高效液相法测定复方大黄痔疮栓中大黄素大黄酚的含量

【摘要】 　　目的建立一种反相高效液相色谱法测定复方大黄痔疮栓中大黄素、大黄酚含量的方法。方法色谱柱为Kromasil C18（250 mm ×4.6 mm，5 um），以甲醇－1%磷酸（85∶15）为流动相，流速为1.0 ml·min-1,检测波长为254 nm。结果大黄素、大黄酚分别在0.003 944～0.039 44 μg，0.008 128～0.081 28 μg间有良好的线性关系，回收率分别为100.5%及96.6%，RSD分别为0.01%及1.16%（n＝6）。结论该方法简单、灵敏度高、重现性好，可用于复方大黄痔疮栓中大黄素、大黄酚的含量测定。

【关键词】 复方大黄痔疮栓 大黄酚 大黄素 高效液相色谱

　　Abstract:ObjectiveTo establish an HPLC method for determination of the contents of emodin and chrysophanol in Dahuangzhichuang suppository. MethodsThe Thermo Kromasil C18 column was used.The mobile phase was CH3OH-H2O 0.1%phosphorie acid solution(85∶15)，the flow rate was 1.0 ml·min-1 and the detection wavelength was at 254nm.ResultsThe linear ranges of emodin and chrysophanol were at 0.003 944～0.039 44 μg (r=0.999 9) ，and 0.008 128～0.081 28 μg（0.999 9）,the average recoveries were 100.5%(RSD=0.01%,n=6) and 96.6%(RSD=1.16%,n=6), respectively.ConclusionThe method is reliable and accurate.

　　Key words:Dahuangzhichuang suppository； Emodin； Chysohanol； RP-HPLC

　　复方大黄痔疮栓主要由柿蒂、大黄、芒硝、田螺壳（炒）、橄榄核（炒炭）、冰片等中药组成，具有清热通便、止血、消肿止痛、收敛固脱之功效。用于各期内痔、混合痔之内痔部分，轻度脱垂等。制剂中成分较复杂，本文采用高效液相色谱法测定其中大黄中大黄素、大黄酚的含量，探讨该方的质量控制方法，为制剂的质量保证奠定了基础。

　　1 仪器与试药

　　Agilent 1100高效液相色谱仪，紫外检测器，四元梯度泵N2000色谱工作站（浙江大学智能信息研究所）；BP211D电子分析天平（西德SARTORIOUS）。

　　甲醇为色谱纯，水为双蒸水，其它试剂均为分析纯。大黄素、大黄酚对照品（中国药品生物制品鉴定检验所提供，批号分别为：0756-200211，110796-200310）。

　　2 方法与结果［1］

　　2.1 色谱条件

　　色谱柱为Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇-0.1磷酸（85∶15）；检测波长254 nm；流速1.0 ml·min-1；柱温25℃。

　　2.2 对照品溶液及供试品溶液的制备

　　精密称取大黄素、大黄酚对照品各约5 mg，分别置50 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密量取大黄素1 ml，大黄酚2 ml，置25 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（大黄素3.944 μg ·ml-1，大黄酚8.128 μg·ml-1）。

　　取本品10粒，精密称定，切碎，混匀，取约一粒重，精密称定，置锥形瓶，精密加入甲醇50 ml，称定重量，加热回流1 h，冰水浴冷却，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 ml，置50 ml圆底烧瓶中，蒸干，加2.5 mol/L硫酸溶液10 ml，超声处理5 min，再加氯仿10 ml，加热回流1 h，冷却，移置分液漏斗中，用少量氯仿洗涤容器，并入分液漏斗中，分取氯仿层，酸液用氯仿提取3次，8 ml/次，合并滤液，以无水硫酸钠脱水，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，并定容置10 ml量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

　　2.3 线性范围的考察

　　精密吸取上述对照品溶液,分别进样1，2，4，6，8，10 μl，按上述色谱条件测定峰面积，并以峰面积（A）对进样量（C）进行回归，得标准曲线

　　大黄素：A=3 525.39C-1.786 r=0.999 9

　　大黄酚：A=5 134.99C-5.086 r=0.999 9

　　表明大黄素在0.003 944～0.039 44 μg范围内线性关系良好；大黄酚在0.008 128～0.081 28 μg范围内线性关系良好。　2.4 精密度实验

　　精密吸取上述对照品溶液重复进样5次，5 μl/次，测定大黄素、大黄酚的峰面积，其相对标准偏差RSD为0.89%,表明仪器精密度良好。

　　2.5 稳定性实验

　　取同一供试品溶液10 μl，按上述色谱条件测定5次，间隔2 h/次，其相对标准偏差RSD为1.24%，结果RSD分别为1.28%，1.26%。表明样品在8 h内稳定。

　　2.6 阴性对照实验

　　按处方比例配制不含大黄的阴性样品，按照含量测定方法进行测定，结果见图1，表明其它组分对测定无干扰。

　　2.7 重复性实验

　　按拟定的含量测定方法，对同一批样品（批号041802）分别制备5份供试品溶液，分别测定大黄素、大黄酚的含量，结果RSD＝1.34%，表明方法重现性良好。结果见表1。表1 重复性实验结果（略）

　　2.8 加样回收率实验

　　取取以知含量的供试品（批号041802）10粒，切碎，混匀，取约半粒重量，精密称定，置锥形瓶中，精密加入适量对照品溶液，精密加入甲醇50 ml，按上述方法制样并进行测定，平行做6组，回收率分别为100.5%和96.6%。结果见表2～3。表2 大黄素回收率实验结果（略）表3 大黄酚回收率实验结果（略）

　　2.9 样品测定

　　分别精密吸取对照品溶液5 μl与供试品溶液10 μl进样，按上述色谱条件测定。结果见表4。表4 样品含量测定结果（略）

　　3 小结

　　本品为多种中药配伍制成的中药复方制剂，成分较为复杂，且制样过程中基质——混合脂肪酸甘油酯较难去除，本试验采用冰水浴冷却过滤的办法除去基质并取得了较好的效果，再采用高效液相色谱法测定方中君药大黄的主要成分大黄素、大黄酚的含量，方法简单可行、灵敏度高，重现性好，结果准确，可用于该栓剂的质量控制。

【参考文献】
　　［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：17.