HPLC法测定复方桔梗远志麻黄碱片Ⅰ中甘草苷及甘草酸的含量

HPLC法测定复方桔梗远志麻黄碱片Ⅰ中甘草苷及甘草酸的含量

王莉萍1胡莉1高红1韦祎2

王莉萍1胡莉1高红1韦祎2

（1重庆科瑞制药（集团）有限公司重庆400060）

（2重庆市中药研究院重庆400065）

【摘要】目的：建立高效液相色谱法测定复方桔梗远志麻黄碱片Ⅰ中甘草苷及甘草酸的含量。方法：色谱柱为Agilent5HC-C18，流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液（梯度洗脱），流速为1.0ml/min，甘草苷的检测波长为276nm、甘草酸的检测波长为250nm，柱温为30℃，进样量为20?l。结果：甘草苷和甘草酸的质量浓度分别在4.8274～43.4468、34.5511～310.9597?g/ml范围内与各自峰面积积分呈良好线性关系（r=0.9999、0.9999）；精密度、稳定性、重复性试验的RSD≤0.9%；甘草苷和甘草酸的平均加样回收率分别为99.6%、98.4%，RSD分别为0.9%、1.1%（n=6）。结论：本方法简便，准确，精密度好，适用于复方桔梗远志麻黄碱片Ⅰ中甘草苷及甘草酸的含量测定。

【关键词】高效液相色谱法；复方桔梗远志麻黄碱片Ⅰ；甘草苷；甘草酸；含量测定

【中图分类号】R927.2【文献标识码】B【文章编号】2095-1752（2015）22-0351-03

DeterminationofLiquiritinandGlycyrrhizicAcidinCompoundRadixPlatycodiPolygalaEphedrineTabletsⅠbyHPLC

WangLiping1，HuLi1，GaoHong1，WeiYi2

(1.ChongqingkeruiPharmaceuticalCroupCo.Ltd.，Chongqing400060)

（2.ChongqingAcademyofChineseMateria，Chongqing400065)

【Abstract】ObjectiveToestablishamethodforthecontentdeterminationofliquiritinandglycyrrhizicacidinCompoundradixplatycodipolygalaephedrinetabletsⅠbyHPLC.MethodsThedeterminationwasperformedonAgilent5HC-C18columnwithmobilephaseconsistedofacetonitrile-0.05%phosphoricacid(gradientelution)attheflowrateof1.0ml/min.Thedetectionwavelengthwassetat262nmforliquiritinand250nmforglycyrrhizicacid.Thecolumntemperaturewas30℃.Thesamplesizewas20?l.ResultsThelinearrangewere4.8274～43.4468?g/mlofliquiritin(r=0.9999),34.5511～310.9597?g/mlforglycyrrhizicacid(r=0.9999).RSDsofprecision,stabillityandrepeatabilitytestswere≤0.9%.Theaveragerecoverieswere99.6%(RSD=0.9%,n=6)and98.4%(RSD=1.1%,n=6).ConclusionsThismethodissimpleandaccuratewithgoodprecision.ItcanbeusedforthecontentsdeterminationofliquiritinandglycyrrhizicacidinCompoundradixplatycodipolygalaephedrinetabletsⅠ.

【Keywords】HPLCdeterminationCompoundradixplatycodipolygalaephedrinetabletsⅠLiquiritinGlycyrrhizicacidContentdetermination

复方桔梗远志麻黄碱片Ⅰ为镇咳祛痰类非处方药，用于咳嗽、多痰，也可用于喘息性支气管炎引起的咳嗽。该药是由盐酸麻黄碱、桔梗流浸膏、远志流浸膏、甘草浸膏、茴香油及辅料制成的复方制剂，其质量标准收载于《国家药品标准》化学药品地方标准上升国家标准（第十一册）（WS-10001-（HD-1083）-2002）[1]，原标准仅对盐酸麻黄碱进行了含量控制，为保证临床用药安全有效，本文对该品种的质量标准进行了提高研究，建立了同时测定其中甘草苷及甘草酸含量的方法。

1.仪器与试药

LC-2010CHT型HPLC仪（日本岛津公司）；KQ-500DV型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；MS205DU型电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；UPH-III型优普超纯水机（四川优普超纯科技有限公司）。

甘草苷对照品（批号：111610-201106）和甘草酸铵对照品（批号：110731-201116）购自中国食品药品检定研究院。乙腈为色谱醇；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。复方桔梗远志麻黄碱片Ⅰ（本公司自制，批号：835001、835002、835003）。

2.方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：Agilent5HC-C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈（A）-0.05％磷酸溶液（B），采用梯度洗脱，梯度洗脱程序见表1；流速：1.0ml/min；甘草苷检测波长：276nm；甘草酸检测波长：250nm；柱温：30℃；进样量：20μl。

