锁阳肉质茎不同部位有效成分的含量差异研究

【摘要】  目的分析锁阳肉质茎不同部位儿茶素、熊果酸、多糖和鞣质含量的差异，以期为锁阳合理用药及人工优质栽培提供理论依据。方法根据锁阳生物学特征将肉质茎分为花序部、花茎接合部、茎上段、茎中段和茎下段5部分。用HPLC法测定儿茶素和熊果酸，硫酸-苯酚法测定多糖，络合滴定法测定鞣质的含量。结果锁阳肉质茎各段儿茶素、熊果酸和多糖的分布规律相似，3种成分的含量均以茎部较高，花序部较低，而鞣质含量的分布规律与此相反。结论锁阳肉质茎不同部位有效成分的累积和分布规律不同，应用锁阳时应根据用药目的合理选择入药部位。

【关键词】  锁阳； 肉质茎； 儿茶素；熊果酸； 多糖； 鞣质

　　Abstract：ObjectiveThe differences of the catechin, ursolic, polysaccharide, and tannide from the different segments of the succulent stem of Cynomorium songaricum Rupr. were assayed for using the drug appropriately and providing a theoretic basis for its quality artificial cultivating.MethodsThe whole succulent stem was pided into parts of inflorescence, inflorescence-stem joint, upper middle, middle，lower middle segments from top to bottom. The catechin, ursolic were determined by HPLC. The polysaccharide and tannide were determined by sulphoacid-phenol and complexometric titration methods respectively. ResultsThe distribution regulars of the catechin, ursolic, and polysaccharide from the different segments were the same as higher content in the stem than in the inflorescence, but the distribution regular of the tannide was the opposite. ConclusionThe accumulation and distribution regulars of the active components in the different segments of songaricum are different. We should distinguish the sample region when we control the quality or make use of the crude drug.

　　Key words： Cynomorium songaricum Rupr.;   Succulent stem;   Catechin;   Ursolic;   Polysaccharide；  Tannide
   
　　锁阳Cynomorium songaricum Rupr.为锁阳科锁阳属多年生全寄生草本植物，常寄生在蒺藜科白刺属植物的根上。锁阳分布于荒漠草原、草原化荒漠与荒漠地带，我国西部有丰富的锁阳资源，内蒙古是其主产地之一［1］。锁阳中主要含有黄酮类、萜类、甾体类、鞣质、多糖、挥发油及微量元素和氨基酸等成分［2］。根据其主要的药理作用，常艳旭等［3］认为锁阳中以儿茶素为代表的黄酮类，熊果酸为代表的三萜类，多糖与鞣质可以看作是指标性成分，并且对不同生育期几个主要成分的含量做了比较［4～6］，发现锁阳在出土期采收较好。锁阳完整肉质茎长约30～80 cm，肉质茎不同部位有效成分有无差异目前还未见报道。本文分析了锁阳肉质茎不同部位儿茶素、熊果酸、多糖和鞣质4类主要有效成分的积累规律，为合理选择用药部位并根据入药部位进行严格质量控制提供依据。

　　1  材料
   
　　LC-20A高效液相色谱仪（Shimadzu公司）,LC-20A泵，DAD紫外检测器，岛津色谱工作站；UV-2450型分光光度计(Shimadzu公司)；RE-52A型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；Allegra X-15R型离心机（Beckman公司）；SK7210LHG型超声波提取仪（上海科导超声仪器有限公司）。HPLC用甲醇为色谱纯，其他化学试剂均为分析纯。

   
　　锁阳于2006-05-05自采于内蒙古鄂尔多斯市杭锦旗独贵特拉镇，经内蒙古大学生命科学学院生物系陈贵林教授鉴定。完整肉质茎自然阴干。对整株锁阳按生物学特征从上到下分别分为花序部、花茎接合部、茎上段、茎中段和茎下段共5部分。各部位分别粉碎，过80目，置于硅胶干燥器中备用。

　　2  方法

　　2.1  锁阳肉质茎不同部位主要有效成分的测定

　　2.1.1  HPLC法测定锁阳儿茶素含量儿茶素色谱测定条件及方法依文献［7］略作改进。选择色谱柱为ZORBAX SB-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为0.04 mol·L-1枸橼酸溶液-N，N 二甲基甲酰胺-四氢呋喃(55∶8∶2)，流速1.0 ml·min-1，检测波长280 nm，柱温为35℃；进样量为20 μl。
   
　　分别取锁阳肉质茎不同部位样品粉末0.8 g，精密称定，置250  ml烧瓶中，加入95％乙醇150 ml，在75℃下回流提取2 h，过滤，取滤液，沉淀再重复提取2次，合并滤液，旋转蒸干。残渣用50%的甲醇溶解，于25 ml容量瓶中定容，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，置棕色瓶中即得供试品溶液，进样测定。

　　2.1.2  HPLC法测定锁阳熊果酸含量熊果酸测定条件及方法依文献［8］略作改进。选择色谱柱为SHIM-PACK VP-ODS C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相为甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(88∶12∶0.030∶0.056)，流速0.60 ml·min-1，检测波长为210 nm，柱温35℃；进样量20 μl。　分别取锁阳肉质茎不同部位样品粉末1ｇ，精密称定，加乙酸乙酯20 ml，在50℃下回流提取2.5 h，提取液在室温下5 000 r·min-1离心15 min，洗涤沉淀，再次离心，合并上清液，旋转蒸干，回收固体残留物，加甲醇溶解，定容至10 ml，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，即得供试品溶液，置于4℃冰箱保存，4 h内测定。

