CD204阴性人脂肪来源细胞体外成软骨潜能的初步研究

(整期优先)网络出版时间:2012-01-11
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目的比较CD204+和CD204-两种人脂肪来源细胞的干细胞特性和体外诱导成软骨的能力。方法分离培养人脂肪来源细胞并进行流式细胞分选.分别获得CD204+和CD204-两种细胞。将这两种细胞培养扩增至第2代,观察其形态学特点:成脂、成骨定向诱导分化,油红O染色、茜素红染色定性;同时将两种细胞进行pellet成软骨诱导分化,比较体外诱导成软骨的能力.并以HE、SafraninO和Ⅱ型胶原免疫组化染色等进行鉴定。结果经流式细胞分选,脂肪来源细胞中CD204表达15日性串约为10%。分选后的CD204+和CD204-细胞均呈成纤维细胞样贴壁生长.但CD204-细胞具有更强的增殖能力。成脂诱导10d后.曲组细胞油红0染色均可见胞浆内有大量红染脂滴,但CD204+细胞具有更强的成脂潜能。成骨诱导2周后.曲组细胞芮素红染色均可见钙结节红染.而CD204-细胞具有更强的成骨潜能。同时,细胞Dellet成软骨诱导4周后,人体观可见CD204细胞组pellet形成白色透明样软骨成分.而CD204+细胞组pellet外观微黄。HE和Ⅱ型胶原免疫组化染色均妊示CD204组pellet可见成熟软骨陷窝形成.Safranin0染色显示CD204-组软骨特异性细胞外基质沉积:而CD204+细胞组peliet则呈纤维化改变。结论脂肪组织来源的CD204-细胞具有干细胞的生物学特点.且有良好的成软骨潜能,可以成为软骨组织工程良好的种子细胞来源。