红细胞免疫功能的研究及Miyakawa[4]应用放射碘标记抗人IgG抗体法，检测了正常人42例及肿瘤病人28例的RCIA活性及RBC膜CIC水平变化情况，现将检测方法及结果报道如下。

1材料与方法

1.1受检对象:

1.1.1正常人42例，男24例，女18例，年龄24－45岁，均健康献血员。

1.1.2肿瘤病人28例，其中肝癌7例，肺癌8例，膀胱癌1例，肠癌1例，淋巴瘤3例，宫颈癌4例，鼻咽癌3例，胃癌1例。年龄21－63岁。均为病检确诊的病例。

1.2材料:0.05MPH9.6碳酸盐缓冲液的包被液。GVB++红细胞洗涤液。0.02MTris-Tween-20酶反应洗涤液。豚鼠混合血清。人IgG：采用Batch技术[5]提取。热凝聚IgG根据林森报道的方法[6]。羊抗人IgG－HRP武蒲生物制品研究所提供，批号930401。

1.3方法:

1.3.1红细胞结合物悬液的制备:抗凝血用pH7.4的GVB++缓冲液洗涤3次，然后调整红细胞浓度为108∕ml细胞悬液，取稀释2倍的新鲜豚鼠混合血清0.2ml及3.5μg∕100mlAHG0.2ml加红细胞悬液0.2ml混匀置37℃水浴45分钟，用GVB++液洗3次，最后用PBS-Twee20恢复为0.2ml。

1.3.2红细胞酶联免疫，以人IgG（20μg∕ml）200μl包被酶标反应板各孔，放4℃过夜，然后用1%BSA－PBS－0.05%Tween20洗涤3次，37℃温育30分钟，再加倍比稀释AHG（35－0.068μg∕ml）作竞争抑制标准曲线，其他各孔加待检查，每位两孔。一孔加入未结合物悬液100μl，然后37℃温育2小时后洗涤3次，加底物200μl置37℃30分钟，再加终止液50μl，用DG322A型（南京产）酶标光度计按波长492nm读取OD值，作竞争法标准曲线，求出待检样品RCIA活性含量及RBC膜CIC含量。

2结果

对照组与实验组的RCIA活性含量和RBC膜CIC含量比较见附表。

附表实验组与对照组红细胞免疫指标测定结果(ngAHG/107RBC)

3讨论

据已报道的大量实验研究资料表明，红细胞免疫参与肿瘤发生、发展全过程。1981年Siegel等[4]采用红细胞一红细胞花结法检测23名宫颈癌、胃癌、直肠癌病人，发现这些病人红细胞免疫粘附活性均有不同程度下降。郭峰等[7]创用酵母花环法检测肿瘤病人红细胞CR1活性，发现癌症病人CR1活性降低。与本研究所测定的28例癌症病人红细胞免疫功能下降相似。说明肿瘤病人在疾病发生、发展过程中与红细胞免疫活性关系密切，并造成机体损伤和功能下降。同时，由于红细胞对肿瘤细胞的调整及其对吞噬作用功能降低和红细胞对CIC粘附性减弱，红细胞CR1空位减少或肿瘤红细胞CR1功能缺陷，以导致IC清除障碍，故造成肿瘤病人RBC膜CIC明显低于正常人。

肿瘤病人红细胞免疫功能低下原因据有关报道可能与下列因素有关：①癌细胞分泌大量抗原物质如AFP、CEA等，使红细胞免疫复合物增加，红细胞CR1(CR1)被占据[8]；②肿瘤病人血清存在抑制因子，抑制红细胞CR1活性[9]；③肿瘤病人可能存在着抗CR1的自身抗体。但是肿瘤病人红细胞免疫粘附(RCIA)活性减少其影响因素是多方面的，其机制有待深入探讨。

红细胞免疫及红细胞免疫检测技术，国内是近几年来发展日趋活跃的研究课题，并已建立了有效检测方法，酶联免疫法检测红细胞免疫活性,具有灵敏度高,重复性好，定量准确，操作简便等优点，是适宜检测红细胞免疫与疾病关系的技术方法。

参考文献

[1]SiegelIetal.TheredcellimmuneSysten.Lancer1981；11(8246)；556

[2]郭峰、虞紫茜、赵中平。红细胞免疫功能的初步研究。中华医学杂志1982；62（2）；715

[3]曹东，黄宗干，曹维西。白血病患者红细胞免疫功能的研究。中华内科杂志1988；27（10）：634

[4]MiyakawaYu20.Defectiveimmune-adherence(c3b)ricepteronerythrocytesfrompatientwithsystemelupueerythematosus.Lancet1981；11；493

[5]龙振洲，丁桂凤主编。免疫学实验技术。北京：北京医科大学免疫学教研室1988；15

[6]林森。国外有关红细胞CR1研究的几种测定方法。红细胞免疫学新探。南京大学出版社1993：91

[7]郭峰。红细胞免疫及其调节功能。免疫学杂志1990；6（1）；60

[8]李德菊，邵华。肿瘤患者红细胞免疫功能与T淋巴亚群关系的探讨。见红细胞免疫学新探。南京：南京大学出版社1993；181

[9]郭峰。血清对红细胞免疫粘附抑制作用的测定。上海免疫学杂志1987，5（7）：133

作者单位：438300湖北省麻城市歧亭镇卫生院