简介：摘要目的探讨miRNA-143-3p对瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblasts, KFB)增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法分离培养KFB和正常皮肤成纤维细胞(normal skin fibroblast，NFB)，RT-qPCR法检测KFB和NFB中miRNA-143-3p和整合素β5(integrin β5, ITGB5)的mRNA表达水平，Western blot检测ITGB5的蛋白质表达水平。MTT法、Transwell法、RT-qPCR和Western blot检测过表达miRNA-143-3p或抑制ITGB5表达对KFB细胞增殖、迁移和侵袭及相关蛋白质表达的影响。双荧光素酶报告基因试验验证miRNA-143-3p和ITGB5的靶向关系。结果与NFB相比较，KFB中miRNA-143-3p表达下调，ITGB5的mRNA和蛋白质表达水平上调。过表达miRNA-143-3p或抑制ITGB5表达均抑制了KFB的增殖、迁移和侵袭。miRNA-143-3p可负向调控ITGB5表达，ITGB5过表达逆转了miRNA-143-3p过表达对KFB增殖、迁移和侵袭的作用。结论miRNA-143-3p通过下调ITGB5表达抑制KFB的增殖、迁移和侵袭。

简介：摘要目的观察长链非编码RNA（lncRNA）钾电压门控通道亚家族Q成员1反向转录物1（KCNQ1OT1）和微小RNA（miR）-146a-3p在子痫前期（PE）胎盘组织中的表达，并初步探索两者相互调控后对滋养细胞生物学特性的影响及作用机制。方法（1）选择2017年7月—2018年7月在海南省人民医院住院的PE孕妇45例为PE组，选择同期正常孕妇55例为对照组，采用实时荧光定量PCR技术检测两组胎盘组织中KCNQ1OT1 mRNA、miR-146a-3p的表达，并分析两者的相关性。（2）采用绒毛膜滋养细胞层细胞系HTR8/SVneo细胞，先分为空白对照组和脂多糖（LPS）组，经LPS处理24 h的HTR8/SVneo细胞再进一步分为短发夹状RNA（sh）-KCNQ1OT1组（即沉默KCNQ1OT1的表达）、miR-146a-3p抑制物（inhibitor）组和sh-KCNQ1OT1+miR-146a-3p inhibitor组，共5组。应用生物信息学软件预测KCNQ1OT1和miR-146a-3p的靶向关系，并采用双荧光素酶报告基因实验加以验证；分别采用活细胞计数（CCK-8）法、划痕实验、穿膜（transwell）小室实验检测HTR8/SVneo细胞的增殖、迁移、侵袭能力，实时荧光定量PCR技术检测细胞中KCNQ1OT1 mRNA、miR-146a-3p的表达，蛋白印迹（western blot）法检测细胞中趋化因子12（CXCL12）和趋化因子受体4（CXCR4）蛋白的表达。结果（1）PE组胎盘组织中KCNQ1OT1 mRNA的表达水平低于对照组（分别为0.23±0.03、0.51±0.04），miR-146a-3p的表达水平高于对照组（分别为0.49±0.03、0.31±0.03），两组分别比较，差异均有统计学意义（P<0.05）；PE组胎盘组织中KCNQ1OT1 mRNA的表达水平与miR-146a-3p的表达水平呈负相关（r=-0.79，P=0.031）。（2）生物信息学软件预测并经双荧光素酶报告基因实验验证显示，KCNQ1OT1与miR-146a-3p存在靶向关系。与空白对照组相比，LPS组细胞中KCNQ1OT1 mRNA的表达水平下降（分别为0.91±0.03、0.35±0.03），miR-146a-3p的表达水平升高（分别为0.22±0.03、0.63±0.04），细胞的增殖、侵袭、迁移能力及CXCL12、CXCR4蛋白的表达均下降，分别比较，差异均有统计学意义（P<0.05）；sh-KCNQ1OT1组细胞中KCNQ1OT1 mRNA的表达水平（0.23±0.03）进一步下降，miR-146a-3p的表达水平（0.85±0.03）进一步上升，细胞的增殖、侵袭、迁移能力及CXCL12、CXCR4蛋白的表达均进一步下降，分别比较，差异均有统计学意义（P<0.05）；而miR-146a-3p inhibitor组、sh-KCNQ1OT1+miR-146a-3p inhibitor组分别与sh-KCNQ1OT1组比较，KCNQ1OT1 mRNA的表达水平（分别为0.78±0.04、0.50±0.03）升高，miR-146a-3p的表达水平（分别为0.42±0.03、0.46±0.03）下降，细胞的增殖、侵袭、迁移能力及CXCL12、CXCR4蛋白的表达均增高，分别比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论KCNQ1OT1负调控miR-146a-3p的表达，激活CXCL12/CXCR4信号通路后，可促进滋养细胞的增殖、迁移和侵袭，可能参与了PE的发病。

简介：

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简介：摘要目的探索可能影响肾脏衰老的相关基因，并验证时钟基因Arntl在衰老肾脏中的表达变化。方法通过全转录组测序鉴定C57BL/6雄性24月龄小鼠（衰老组）和3月龄小鼠（年轻组）的差异表达基因，并通过生物信息学方法分析其所富集的生物学通路及关键蛋白。应用实时荧光定量PCR和Western印迹验证Arntl的mRNA及蛋白表达量。结果（1）全转录组测序结果显示在C57BL/6衰老组小鼠及年轻组小鼠中共筛选出119个显著差异表达基因。差异表达基因主要富集于节律过程、昼夜节律、基因表达的昼夜调控等生物学过程（均P<0.001）。蛋白质互作网络分析结果显示，Nfil3、Hspa8、Arntl、Hlf、Rorc、Per3、Npas2等是差异表达基因中的关键蛋白。时钟基因Arntl、Nfil3、Npas2、Per3在衰老组及年轻组小鼠之间的mRNA表达差异（均P<0.05）与测序结果一致。（2）相较于C57BL/6年轻组小鼠和SAMR1快速老化小鼠，Arntl蛋白表达量在衰老组小鼠和SAMP8快速老化小鼠肾脏组织中均有下降趋势。结论时钟基因及其参与的昼夜节律生物学通路可能在肾脏衰老过程中发挥重要作用。Arntl在衰老肾脏中表达量有下降趋势。

