克林霉素诱导实验在阳性球菌药敏实验中的应用

【摘要】目的 探讨阳性球菌中红霉素诱导克林霉素耐药性的发生情况，合理指导临床用药。方法 MIC法检测某院579株阳性球菌对克林霉素和红霉素的耐药情况;双纸片法检测可诱导克林霉素耐药。结果 金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性球菌及β溶血链球菌对红霉素和克林霉素同时耐药率分别占76.5%、50.8%、48.0%。在红霉素耐药而克林霉素敏感的菌株中，D实验阳性分别占65.0%、41.0%、34.0%。在红霉素敏感株中未见克林霉素诱导性耐药。结论 临床微生物实验室应加强可诱导克林霉素耐药性的检测，指导临床有效合理的使用抗生素。

　　【关键词】革兰阳性球菌；红霉素；克林霉素；D实验

　　The amplication of clisdamycin induction test in clinical microbiology susceptiability laboratories

　　【Abstract】 Objective To investigate the resistance of erthromycin and clidamycin in Gram-positive coccus and help to reasonably use clindamycin. Methods Use of MIC to detect 578 isolates randomly collected from January to September in our hospital, double antimicrobial agents detect the clidamycin induce test.Results Co-resistance to erythromycin and clindamycin accounted for 76.5%,50.8%,48.0% in Staphylococcus aureus,coagulase-negative coccus and beta-hemolylic streptococcus.Among the 129 eryRcliS isolates,the rate of inducible resistance to clindamycin (D-test positive) was 65.0%,41.0%,34.0% respectivelly.For all the eryScliS isolates,clisdamycin induce test are negative.Conclusion The detection of inducible clindamycin resistance must be stressed in clinical microbiology laboratory to provide good support for rational antibiotic therapy.

　　【Key words】Gram-positive coccus;erythromycin;clindamycin;D-test

　　大环内酯类抗生素作用于细菌核糖体50S大亚基，抑制细菌蛋白质合成，从而导致细菌死亡。靶位点的改变是葡萄球菌对大环内酯类、林可霉素类、链阳菌素B等抗生素获得性耐药的主要机制，并对MLSB(大环内酯类、林可霉素类、链阳菌素B等抗生素)抗生素表现为交叉耐药［1,2］。MLSB耐药分为固有耐药和诱导耐药。若诱导耐药则常规药敏实验表现为红霉素耐药而克林霉素敏感，用双纸片法进行D实验时可见克林霉素抑菌圈靠近红霉素一侧出现弯曲的“D”形状，尽管在缺乏诱导剂时细菌表现对克林霉素的敏感，但临床用克林霉素治疗无效。其耐药机制可归结为由msrA基因编码的泵出机制，核糖体可诱导变异，核糖体结构变异［3］。本实验通过双纸片法检测可诱导克林霉素耐药的发生情况，提示可诱导克林霉素耐药实验的必要性，现将实验结果报告如下。

　　1 材料

　　1.1 细菌来源

　　收集某院2005年1～9月分离的阳性球菌579株（其中金黄色葡萄球菌272株，凝固酶阴性球菌132株，β溶血链球菌175株）。

　　1.2 抗菌药物纸片

　　红霉素、克林霉素购于杭州天和微生物试剂有限公司。Mic法所用微生物生化、药敏卡购于湖南天地人生物试剂有限公司。

　　1.3 培养基

　　Mueller-Hinton(M-H)琼脂培养基购于上海博塞科技发展有限公司。

　　1.4 质控菌株

　　金黄色葡萄球菌ATCC25932、金黄色葡萄球菌ATCCBAA——977（阳性对照），金黄色葡萄球菌ATCCBAA-976（阴性对照）。

　　2 方法

　　2.1 利用MIC测定法规［4］

　　采用获卫生部批准的湖南天地人公司生产的生化药敏实验卡进行。2.2 双纸片扩散法［5,6］

　　据2004年NCCLS推荐在MH琼脂平板上，分别贴红霉素(15μg/片)和克林霉素（2μg/片）纸片。两种纸片距离分别选用15mm、26mm，35℃培养16～18h。用常规法取2纸片边缘距离，若靠近红霉素纸片处克林霉素纸片抑菌圈缩小或呈“D”形状，则显示为诱导型耐药。

　　2.3 统计学方法

　　利用SAS8.2软件对实验结果进行χ2检验。

　　3 结果

　　见表1。对克林霉素未进行“D”实验耐药率与“D”实验后合计耐药率进行χ2检验，P＜0.05，差异有显著性。表1 红霉素、克林霉素药敏结果及D试验统计分布（略）注：ESCLS 红霉素、克林霉素均敏感；ERCLR 红霉素、克林霉素均耐药；ERCLS 红霉素耐药、克林霉素敏感

纸片间距分别为15mm和26mm时诱导克林霉素耐药的发生情况分布见表2。表2 两纸片间距诱导克林霉素耐药的发生情况分布（略）

　　在15mm和26mm时,阳性检出率经χ2检验，P＞0.05,D实验结果差异无显著性。

　　4 讨论

　　本实验结果显示金黄色葡萄球菌可诱导克林霉素耐药的发生率为65%，较凝固酶阴性球菌（41%）和β溶血链球菌（34%）高，由579株阳性球菌对克林霉素耐药性的分布情况可知，红霉素敏感株中未出现克林霉素诱导耐药，而红霉素耐药株中，克林霉素耐药株也较多，且固有耐药株占大部分，诱导耐药株也有相当比例。总体耐药性与固有耐药性之间的差异有显著性意义，故有进行“D”实验的必要性。纸片扩散法测定时，抑菌圈结果于两纸片间距在15mm时较26mm略明显；但差异无显著性；D实验被用于临床实验室检测红霉素对克林霉素的诱导耐药性，简单易行。能很好的避免不恰当的使用克林霉素导致治疗的失败。目前微量稀释法和机器法药敏尚不能检出此种诱导耐药，如不做实验，则不能正确报告。所以临床微生物实验室应加强克林霉素诱导耐药性的检测，以保证克林霉素耐药性检出的准确性，指导临床医生合理使用抗生素。

　　【参考文献】

　　1 赵先颖，徐元宏，江晓平.医院感染葡萄球菌菌种变迁与耐药近况.中国微生态学杂志，2003，1：40-43.

　　2 李智山.葡萄球菌医院感染及耐药谱分析.中华医院感染学杂志，2004，14(6)：691-693.

　　3 沈定霞，罗燕平，徐雅萍，等.葡萄球菌对红霉素和克林霉素的诱导耐药性研究.中华检验医学杂志，2005，18(4)：400-403.

　　4 NCCLS.Performance standards for antimicrobial susceptibility testing(S).14th informational supplement M100-S14，2004，24:40-47.

　　5 应春妹.双纸片法检测克林霉素诱导耐药性.中华抗感染化疗杂志，2005，3：171-173.

　　6 周小梅.葡萄球菌中诱导型克林霉素耐药观察分析.深圳中西医结合杂志，2005，1(3)：132-135.