酶联捕获法检测抗TORCHIgM抗体的实验分析

酶联捕获法检测抗TORCHIgM抗体的实验分析

欧阳辉

欧阳辉（广东省佛山顺德妇幼保健院检验科528300）

【摘要】目的建立检测TORCHIgM抗体的酶联捕获技术。方法应用酶联捕获法检测103例弓形虫（TOX）、135例风疹病毒（RV）、128例巨细胞病毒（CMV）、98例单纯疱疹病毒（HSV）感染者血清中IgM抗体，并与常用的间接ELISA法进行比较。结果酶联捕获法特异性及敏感性均高于间接ELISA法，且不受RF因子的影响。结论酶联捕获法敏感性高，特异性强、简便、快速，重复性好，具有实际应用价值。

【关键词】TORCH免疫球蛋白M酶联免疫技术捕获法

【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2013）13-0154-02

TORCH是指一组病原体：T即刚地弓形虫，O即others，比如乙型肝炎病毒、HIV病毒、梅毒螺旋体等，R即风疹病毒，C即巨细胞病毒，H即单纯疱疹病毒[1]。

弓形虫感染是一种人和动物共同可以发病的疾病，猫与其他动物是主要传染源。后天轻型感染者多无明显的症状，但患者血清中可以检测到抗体；重型感染者者即可引起各种各样的临床症状，如高热、肌肉或关节疼痛、淋巴结肿大等；通过胎盘宫内感染者可引起死胎、早产，出生后可表现一系列中枢神经系统症状以及眼、内脏的先天损害[2]。

风疹病毒是一类RNA病毒，人是其唯一自然宿主。RV通过呼吸道传播，人类对RV普遍易感，一般症状较轻，预后佳，可通过注射RV疫苗进行主动防御[3]。妊娠早期（4个月内的）孕妇感染RV后，病毒可通过胎盘传染给胎儿，引起胎儿先天性风疹综合症（CRS）。

巨细胞病毒为双链DNA病毒，主要通过血液、性、垂直传播[3-4]。新生儿表现生长发育迟缓、肝脾肿大、黄疸、血小板减少性紫癜、溶血性贫血、呼吸窘迫、昏睡、抽搐等，多数患儿出生后数小时或数周内死亡；存活者的后遗症包括神经性耳聋，永久性智力迟钝、脉络膜视网膜炎、视力丧失、癫痫以及心脏畸形等。

单纯疱疹病毒感染，主要可以引起人类的疱疹性口腔炎、湿疹性疱疹、疱疹性角膜结膜炎、新生儿疱疹、疱疹性外阴阴道炎等[5]。本试验不区分单纯疱疹病毒-Ⅰ型或单纯疱疹病毒-Ⅱ型。

因此，TORCH感染的检测在临床上具有重要意义。在病原体急性感染的诊断中，通常需检测TORCH项目的系列IgM抗体[3]。目前在市场上可见到的IgM抗体检测试剂盒又可分为标记抗原的捕获法和标记抗体的间接法2种。本研究采用标记抗原的方法，建立捕获ELISA技术对经PCR确诊的103例TOX、135例RV、128例CMV、98例HSV阳性血清进行检测，并与间接ELISA法作比较，现报道如下。

1.材料和方法

1.1血清来源

103例TOX、135例RV、128例CMV、98例HSV阳性血清（经PCR从TORCH感染者血清中筛选），79份类风湿性关节炎患者血清及197例正常人血清均来自广东省佛山顺德妇幼保健院。以上患者及正常人经肘静脉采血，分离血清后置于-20℃冰箱保存。

1.2主要试剂

TORCH捕获ELISA法试剂盒购自意大利DIESSEDiagnosticaSeneseS.P.A.公司，TORCH间接ELISA法试剂盒购自德国欧蒙医学实验诊断有限公司。

1.3方法

参照各厂家试剂盒说明书进行试验操作。证实两种方法在检验TORCH患者血清特异性IgM时的灵敏度和特异性，并且分析是否存在差异[6]。分别用以上两种方法检测30份类风湿性关节炎患者血清，比较RF因子对以上两种试剂的干扰性，并分析是否存在差异。

