高效液相色谱法测定乳核散结胶囊中淫羊藿苷的含量

【摘要】  　　目的建立乳核散结胶囊中淫羊藿苷的含量测定方法。方法采用高效液相色谱（HPLC）法，ODS C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），以乙腈-水（30∶70）为流动相，流速1.0 ml/min，检测波长270 nm。结果淫羊藿苷在10.92～65.52 μg·ml-1的进样浓度范围内与其峰面积呈良好的线性关系（r=0.999 9），平均回收率为99.30%（RSD=0.45%,n=6）。结论方法操作简便、灵敏、准确，可用于乳核散结胶囊的质量控制。

【关键词】  高效液相色谱；乳核散结胶囊；淫羊藿苷

　　Abstract:ObjectiveTo establish the content determination method of Icariin in Ruhe Sanjie capsules by HPLC. MethodsHPLC analysis was carried out at the following conditions: Cromasil C18 column（4.6 mm×250 mm,5 μm）, mobile phase:Acetonitrile-Water (v/v)=30:70,the detection wavelength at 270 nm,the flow rate at 1.0 ml·min-1. ResultsThe standard curve was linear over the range of 10.92～65.52 μg·ml-1 (r=0.999 9),and the average recovery was 98.30% with RSD of 0.45%(n=6);ConclusionThe method is simple,sensitive and accurate,and available for control of Ruhe Sanjie Capsules.

　　Key words:HPLC;  Ruhe Sanjie Capsules;  Icariin
   
　　乳核散结［1］胶囊具有舒肝解郁、软坚散结、理气活血的功效。全方由当归、黄芪、光慈姑、漏芦、柴胡、郁金、昆布、海藻、淫羊藿、鹿衔草10味药组成，临床用于治疗乳腺囊性增生、乳痛症、乳腺纤维腺瘤和男性乳房发育异常等。而该品种没有《中国药典》标准，部颁标准中也只有薄层定性鉴别，没有其主要有效成分的含量测定方法。其主要组成药物淫羊藿为小檗科科植物淫羊藿Epimedium brevicornum Maxim.、箭叶淫羊藿Epimedium sagittatum(Sieb. et Zucc.)Maxim.、柔毛淫秽羊藿Epimedium pubescens Maxim.、巫山淫羊藿Epimedium wushanense T.S.Ying、或朝鲜淫羊藿Epimedium koreanum Nakai的干燥地上部分，具有补肾阳、强筋骨、祛风湿等功效，《中国药典》2005版Ⅰ部已载有淫羊藿苷的含量测定方法。因此，建立高效液相色谱法测定乳核散结胶囊中主药淫羊藿的指征成分淫羊藿苷的含量就尤为必要。本实验采用HPLC法测定淫羊藿苷的含量，以期为乳核散结胶囊的质量控制和评价提供较为科学的依据。

　　1  仪器与试药

　　1.1  仪器 

　　岛津高效液相色谱仪(LC-10AVP泵、SPD-10AVP紫外检测器)；2010色谱管理系统。

　　1.2  试药 

　　淫羊藿苷对照品（110737-200312，中国药品生物制品检定所）；乳核散结胶囊（自制，批号20050915，规格0.4 g/粒）；超纯水；乙腈为色谱纯。

　　2 方法与结果

　　2.1  色谱条件色谱柱为ODS C18（SHIMADZU，4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相为乙腈-水（30∶70）；检测波长270 nm；体积流量1.0 ml/min；柱温为室温。

　　2.2  对照品溶液的制备精密称取于105℃干燥至恒重的淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.04 mg淫羊藿苷的溶液，即得。　2.3  供试品溶液的制备取本品内容物0.1 g，精密称定，置50 ml具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇20 ml，密塞，称定重量，超声处理1 h，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀离心，上清液用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液作为供试品溶液。

　　2.4  专属性实验取淫羊藿苷对照品、乳核散结胶囊供试品溶液、不含淫羊藿的空白溶液，依法进样测定，结果在淫羊藿苷保留时间处无干扰峰影响（对照品、供试品和阴性图谱见图1～3）。

　　2.5  线性关系的考察精密称取淫羊藿苷对照品10.92    mg，置100 ml量瓶，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 ml对照品母液到10 ml容量瓶，加甲醇稀释至刻度，摇匀。再分别精密吸取20 μl注入液相色谱仪，记录色谱图。以淫羊藿苷的峰面积为纵坐标，进样浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y =22 534+1 293.6X, r=0.999 9。淫羊藿苷在10.92～65.52 μg·ml-1的进样浓度范围内，与峰面积呈良好的线性关系（线性回归曲线见图4）。

　　2.6  精密度实验精密吸取乳核散结胶囊供试品溶液20 μl，连续进样6次，结果淫羊藿苷的平均峰面积为955 523，RSD为0.94%（n=6）。

　　2.7  稳定性实验取样品制备供试品溶液，分别于0，2，4，8 h 进样20μl，进行稳定性考察，结果RSD为0.12%。表明8h供试品溶液内的淫羊藿苷稳定。
2.8  重复性实验取同一批样品，精密称取5份，按正文方法制备供试品溶液，在相同色谱条件下进行实验，结果淫羊藿苷的平均含量为2.47 mg/粒，RSD为0.19%。

　　2.9  加样回收率实验精密称取6份已知含量的样品（批号20050915，含量为2.47 mg/粒，平均粒重为0.402 2 mg/粒）各0.05 g，精密加入淫羊藿苷对照品溶液（0.109 2 mg/ml）6.0 ml，按样品含量测定项下的方法操作，记录色谱图，计算加样回收率。结果见表1，其平均回收率为99.30%，RSD为0.45%（n=6）
表1  回收率实验结果（略）

　　2.10  样品含量测定取3批样品各0.1 g，精密称定，依法制成供试品溶液，均以20μl进样，分别测定吸收峰面积，以外标法计算淫羊藿苷含量。结果见表2。表2  样品含量测定结果（略）

　　3 讨论

    在提取条件的筛选中，采用了50%甲醇、稀乙醇［2］、95%乙醇分别进行超声处理1 h的比较，指标成分测定结果差异很小。考虑到溶剂毒性，所以选择了稀乙醇超声提取。

    实验采用HPLC法能达到有效分离各组分的目的，且阴性对照实验证明在色谱峰处其他成分无干扰。本法具有灵敏度高、操作简单、分离效果好等优点，可作为乳核散结胶囊的含量测定质量控制标准。

【参考文献】
  　　［1］中华人民共和国卫生部药品标准WS3-B-3423-98［S］.

　　［2］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：229.