表1梯度洗脱程序

2.2对照品溶液制备

精密称取甘草苷对照品12.88mg，置50ml量瓶中，用70%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为甘草苷对照品贮备液。再精密量取5ml，置50ml量瓶中，用70%乙醇稀释至刻度，摇匀即得。

精密称取甘草酸铵对照品94.70mg，置50ml量瓶中，用70%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为甘草酸铵对照品贮备液（甘草酸重量=甘草酸铵重量/1.0207）。再精密量取5ml，置50ml量瓶中，用70%乙醇稀释至刻度，摇匀即得。

2.3供试品溶液制备

取本品，研细，精密称取约1.5g，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇100ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250w，频率40kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4阴性对照溶液制备

按处方比例称取除甘草浸膏以外的其它物料，按制备工艺制成不含甘草浸膏的阴性供试品，按“2.3项”方法操作。

图1高效液相色谱图

A.对照品溶液（276nm）；B.阴性对照溶液（276nm）；C.供试品溶液（276nm）；

D.对照品溶液（250nm）；E.阴性对照溶液（250nm）；F.供试品溶液（250nm）

2.5方法学考察

2.5.1线性关系考察

精密量取“2.2项”的两种对照品贮备液各1ml、3ml、5ml、7ml、9ml，分别置50ml量瓶中，用70%乙醇稀释至刻度，摇匀。取不同浓度的两种对照品溶液20?l注入液相色谱仪，记录色谱峰面积。以峰面积A为纵坐标，浓度C（?g/ml）为横坐标，绘制标准曲线。甘草苷在4.8274～43.4468?g/ml浓度范围内与峰面积呈良好线性关系，回归方程：A=39850C-6865，r=0.9999；甘草酸在34.5511～310.9597?g/ml浓度范围内与峰面积呈良好线性关系，回归方程：A=17634C+45403，r=0.9999。

2.5.2精密度试验

取“2.2项”的对照品溶液，按“2.1项”色谱条件，连续进样6次，记录色谱图，甘草苷及甘草酸的峰面积RSD分别为0.3%和0.6%。表明本方法精密度好。

2.5.3稳定性试验

取同一供试品溶液（批号：835001），室温（25℃）放置，分别于0，1，2，4，8，12，16h时依法测定，记录色谱图，结果甘草苷和甘草酸的峰面积RSD分别为0.6%和0.9%。表明供试品溶液在16h内稳定。

2.5.4重复性试验

取同一批次复方桔梗远志麻黄碱片Ⅰ样品（批号：835001），按照上述方法平行试验6份，记录色谱图，甘草苷和甘草酸含量测定的峰面积RSD分别为0.5%和0.7%。表明本方法重复性好。

2.5.5加样回收率试验

精密称取已知含量的供试品（批号：835001）6份，每份约1.5g，按“2.3项”方法制备，各精密量取续滤液10ml，置20ml量瓶中，分别精密加入甘草苷对照品贮备液1ml和甘草酸铵对照品贮备液1ml，用70%乙醇稀释至刻度，摇匀。按“2.1项”色谱条件测定，计算回收率，结果见表2。

表2加样回收率试验结果（n＝6）

3.样品测定

取本公司自制的三批复方桔梗远志麻黄碱片Ⅰ，按“2.3项”方法制备供应品溶液，按“2.1项”色谱条件测定。结果见表3。

表3样品含量测定结果（n＝3）

4.讨论

4.1在200nm～400nm波长范围内扫描，甘草苷及甘草酸铵分别在276nm及250nm波长处有最大吸收。经查2010年版《中国药典（一部）》[2]及相关文献[3-5]，甘草苷及甘草酸铵均采用单一波长测定含量，由于单一波长不能使每个组分都在最大吸收处测定，检测灵敏性会受影响，因此利用HPLC检测器可同时检测双波长的功能，将甘草苷及甘草酸的检测波长均设定为各自的最大吸收波长。

4.2复方桔梗远志麻黄碱片Ⅰ中还含有桔梗流浸膏、远志流浸膏、茴香油这几种能发挥药理作用的有效成分，为保证患者用药安全有效，建议其质量标准中能增加相应的质量控制项目。

【参考文献】

[1]WS-10001-（HD-1083）-2002.国家药品标准·化学药品地方标准上升国家标准（第十一册）[S]．

[2]国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）[M]．北京：中国医药科技出版社．2010：376-377．

[3]邰顺章，袁步娟，黄柳燕.HPLC法测定复方桔梗止咳片中甘草苷和甘草酸含量[J].药学与临床研究，2014，02：115-117．

[4]柴彦，陆颖，任爱农.高效液相色谱法同时测定芩香颗粒中甘草苷和甘草酸的含量[J].海峡药学，2013，25（9）：86-88．

[5]周刚，吕庆红.高效液相色谱法测定甘勺颗粒中甘草苷和甘草酸的含量[J].中南药学，2013，11（3）：227-229．