PAI-1基因启动子区4G/5G基因多态性与复发性流产的关联性研究

PAI-1基因启动子区4G/5G基因多态性与复发性流产的关联性研究

李冉1付锦华2王伟伟3

李冉1付锦华2王伟伟3

（1潍坊医学院山东潍坊261042；2潍坊市人民医院山东潍坊261041)

(3平度市第二人民医院山东平度266731）

【摘要】目的探讨纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)基因启动子区-6754G/5G基因多态性与不明原因反复自然流产的关系。方法对50例复发性流产（研究组）及50例正常对照妇女（对照组），用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术，测定PAI-1基因启动子区-675处4G/5G基因及基因型。结果两组间PAI-1基因型分布存在差异，研究组中4G/4G基因型和4G基因明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。结论PAI-1基因启动子区4G/5G基因多态性与反复自然流产之间存在相关性，且4G/4G纯合基因型是导致复发性流产的易感基因型，临床检测PAI-1基因启动子区4G/5G基因多态性可帮助明确流产原因，早期治疗，提高妊娠成功率。

【关键词】复发性流产纤溶酶原激活物抑制物多态性

【中图分类号】R714.21【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2011）24-0182-02

复发性流产(RSA)是指与同一性伴侣连续发生2次或2次以上的自然流产，其发病率为1%[1]。发病原因涉及多个学科，妇产科、遗传科、免疫学、内分泌学等，至今仍有30-40%的复发性流产原因不明[2]。纤溶酶原激活物抑制物-1是纤溶系统的主要生理抑制剂，其水平升高可导致纤溶活性降低，促使血栓形成，是血栓性疾病的独立危险因素之一。有研究发现妊娠合并症妇女中的PAI-1水平明显高于正常妊娠妇女，且其基因型存在多态性，为探讨纤溶酶原激活物抑制物-1基因启动子区4G/5G基因多态性与不明原因复发性流产之间的关系，我们做了如下研究，现将结果报道如下。

1资料与方法

1.1研究对象选择2010年7月-2011年7月来潍坊市人民医院就诊的重复流产且现已妊娠患者50例（研究组），年龄在23-40岁之间，平均为29.1岁，流产次数在2-9次之间，其中流产2次21例，流产≥3次29例，流产时间在孕38天-3个月不等，平均为69天。研究组患者经筛查排除生殖器畸形、感染、宫颈机能不全、卵巢功能障碍、内分泌异常、免疫相关因素异常、母儿血型不合等。选取同期门诊就诊的正常妊娠妇女50例作为对照组，既往无流产史、胚胎停育史、胎儿生长受限及死胎史等，B超检查确定为早孕，查体为健康妇女且妊娠结局良好。两组患者孕前及孕后均未给予药物治疗，排除心、脑血管疾病、无高血压、糖尿病等病史，年龄、体重指数差异无统计学意义。

1.2方法标本采集：抽取患者空腹肘静脉血4ml，其中2ml注入抗凝EP管中，-20℃冰箱保存备用；其余2ml注入1:9枸椽酸钠抗凝管中，即刻(均在30min内)3000转(rpm)离心10min，收集上清液即血浆加入到EP管中，-80℃冰箱保存备用。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术，即经PCR扩增→限制性核酸内切酶消化→电泳→基因型读取，检测到3种基因型，4G/4G、4G/5G、5G/5G。

1.3统计学方法采用SPSS16.0统计软件处理，数据采用x2检验分析。

2结果

4G/4G、5G/5G、4G/5G三种基因型在研究组与对照组中的分布及4G、5G等位基因的分布采用行×列表资料的x2检验，对各种基因型频率和基因频率在各组中的构成比进行分析，其结果P均<0.05，三种基因型和两种等位基因在两组中的构成比之间差异具有统计学意义，说明4G/4G、5G/5G、4G/5G三种基因型与复发性流产之间存在一定的相关性；采用四格表的?2检验分析4G、5G基因的分布，结果P<0.05，说明4G基因在研究组的发病率明显高于5G基因。

3讨论

自然流产是妊娠期常见的并发症之一，其发病原因复杂，目前比较明确的原因有染色体的异常、抗磷脂抗体导致的流产、宫内感染、子宫畸形等，大部分妊娠丢失的原因仍无法解释，处于探索中。近年来易栓症的概念备受关注，是指由于遗传性缺陷和（或）获得性缺陷而使妊娠期容易发生血栓栓塞的状态，包括遗传性和获得性，这种血栓前状态不一定发生血栓性疾病，但可选择性影响子宫胎盘循环而导致胎盘的微血栓形成，胎盘循环障碍，妊娠本身是一种获得性的高凝状态，主要表现为生理性抗凝物质减少，促凝活性增加，纤溶活性降低，从而引发妊娠合并症的发生。

PAI-1是Brakman和Astrup于1963年首先在孕妇血中发现，是由379个氨基酸残基组成，分子量约为50ku的单链糖蛋白。妊娠后,胎盘与子宫肌层也可生成PAI-1。PAI-1是游离型单链t-PA快速的唯一抑制物,也是游离型双链t-PA的抑制剂。其作用机制是二者先形成可逆性的不稳定复合物，后演变成稳固的复合物，从而抑制纤溶酶的活性。

PAI-1基因启动子区4G/5G多态性指的是，在转录起始上游-675bp(5′端启动子区)处存在一个G的插入或缺乏，142bp是PAI-1基因的PCR产物，经Bsll酶切消化后将会出现不同的特异片段，产生3种基因型，即4G/4G型、5G/5G型、4G/5G型。Ericksson等研究证明，转录起始因子位点在4G、5G等位基因均存在，5G基因与抑制蛋白结合后，覆盖了阻遏蛋白与其相结合的位点，空间结构的改变后干扰了PAI-1转录水平，4G等位基因没有转录抑制抑制位点，4G基因转录水平较5G基因高6倍。本研究表明PAI-1基因启动子区基因多态性与复发性流产之间存在相关性，4G基因发病率高于5G基因，表明4G基因与5G基因相比，其与复发性流产的关系更为密切。在临床工作中，检测PAI-1基因分型有助于明确流产原因，早期治疗，提高妊娠成功率。

参考文献

[1]曹泽毅，主编．中华妇产科学．第2版．北京：人民卫生出版社，2005，98．

[2]EvelyneRey，SuanRKahn，etal.TheLancet，2003;361:901-908