伞形科3种维药材蛋白电泳的鉴别

【摘要】 　　目的准确地鉴别伞形科果实类药材。方法应用聚丙稀酰胺电泳技术，对3种外形相似的果实类药材进行了可溶性蛋白质的电泳分析。结果电泳图谱清楚地显示出各样品的特征带，从而能准确区别各种药材。结论该方法操作简便，重复性好，各样品间可比性强，能起到准确鉴别药材的目的。

【关键词】 伞形科 聚丙烯酰胺 蛋白电泳

　　Abstract:ObjectiveTo identify Umbelliferous fructification herbs.MethodsThe Gel-electrophoresis technology was used to analyze the umbeelliferous herbs. ResultsThere are differences on grades,regions and quantities among patterns of Trechyspermum ammi L.Cuminvm cyminvm L. and Cvminvm vernum L. . ConclusionThe method of Gel-electrophoresis is easy and effective for identification of umbelliferous fructification herbs.

　　Key words:Trachyspermum ammi L.; Cuminvm cyminvm L.; Polypropylene acyl amic ; Albumen electrophoresis.

　　伞形科药材的果实是双悬果，外形极相似且小，肉眼难以识别，组织结构也极相似。为了鉴别真伪，保证临床用药的安全有效，本实验运用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，对伞形科3种果实类药材进行可溶性蛋白质的电泳分析。现报道如下。

　　1 器材

　　阿育魏实及孜然与野孜然均由维吾尔医医院鉴定并提供（见表1）。表1 样品来源（略）

　　1.1 仪器

　　DYY-6B型稳压稳流电泳仪；真空干燥器；DYCz-28A型电泳槽；800型离心沉淀器；SBZ200型超声洗脱仪；WD-9405A型脱色摇床；微量进样器。

　　1.2 试剂丙烯酰胺（Acr）、甲叉双丙烯酰胺(Bis)、三羧甲基氨基甲烷（Tris）、四甲基乙二胺（TEMED）、盐酸、过硫酸胺、甘胺酸、溴酚蓝、考马斯亮蓝R250、甲醇、醋酸。

　　1.3 试剂配制［1］分离胶缓冲液、分离胶贮液、过硫酸铵溶液、浓缩胶缓冲液、四甲基乙二胺溶液、电极缓冲液、溴酚蓝指示液、染色液、脱色液。

　　调整分离胶使T=67.74%，C=2.875%。2 方法

　　2.1 样品制备［1，2］称取阿育魏实及孜然与野孜然各0.5 g，加入稀释4倍的浓缩胶缓冲液，充分研磨成匀浆，超声提取10 min（37℃，功率100%）；离心20 min（3 500 r/min），取上清液供点样用。

　　2.2 电泳操作安装好胶板，于上下电泳槽中注入电极缓冲液；用微量进样器每孔进样20 μl；再加10 μl的溴酚蓝指示跟踪，电泳开始时，维持电流13 mA，待样品进入分离胶后，电流加大到25 mA，整个电泳过程维持电流强度不变，待指示剂行至末端1 cm时，即可停止电泳。

　　2.3 染色与脱色小心取下胶板，放入0.2%考马斯亮蓝R250染色液中，在37℃恒温下染色1 h，再用含20%甲醇和7%醋酸的脱色液，在37℃恒温脱色，不断更换脱色液直至背景为无色。

　　3 结果

　　依照样品谱带的Rf值、形态、着色深浅绘制谱图（见图1）。

　　根据样品谱带的形状和着色程度将谱带分为5级，按谱带泳动速度快慢将电泳图谱分为：A区（Rf<0.36）、B区（Rf<0.69）、C区（Rf≥0.69）。见表2。表2 伞形科3种维药材蛋白电泳谱带分级（略）

　　由图谱可见同科植物的果实显示出一些相似的谱带（如A1，B2），同时因为种的不同，各种间的谱带区也很明显（如阿育魏实和野孜然在B区和C区都没有特征谱带，而孜然在B区和C区都有一条特征谱带），而且其在谱带的级别、分布区域及数量上均有明显的区别，总之各种间谱带特征明显，可比性强（经5次重复实验结果稳定一致，r≥99.5%），为准确鉴别伞形科植物提供了可靠的依据。

　　4 讨论

　　蛋白电泳法鉴别药材，是以由基因控制的蛋白质分子为标
准，从分子水平上去比较和分析，专属性强、分辨率高、重复性好，尤其为外形相似和亲缘关系相近的药材鉴别，提供了一种新的有效的鉴别手段，较传统的鉴别法先进一步。

【参考文献】
　　［1］袁晓华，杨中汉. 植物生理生化实验［M］.北京:高等教育出版社,1983：233,57.

　　［2］赵丽英，陈永林，苋科6种种子类药材的蛋白电泳鉴别［J］.中国中药杂志，2000，25（1）：53.