1.4数据处理

采用EXCEL、SPSS统计软件进行统计学处理，使用t检验比较结果差异，P＞0.05时差异有统计学意义。

2.结果

2.1两种ELISA方法检测IgM的灵敏度和特异性比较

PCR试剂及2种试剂盒共检测661份临床血清样本。捕获ELISA法试剂盒的检测结果见表1，间接ELISA法试剂盒的检测结果见表2。

表1PCR试验及捕获ELISA法试剂盒的检测结果

捕获法试剂盒PCR试剂合计

阳性阴性

阳性4630463

阴性1197198

合计464197661

表2PCR试验及捕获ELISA法试剂盒的检测结果

间接法试剂盒PCR试剂合计

阳性阴性

阳性4637470

阴性1190191

合计464197661

捕获ELISA法试剂盒和间接ELISA法试剂盒的检测灵敏度均为99.8%[463/464]，特异性分别为100%[197/197]，96.4%[190/197]，结果符合率分别为99.8%[(463+197)/661]，98.8%[(463+190)/661]。两种试剂盒的检测灵敏度、特异性、结果符合率均达到试剂盒要求（95%），但捕获ELISA特异性明显高于间接ELISA（P＞0.05）。

2.2RF因子影响试验

79份类风湿性关节炎患者血清，用捕获ELISA法检测IgM抗体，其结果均为阴性，而用间接ELISA法检测时，有5例假阳性。RF因子对间接ELISA法试剂盒的干扰作用明显高于捕获ELISA法（P＞0.05）。

3.讨论

目前TORCH的检测主要有捕获ELISA法和间接ELISA法，从研究数据可知，对于间接ELISA法检测的阳性血清并不能确诊为TORCH感染。在使用间接法测IgM抗体时，由于临床血清样本中含有高浓度的IgG抗体，其中部分特异IgG抗体将与IgM抗体竞争与固相抗原结合，从而干扰IgM抗体的检测[7]。因此，在使用间接法测定IgM抗体时，通常须将血清样本用抗人IgG抗体或SPA预处理，以去除IgG的干扰。这样不但测定较为繁琐，而且影响测定的特异性和灵敏度。目前，常用的IgM抗体检测方法为捕获法，酶联捕获法是继间接ELISA法后的一种新的检测方法[8]。捕获ELISA法是用抗人IgMμ链直接从被检测血清中捕获IgM，然后才进行特异性的鉴定，有效的避免了RF等干扰物质在IgM检测中的影响，显示出良好的特异性，从而提高了试剂的准确度。

多年的实践也证明，捕获ELISA法比间接ELISA法更具有优势，捕获法操作简便、快捷、节省试剂、结果观察直观可靠，为临床TORCH感染检测提供一个科学准确的诊断依据。

参考文献

[1]张燕,张小娟.南京地区4637例孕前妇女TORCH感染检测结果分析[J].中国社区医师;2012,8(2):229-230.

[2]姚天一,张志坤.弓形虫感染与围生儿预后[J].中国实用妇科与产科杂志;2005,06:339-341.

[3]汪轶,李芳,侯秀红.孕前孕期TORCH检查的意义[J].美中国际创伤杂志;2012,3(7):34-40.

[4]张红斌,陈绍威,毛熙光,等.探讨地区不孕不育妇女TORCH检测情况及分析[J].北方药学;2012,3(2):91-92.

[5]廖世秀,王应太,杨艳丽,等.孕妇及胎儿单纯疱疹病毒感染及其垂直传播的研究[J].中国优生与遗传杂志;1999,7(2):32-33.

[7]EndersG,KnotekF.DetectionofIgM,antibodiesagainstrubellavirus:comparisonoftwoindirectELISAandananti-IgMcaptureimmunoassay[J].JMedVirol;1986,19:337-342.

[6]沈婷,周斌,陈溥言.检测猪乙型脑炎病毒抗体间接ELISA方法的建立与应用[J].畜牧与兽医;2010,42(4):1-6.

[8]刘洪,貌盼勇,张平,等.应用捕获ELISA检测EB病毒IgM抗体[J].中华医学检验杂志;1991,1:221-223.