关于青年动脉粥样硬化患者 microRNA 表达谱的研究

关于青年动脉粥样硬化患者 microRNA 表达谱的研究

姜倩倩 董爱芝

聊城市第二人民医院 山东省 聊城市 252601

【摘要】目的 检测在青年人群的动脉粥样硬化患者中 microRNA 的差异性表达谱。方法 随机选择健康查体的青年人60例，经动脉超声检查分出动脉粥样硬化组及非动脉粥样硬化组，每组各30 人。运用荧光定量PCR法检测这60名患者的microRNA的表达，绘制动脉粥样硬化患者的microRNA表达谱；进一步分析 microRNA 与动脉粥样硬化的相关性。结果 （1）在青年动脉粥样硬化人群，可以看到microRNA126、microRNA221、microRNA33、microRNA155、microRNA181b、microRNA222、microRNA21均有差异性表达。（2）和正常人相比，动脉粥样硬化人群中，microRNA126、microRNA221、microRNA33、microRNA155、microRNA181b下降；microRNA222、microRNA21明显升高，差异有明显的统计学意义(P<0.05)。结论 （1）在青年动脉粥样硬化及非动脉粥样硬化患者中，明显存在部分microRNA的差异表达；（2）microRNA21、microRNA33、microRNA126、microRNA221、microRNA222、microRNA155、microRNA181b在青年动脉粥样硬化患者中存在差异表达。

关键词 青年人；动脉粥样硬化；microRNA；表达谱

The study on the expression spectrum of microRNA in young patients with atherosclerosis

JIANG Qian-qian DONG Ai-zhi

【Abstract】Objective Detection the different expression of microRNA in the youth population of atherosclerosis patients. Methods Choice sixty young people who do the regular health physical examination.The atherosclerosis group and the non-atherosclerosis group were separated by arterial ultrasound examination. Each group had 30 people.The expression of microRNA in 60 patients was detected by fluorescence quantitative PCR method. Further analysis of the correlation between microRNA and atherosclerosis. Result (1)In young people with atherosclerosis, microRNA126, microRNA221, microRNA33, microRNA155, microRNA181b, microRNA222, microRNA21 all have difference expression. (2)Compared with normal people, microRNA126, microRNA221, microRNA33, microRNA155, microRNA181b decreased and MicroRNA222 and microRNA21 increased significantly in atherosclerosis population , and the difference was statistically significant(P<0.05). Conclusion (1)In young patients with atherosclerosis and non-atherosclerosis, there were significant differences in the expression of microRNA.(2)The expression of microRNA21, microRNA33, microRNA126, microRNA221, microRNA222, microRNA155, microRNA181b in young patients with atherosclerosis was different.

【Key words】 young people；atherosclerosis；microRNA；expression profile

目前动脉粥样硬化的发病率呈连续上升趋势，部分年轻人没有血脂异常、高血压、糖尿病等常见的危险因素，其动脉血管就已经出现了动脉粥样硬化。众多研究显示，microRNA在动脉粥样硬化的内皮形成、平滑肌细胞的迁移及增殖、巨噬细胞形成泡沫细胞、脂质代谢等过程中发挥着重要的作用。本文旨在测定青年动脉粥样硬化患者中microRNA的差异性表达谱，为进一步寻找动脉粥样硬化发生的始动因素提供依据。

资料与方法

研究对象，选择2014年8 月-2016 年6月在我院查体中心进行健康查体的年龄在35岁-44岁的青年人，通过血管超声（颈部、下肢及肾动脉等表现动脉超声检查）来确定已存在动脉粥样硬化的人，从中选择体重指数、血压、血糖、血脂、同型半胱氨酸等危险因素在正常范围内，且无大量吸烟、饮酒史的动脉粥样硬化患者30人，匹配相同情况的无动脉粥样硬化的青年人30例做对照组。

microRNA检测：取所有入组患者空腹外周静脉血，应用 SYBR Green 荧光定量 PCR，进行实时荧光定量 PCR测定荧光聚合链反应以及荧光 PCR 扩张技术检测 microRNA 的 Ct 值，采用相对定量方法计算 2-∆∆Ct 。将提取的 microRNA 使用 TLDA低密度芯片进行筛查实验。将筛查实验的结果输进 Data Assist 软件对原始 Ct 数据进一步分析，筛 选 出 存 在 差 异 性 表 达 的microRNA的表达谱。

统计分析：将所有数据值均输入 SPSS17.0 软件内进行统计学分析，数据中切合正态分布的数据，两组间比较可用两独立样本 t 检验，符合偏态分布的数据则采用秩和检验，符合计数资料的比较择应用卡方检验， P<0.05 则视为结果有明显的统计学意义。

结果

1.动脉粥样硬化患者外周循环中存在不同表达的microRNA的表达谱

经过微矩阵显著性分析软件包获得组件差异表达的microRNA共7个，其中microRNA21、microRNA33、microRNA126、microRNA221、microRNA222、microRNA155、microRNA181b均有差异性表达。（见下图）

表1 动脉粥样硬化组和非动脉粥样硬化组中microRNA检测结果

3.荧光定量PCR监测差异性microRNA的表达值

表2 动脉粥样硬化组与非动脉粥样硬化组差异表达的microRNA监测结果

结合此表显示实时荧光定量PCR监测相对定量的microRNA结果：采用2^-∆∆Ct 的相对定量法，以非动脉粥样硬化组表达水平为1，动脉粥样硬化组中microRNA21和microRNA222表达明显升高，P<0.05差异具有统计学意义；而microRNA33、microRNA126、microRNA221、microRNA155、microRNA181b表达水平均显著下降，且P<0.05差异具有统计学意义。

讨论

本研究以临床青年动脉粥样硬化患者为研究对象，检测其血浆中特异性表达的microRNA，其中有七种microRNA存在明显的差异性表达，且具有统计学意义。

microRNA21抑制血管的生成、促进内皮细胞的增殖、迁移。^【1-3】microRNA33通过促进HDL的生成、胆固醇自巨噬细胞流出、调节炎症反应，在动脉粥样硬化中起到促进作用。^【5】microRNA221/microRNA222可改变血管通透性，抑制细胞增殖及迁移。^【6】microRNA126可以抑制白细胞黏附、维持血管的完整、促进血管的生成。^【4】microRNA181b可以抑制内皮细胞激活、减轻炎症反应。^【7】microRNA155充分作用于单核巨噬细胞，影响着动脉粥样硬化的产生和进展。^【8】

因目前样本量较小，得出的结论可能会有些许的误差，且对microRNA尚无明确定论，对于动脉粥样硬化的发生、发展中特异性较小，目前具体的作用机制尚不能完全明确，还需进行大样本研究及随访观察。

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