茯苓中多糖的提取及含量测定方法综述

茯苓中多糖的提取及含量测定方法综述

惠秋沙

惠秋沙（山东中医药大学山东济南250014）

【中图分类号】R446.1【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2011）26-0154-02

【摘要】茯苓多糖具有多种生物活性，在药用方面具有广泛的应用前景，现针对茯苓中多糖的提取及含量测定定方法作一综述。

【关键词】茯苓多糖提取含量测定

ContentDeterminationAndExtractionMethodsOfPolysaccharidesofPoriaCocos

HuiQiusha（ShandongUniversityofTraditionalChineseMedicine,Jinan,250014）

【Abstract】Polysaccharidesofporiacocoshavethevarietyofbiologicalactivity.TheyhavewideapplicationforegroundinChineseMedicinefield.Nowareviewaboutthecontentdeterminationandextractionmethodsofpolysaccharidesofporiacocoswasmade.

【Keywords】polysaccharidesofporiacocosextractioncontentdetermination

茯苓(poriacocos)为多孔菌科(polyporaceae)真菌茯苓的干燥菌，是卫生部公布的药食两用物品之一，也是我国保健食品重要原料。茯苓主要化学成分有茯苓多糖、三萜、树胶、甾醇、蛋白质、维生素、微量元素等多种营养成分[1]。其中多糖β-茯苓聚糖是茯苓主要活性成分,占干重的93％[2]。近年来，国内外学者对茯苓多糖进行了大量研究，发现其主要有增强免疫、延缓衰老、抗病毒、抗肿瘤、降血糖等药理作用[3]，在药用及保健方面有广阔的前景。

现总结了近年来茯苓多糖提取应用比较多的方法，并对其含量测定方法作一综述。

1提取方法

1.1水提醇沉法

水提法是最简便、最常用的提取方法，但其缺点是耗时长，提取效率低。水浸提常受物料粒度、料液比、提取温度及提取时间的影响。如周燕霞等[4]通过正交实验得出茯苓多糖最佳水提条件为：提取时间2h，提取次数3次，药品粒度80目，料液比1:70，醇沉浓度80%。

1.2超声提取法

超声提取法利用超声波对细胞壁进行破碎，加速胞内多糖的溶出，能提高提取得率，缩短提取时间。影响超声波破壁的作用的因素主要有：超声功率，超声提取时间，料液的温度、料液比等。霍文[5]等采用正交实验优选超声提取茯苓多糖的工艺：粉末粒度为20目，超声时间20min，水量40mL。而程水明[6]等通过正交实验确定的最佳提取工艺为：超声功率350W，超声提取时间30min，提取温度60℃。

1.3微波辅助提取

微波辅助提取法是近年来新兴的提取方法，具有绿色无害、提取率高、选择性高、省时有效低能耗等优点。聂金媛等[7]用微波辅助提取茯苓中茯苓多糖，得出最佳提取条件为：提取时间18min，固液比1:50，微波占空比42%，提取率为2.792%，提取率是传统水提法的两倍，与超声波提取法相比，提取时间少一半，提取率提高了63.5%。

2茯苓多糖的纯化

2.1化学试剂法除杂

在提取的茯苓粗多糖中经常混有如蛋白质、脂类、色素等杂质，需对其进行除杂纯化。常用的脱蛋白的方法有Sevage法，三氯乙酸法、蛋白酶法和鞣酸沉淀法。Sevage法比较温和，而三氯乙酸法容易引起某些多糖的降解[8]。鞣酸沉淀法则利用鞣酸与蛋白反应生成沉淀的原理除去蛋白，孔祥辉等[9]在微沸状态下，向提取溶液加入1%的鞣酸溶液，直到无沉淀产生。常用的脱色方法则有双氧水法，金属络合物法等。双氧水是一种氧化剂，使用时应注意避免过量，以免影响多糖活性。