　　2.1.3  硫酸苯酚法测定锁阳多糖含量分别取锁阳肉质茎不同部位样品粉末1 g，精密称定，按料液比1∶20加水，94℃下水浴提取2 h，浸提液在室温下5 000 r·min-1离心5 min，去残渣，上清液加95 % 乙醇溶液使含乙醇量达到80 %以上，4 ℃下放置过夜，再次离心，沉淀用80%的乙醇洗涤2次，再用丙酮重复洗涤3次，48 ℃旋转蒸干，得粗多糖。粗多糖用蒸馏水溶解定容于100 ml 的容量瓶中，依文献［9］采用硫酸苯酚法测定其含量。

　　2.1.4  络合滴定法测定锁阳鞣质含量分别取锁阳肉质茎不同部位样品粉末5 g，精密称定，置于250 ml锥形瓶中,加50%丙酮40 ml,在40 kHz，25℃下超声提取1 h，提取液在4 000 r·min-1离心15    min，沉淀重复提取2次，合并上清液，定容至250 ml。从中准确移取100 ml，依文献［6］应用络合滴定方法进行测定。

　　2.2  数据统计方法 对各部位样品平行提取测定3次，数据用SPSS13.0作方差分析和组间比较。

　　3  结果

　　3.1  锁阳肉质茎不同部位儿茶素及熊果酸含量的差异见表1。

　　表1  锁阳肉质茎不同部位儿茶素和熊果酸含量的比较（略）

　　从表1可以看出，锁阳中儿茶素在茎中段、茎上段含量最高，分别超过花序部2.3倍和2.2倍，其次是茎下段和花茎接合部，花序部最低，花序部儿茶素含量显著低于其他各部位（P<0.01）。熊果酸在茎中段、茎下段含量最高，其次是茎上段，花茎接合部含量较低，花序部最低。茎上、中、下段熊果酸含量均显著高于花序部和花茎接合部（P<0.01），分别超过花序部的4.3，6.1，和5.9倍。
　　
　　3.2  锁阳肉质茎不同部位多糖及鞣质含量的差异见表2。

　　表2  锁阳肉质茎不同部位多糖和鞣质含量的比较（略）

　　从表2可以看出，锁阳中各部位多糖含量茎段明显高于花序部, 整株锁阳多糖的含量从上至下依次呈升高趋势，茎下段多糖含量超出花序部的1.0倍。经统计学分析，其他各部位多糖含量均显著高于花序部（P<0.01）。鞣质含量在花序部最高，显著高于其他部位（P<0.01），花序部含量超出茎中段1.5倍，其次是花茎接合部，茎下段鞣质含量也维持较低水平。
   
　　因此，锁阳肉质茎不同部位儿茶素、熊果酸、多糖的分布规律相似，均以茎段含量较高，而花序部含量偏低。而鞣质含量的分布规律与儿茶素、熊果酸、多糖明显不同，表现为花序部鞣质含量明显高于其他各部位。

　　4  讨论
   
　　从实验的测定结果看，锁阳肉质茎不同部位主要有效成分差别较大，因此药材质量检查时的取样部位对结果影响较大。而且锁阳4种有效成分的积累趋势并不相同，各成分含量在肉质茎不同部位的高低不能一概而论，这一研究结果为合理制定药材标准提供了理论依据。锁阳生长过程中在出土后花序部位继续成长成熟，而茎段逐渐枯萎腐烂。常艳旭等［4～6］已发现锁阳在出土期采收最好，各主要有效成分含量最高。由于花序中儿茶素、熊果酸、多糖的含量明显偏低，只有鞣质偏高，所以也进一步验证了锁阳在出土期或出土前期采收好于出土后期。

   
　　此外，据2005年《中国药典》［10］锁阳在采收和加工时“春季采挖，除去花序，切段，晒干”,因此锁阳在中医中入药时需除去花序。锁阳也为常用的蒙药，蒙药中常全草入药。锁阳肉质茎的茎段3种主要有效成分含量均比花序部明显偏高,因此认为《中国药典》的规定有一定道理，多数情况锁阳入药时除去花序效果更好，但由于鞣质含量在花序中更高，当以通便润肠、治疗溃疡病为主要功效入药时则不必除去花序。

【参考文献】
  ［1］ 马毓泉.内蒙古植物志［M］. 内蒙古：内蒙古人民出版社，1989：583.

　　［2］ 陶 晶，屠鹏飞.锁阳茎的化学成分及其药理活性研究［J］ .中国中药杂志，1999，24(5)：292.

　　［3］ 常艳旭，苏格尔.锁阳有效成分及指标性成分的探讨［J］ .现代中药研究与实践，2005，19(3)：55.

　　［4］ 常艳旭，苏格尔，王迎春.锁阳不同生育期儿茶素含量的动态研究［J］ .药物分析杂志，26(8)：1601.

　　［5］ 常艳旭，李 晋，苏格尔，等.锁阳不同生育期多糖含量的动态研究［J］ .内蒙古大学学报(自然科学版) ，2007，38（2）：237.

　　［6］ 常艳旭，苏格尔，尹诚国，等.锁阳不同生长期鞣质含量的动态研究［J］ .中药材,2005,2(8)：643.

　　［7］ 张思巨，刘 丽.高效液相色谱法测定锁阳中儿茶素的含量［J］ .中国药学杂志，2003，38（8）：578

　　［8］ 邸多隆,刘晔玮,毛晓春，等.反相高效液相色谱法测定锁阳中熊果酸含量［J］ .中国医院药学杂志，2004,24(12)：730.

　　［9］ 戚雁飞.灵芝中灵芝多糖的含量测定研究［J］ .中国中药杂志，2006，31(10)：852.

　　［10］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：241.