蒲黄高效液相色谱指纹图谱模式识别研究

【摘要】 　　目的建立蒲黄指纹图谱测定方法。方法采用反相高效液相色谱法，测定蒲黄指纹图谱，色谱条件：色谱柱为Shimadzu C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇-水（54∶46）；流速1.0 ml·min-1；检测波长254 nm；柱温25℃。结果建立了蒲黄指纹图谱标准。结论该指纹图谱方法简单、快速、重现性好，可作为蒲黄的一项质控指标。

【关键词】 蒲黄 指纹图谱 模糊模式识别

　　Abstract：Objective To establish the method of fingerprint in Typha angustifolia L. by HPLC．MethodsThe fingerprint was determined by HPLC. The analysis was carried out on Shimadzu C18 column(150 mm×4.6 mm,5μm).The mobile phase was MeOH-H2O (54∶46) with a flowrate of 1.0 ml·min-1at 254 nm and the seperation was performed at 25℃．ResultsThe standard of fingerprint in Typha angustifolia L. was established.ConclusionThe method is simple,quick and repeatable. It can be used in quality assessment of Typha angustifolia L..

　　Key words：Typha angustifolia L.； Fingerprint； Fuzzy pattern recognition

　　蒲黄为香蒲科植物水烛香蒲TyPha angustifolia L．，东方香蒲Typha orientalis Pres1或同属植物的干燥花粉，具有止血、化淤、通淋之功效［1］。常用于各种出血病症及心腹疼痛的治疗。现代药理研究表明蒲黄水提醇沉液具有明显的增加冠脉流量、降低心脑组织耗氧量、扩张血管、降低血脂及抗动脉粥样硬化等多方面活性。对蒲黄有效成分含量测定的文献［2］报道较多，迄今未见有关蒲黄指纹图谱的报道，作者对蒲黄指纹图谱进行了研究。现报道如下。

　　1 仪器与试药

　　岛津LC-6A高效液相色谱仪（LC-10ATVP泵，SCL-10AVP控制器，SPD-10AVP紫外检测器，CTO-10AVP柱温箱，CLASS-VP6.10数据工作站）。蒲黄 购于重庆市药材市场。

　　2 方法和结果

　　2.1 色谱条件的选择

　　参考文献［2］并经筛选确定其色谱条件为：色谱柱为Shimadzu C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水（54∶46）；流速1.0 ml·min-1； 检测波长254 nm；柱温25℃。　2.2 供试品溶液的制备分别称取经干燥粉碎的蒲黄1.0 g 3份，各加入20 ml甲醇液，超声提取30 min，过滤收集提取液，滤渣再各加15 ml甲醇液，超声提取20 min，重复提取2次，过滤收集提取液，合并3次提取液。将提取液减压浓缩干燥，残渣用甲醇超声溶解定容为5 ml，0.45 μm滤膜滤过，备用。

　　2.3 方法学考察与结果

　　2.3.1 专属性实验取空白溶剂与供试品溶液，分别在上述色谱条件下测定，结果空白溶剂不干扰测定（见图1～2）。

　　2.3.2 稳定性实验取蒲黄“2.2”项供试品溶液，在上述色谱条件下，分别于0，2，4，8，16 h进样10 μl，计算各主要共有峰的保留时间RSD为0.29%～0.94%，峰面积百分数RSD 为1.21%～1.77%，峰高百分数为1.01%～2.60%，即样品溶液在16 h内稳定。

　　2.3.3 精密度实验按“2.2”项方法制备蒲黄供试品溶液，连续进样5次（10 μl/次），计算各主要共有峰的保留时间RSD为0.46%～1.13%，峰面积百分数RSD 为 0.71%～1.23%，峰高百分数RSD为0.42%～1.73%，即该仪器精密度较高。

　　2.3.4 重现性实验按“2.2”项方法制备蒲黄供试品溶液6份，分别处理测定，计算各共有峰的保留时间的RSD 为0.82%～1.99%，峰面积百分数的RSD 为0.69%～1.44%，峰高百分数RSD为1.01%～2.47%，由此说明该方法重复性较好。

　　2.4 蒲黄样品指纹图谱模式标准的建立参考文献［3］，分别取10批不同批号的蒲黄，按供试品制备方法制备，在上述色谱条件下各进样10 μl，选择保留时间、峰面积百分数、峰高百分数为特征参数，计算各特征参数平均值，建立指纹图谱模式标准。结果见表1。表1 10批蒲黄指纹图谱标准（略）

　　2.5 样品测定与相似度计算取3批蒲黄，按“2.2”项方法制备样品，在相同色谱条件下测定，采用广义夹角余弦［4］，计算样品各共有色谱峰与标准模式中对应的色谱峰的相似度。结果3批样品中各共有峰相似度均大于0.9，表明各批样品有较好的相似性。结果见表2。表2 3批蒲黄相似度计算结果（略０

　　3 讨论

　　蒲黄为常用中药，文献仅有对蒲黄有效成分含量测定的报道，至今未见有对其指纹图谱的研究，本文对蒲黄多种特征参数，采用夹角余弦法［4］进行相似度计算，不仅可以从定性和定量角度评价中药指纹图谱，充分反映指纹图谱的整体性，而且还可较为直观地判断待测样品与模式标准的差异大小。

　　实验中曾用乙腈-水系统作为流动相，但分离效果不理想，出峰时间早，拖尾现象严重。经反复试验改用甲醇∶水（54∶46）为流动相，可达到理想的分离效果。

【参考文献】
　　［1］肖培根. 新编中药志（第Ⅱ卷）［M］. 北京：化学工业出版社，2002：807.

　　［2］高光耀，廖毛川，冯毓秀.中药蒲黄黄酮成分高效液相色谱测定及质量评价［J］.药学学报，1998，33（4）：300.

　　［3］郑一敏，胥秀英，傅善权. 葛根黄酮指纹图谱数据分析方法探讨［J］.中国中药杂志，2005，30（1）：70.

　　［4］楼世博，孙 章，陈化威，等. 模糊数学［M］.北京：科技出版社，1985：105.