莫匹罗星杂质研究

莫匹罗星杂质研究

胡方剑吴玲霞

胡方剑吴玲霞（浙江省杭州中美华东制药有限公司310014）

【摘要】莫匹罗星（mupirocin）是一种天然产生的广谱抗生素，主要用于治疗皮肤细菌感染性疾病。根据欧洲药典EP7.0的报道，莫匹罗星存在六种杂质，分别命名为杂质A——杂质F，但并未对其定位，对该产品的杂质分析带来极大不便。目的将EP中的这6个杂质进行鉴定并给以液相定位。方法采用EP的HPLC方法将莫匹罗星杂质进行分析后根据其保留时间的先后（RRT=0.53、0.71、0.74、0.79、0.91和1.89）将它们编号为杂质1—6，将莫匹罗星EP的HPLC方法调整为LC-MS方法并进行检测，鉴定部分杂质，对于莫匹罗星中存在的同分异构杂质，仅仅采用LC-MS方法不能鉴定，我们采用制备提取得到少量杂质纯品后，再进行核磁共振测定其结构。结果通过LC-MS鉴定杂质出1，4，5，6。杂质2，3为莫匹罗星的同分异构体，无法通过LC-MS鉴定。于是采用制备液相提取两种杂质各50mg纯度95%以上，然后通过NMR鉴定出两种杂质。结论经解析鉴定，杂质1—6分别为EP杂质F，D，E，C，A，B。

【关键词】莫匹罗星（mupirocin）杂质HPLCLC-MSMSNMR

【中图分类号】R194【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）22-0063-03

莫匹罗星（mupirocin,MPC）又名假单孢菌酸A（pseudomonicAcidA）、trans-pseudomonicacid，是一种广谱抗生素，由荧光假单孢菌发酵后产生，在结构上较特殊，与其他抗生素无关联[1]。其分子含有一个短的脂肪酸侧链，通过一个不饱和醋酸键与一个较大分子相连，分子式为C26H44O9，分子量为500.6。莫匹罗星的基本作用机理是：通过对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌RNA及蛋白质结合，阻止异亮氨酸的供给，从而使细菌内含异亮氨酸的所有蛋白质的合成停止而造成细菌的死亡[2]，同时还能轻度抑制DNA和细胞壁肽聚糖的合成，对一些常见的皮肤细菌感染性疾病具有良好的疗效。

1.目的

将各个杂质进行鉴定并给出HPLC中的定位。

2.方法

本公司生产的莫匹罗星（mupirocin）采用EP7.0[3]的HPLC法分析，其色谱图中杂质峰有6个，标记为1、2、3、4、5和6。其中杂质1RRT=0.53，杂质2RRT=0.71，杂质3RRT=0.74，杂质4RRT=0.79，杂质5RRT=0.91，杂质6RRT=1.89。

由于该HPLC方法含有较多四氢呋喃，不能直接做LC-MS因此采用乙腈代替四氢呋喃，经过验证两种方法杂质出峰位置一致。

3.结果

表明杂质1的分子量为472.8。对照EP7.0发现与EP杂质F的分子量相同,杂质1为EP杂质F。杂质2和杂质3的分子量都为500.9与莫匹罗星分子量同，所以为莫匹罗星的同分异构体。杂质4的分子量为498.9，对照EP7.0发现与EP杂质C的分子量相同,杂质4为EP杂质C。杂质5的分子量为516.8，对照EP7.0发现与EP杂质A的分子量相同，杂质5为EP杂质A。杂质6的分子量为484.9，对照EP7.0发现与EP杂质B的分子量相同，所以杂质6为EP杂质B。

4.讨论

杂质2和杂质3的研究

仪器型号：BRUKER公司500兆NMR仪

测定条件：DCCl3作溶剂。

测定数据列于表1和表2。

杂质2解析：

1H-NMR谱中显示分子中共有20组质子信号，共40个质子。其中δ在7.27左右的为活泼氢。

1H-1HCOSY谱中显示,有多组氢耦合，它们是δ0.81与δ1.61处耦合，δ1.61与δ2.18处耦合，δ1.61与δ3.70处，δ2.18与δ5.69处耦合。由此可知上述质子都处于相邻位置。

13C-NMR示出样品分子有26组C信号，其中δ77处三个为溶剂峰，，因此该分子结构含有26个碳原子。DEPT1350显示分子中有3个CH3（δ12.71，δ18.51，δ20.87），11个CH2（δ24.82,δ26.39,δ28.60,δ28.91,δ29.04,δ29.25,δ29.77,δ36.26,δ41.34,δ64.08,δ65.74），9个CH（δ34.23,δ41.96,δ67.45,δ68.67,δ72.24,δ76.51,δ80.55,δ81.01,δ118.36）与3个季碳。HMQC谱可以确认各组碳与氢的连接关系。如图所示，具体归属见表。

表1杂质21H-NMR数据

表2杂质313H-NMR、DEPT135o、HMQC、HMBC数据

测定数据列于表3和表4。

杂质3解析：

1H-NMR谱中显示分子中共有20组质子信号，共40个质子。其中δ在7.26左右为活泼氢。

1H-1HCOSY谱中显示,有多组氢耦合，它们是δ0.98与δ1.94处耦合，δ1.63与δ2.25处耦合，δ1.63与δ4.08处，δ2.13与δ5.71处耦合。由此可知上述质子都处于相邻位置。

13C-NMR示出样品分子有26组C信号，其中δ77处三个为溶剂峰，因此该分子结构含有26个碳原子。DEPT1350显示分子中有3个CH3（δ11.17，δ18.62，δ22.23），11个CH2（δ24.99,δ26.16,δ28.79,δ29.08,δ29.13,δ29.21,δ34.33,δ34.82,δ40.26,δ64.24,δ64.52），9个CH（δ33.11,δ40.11,δ66.59,δ69.22,δ70.60,δ76.50,δ77.02,δ82.42,δ118.54）与3个季碳。HMQC谱可以确认各组碳与氢的连接关系。如图所示，具体归属见表。

表3杂质31H-NMR数据

表4杂质313H-NMR、DEPT135o、HMQC、HMBC数据

5.结论

本实验通过LC-MS，制备液相制备提取杂质单体后NMR测定等方法，成功地将莫匹罗星中六个杂质进行了结构鉴定，并对比EP7.0中给出的结构式，鉴定杂质杂质1——6分别为EP杂质F，D，E，C，A，B。

参考文献

[1]ParentiMAetal:ClinPharm1987,6761-770.

[2]LeydenJJ:SeminDermatol1987,648-54.

[3]欧洲药典EP7.0.

[4]JohnT.S.,ColinR.P.,andJohnW.T.TetrahedronLettersVol.28,No.43,pp5169-5177,1987.