2.2色谱方法除杂

采用化学试剂法在除去杂质的同时也会带走一些多糖，造成损失。而用色谱层析法除杂能最大限度的减少多糖的损失，而且效率高于化学试剂法。大孔树脂是一种具有大孔结构的高分子吸附剂，可较好吸附除去多糖中的杂质。李玲[10]用大孔吸附树脂除去茯苓多糖中杂质，取得了良好的效果。

3含量测定方法

3.1直接滴定法

直接滴定法是将提取的粗多糖溶解，用此溶液滴定碱性酒石酸铜溶液至蓝色消去为终点来测定多糖含量的方法。于村等[11]用作了此法的方法学考察，测定某保健胶囊的RSD%为1.40%，回收率为93.9%-97.2%。

3.2紫外-可见分光光度法

紫外-可见分光光度法是目前测定多糖含量最常用的方法，常用的显色剂有苯酚，蒽酮-硫酸和3,5-二硝基水杨酸（DNS）。前两者主要利用多糖在强酸性条件下脱水生成糠醛或其衍生物，然后与酚类或者胺类反应缩合，生成有特定吸收波长的有色物质进行测定；DNS法则是利用了多糖的还原性。周燕霞[4]采用苯酚硫酸法测定茯苓中多糖的含量为74.9%。

3.3高效液相色谱法和气相色谱法

大多数多糖不含生色基团，因此通过普通的高效液相检测方法对多糖进行直接检测比较困难，但紫外衍生法和荧光衍生法以其灵敏度高，选择性好，方法快速简便等优点渐渐成为多糖类物质主要测定方法[12]。气相色谱法既能定性又能定量测定糖类，具有选择性好，样品用量少，灵敏度高等优点。由于糖类本身没有足够的挥发性，常采用衍生物法来增加其挥发性，一般将多糖的酸水解物或甲醇醇解物用三甲基硅烷基化或者三氟乙酰化转化后进样分析[13]。

4总结

茯苓多糖为近年来研究热点，由于其特殊的药理保健作用必将会引起更广泛的关注。而确立一种既简单又合适的分离提纯和含量测定方法将显得很必要，更方便茯苓多糖的研究工作者的研究。

参考文献

[1]王帅，姜艳艳，朱乃亮等.茯苓化学成分分离与结构鉴定[J].北京中医药大学学报,2010,33(12):841-844.

[2]林燕，黄嘉鹏.茯苓有效成分的药理作用研究进展[J].中外健康文摘,2010,7(9):271-272.

[3]丁诚实.分光光度法测定茯苓活性成分的含量[J].食品工程,2008,(4):26-28.

[4]周燕霞，唐明林，殷辉安等.茯苓多糖的提取及含量测定[J].天然产物研究与开发,2003,15(4):330-333.

[5]霍文，孙广利，刘鹏.正交试验法优选茯苓多糖提取工艺[J].西北药学杂志,2006,21(1):18-19.

[6]程水明，程建华，周国钰.茯苓菌皮中茯苓多糖的提取工艺和结构分析[J].湖北农业科学,2009,48(10):36-39.

[7]聂金媛，吴成岩，吴世容等.微波辅助提取茯苓中茯苓多糖的研究[J].中草药,2004,35(12):1346-1348.

[8]张晓娟，唐洁，梁引库等.茯苓多糖的提取纯化及应用研究进展[J].时珍国医国药,2008,19(12):2946-2949.

[9]孔祥辉，张介弛，张丕奇等.黑木耳多糖提取与纯化[J].生物技术,2005,15(1):81.

[10]李玲.多糖的分离、纯化与分析[J].新疆工学院学报,1996,17(2):129.

[11]于村，丁钢强，俞莎等.保健食品中多糖测定的研究[J].中国卫生检验杂志,2000,10(3):281-282.

[12]刘丹.对多糖测定方法的探讨[J].四川文理学院学报,2008,18(2):49-51.

[13]韩玉莲，罗雪云.植物中多糖的测定[J].中国食品卫生杂志,1995,7(3):47-49.