简介：真核生物的基因表达需要经历染色质结构活化、DNA复制、转录起始及转录、翻译及翻译后加工等过程，这些过程同时也成为基因表达的调控点。本文在染色质、DNA、RNA三个层面阐述了真核生物基因表达调控的特点，以及其在基因水平防治肾脏疾病方面的意义。

简介：本文概述了epigenetics的发展过程及其成京.Epigenetics指的是基因表达改变的遗传物质变化,包括基因组和染色质（含组蛋白）的化学修饰,如DNA甲基化、乙酰化等等.其中甲基化所引起epigenetics异常具有重要生理与病理生理学意义.影响基因表达调控与epigenetics异常的研究对若干疾病（如癌症）的发生机制及探索治疗药物已获得可喜成果.

简介：当P〈0．05或P〈0．01时，应说对比组之间的差异具有统计学意义，而不应说对比组之间具有显著性或非常显著性差异：应写明所用统计分析方法的具体名称（如：成组设计资料的t检验、两因素析因设计资料的方差分析、

简介：幼儿在园一日的细节很多，在家备受宠爱中的“小皇帝”、“小公主”们容易产生各种各样的适应性困难，因此，我仔细观察其行为和环境，了解他们的实际情况及个体差异，用心探索解决这些问题的方法。比如，刚入园的幼儿，要时常抱一抱，摸一摸；午睡时，帮他们盖被子；

简介：探讨本科生与研究生防御机制与应对方式的使用情况及相互关系。运用防御方式问卷和应对方式问卷对成都市6所高校的354名本科生与185名研究生进行测查。结果表明,本科生比研究生更多地使用成熟防御机制,不成熟防御机制和中间防御机制上差异无统计学意义,本科生与研究生在应对方式的选择上差异无统计学意义,但本科生比研究生更认可求助的效果,两群体在防御机制与应对方式均存在类似的相关关系,应对方式对防御机制的影响在这两群体上差异较大。可见,在防御机制与应对方式的关系上,研究生与本科生既有相似之处也有不同之处,因此对这两群体开展心理健康教育,有共性也要有差异性。

简介：为深入贯彻落实《中共中央国务院关于加强和改进大学生思想政治教育的意见》精神，全面开创我校及我院思想政治教育工作的新局面，在加强大学生思想政治教育过程中，以可持续的科学发展观为指导，大力加强社会实践，积极探索和建立了社会实践与理论学习、与服务社会相结合、与专业学习相结合、与创新创业相结合、与勤工助学相结合的管理体制，让学生在社会实践中受教育、长才干、做贡献。

简介：基金项目国家自然科学青年基金（项目编号81102482）摘要目的构建人钙联蛋白S100A8的原核表达载体并进行蛋白表达及纯化，以便进一步研究。方法从人单核巨噬细胞THP-1中提取总RNA，逆转录后进行PCR，得到目的基因，与TA克隆载体pMD-T进行连接，得到pMD-S100A8质粒，经BamHⅠ和XhoI双酶切产物或者PCR产物双酶切后，与大肠杆菌pGEX-6P-1表达载体进行连接，得到pGEX-S100A8重组质粒。重组质粒转入E.coliBL21(DE3)表达菌进行蛋白表达。融合GST蛋白用GST柱纯化，冷冻干燥，进行下一步研究。结果成功构建了TA克隆质粒pMD-S100A8及阳性pGEX-S100A8重组质粒，成功诱导蛋白的原核表达。结论纯化得到的蛋白为进一步研究S100A8钙联蛋白的结构和功能提供了参考。

简介：目的构建含有人髓细胞白血病基因-1（myeloidcellleukemia-1,MCL1）和绿色荧光蛋白基因（pEGFP）的真核共表达载体,为聋病的基因治疗奠定实验基础。方法应用基因重组技术和限制性内切酶酶切,及基因测序方法,构建并鉴定pEGFP-MCL1真核表达质粒。经脂质体介导转染293细胞系,荧光显微镜下观察pEGFP-MCL1真核表达质粒在293细胞系中的表达,利用逆转录-聚合酶链反应（Reversetranscriptionpolymerasechainreaction,RT-PCR）检测MCL1mRNA的表达,WesternBlot（蛋白质印迹）方法检测MCL1蛋白的表达。结果阳性重组子经酶切鉴定含有MCL1基因片段,基因测序结果与GenBank中MCL1序列相同。重组pEGFP-MCL1真核表达质粒转入293细胞系后24小时,荧光显微镜下可见绿色荧光表达,RT-PCR能够扩增出MCL1的条带,WesternBlot检测出40kDa大小的蛋白。结论成功地构建了含有人全长MCL1基因和pEGFP基因的真核共表达载体,且能在哺乳动物293细胞系中表达。

简介：医疗健康的基本要求在于安全、有效、经济、可及,“互联网＋”为居民医疗保健牵上了“丝线”,实现了在线问诊、远程医疗,让“信息多跑路,患者少跑路”,使更多群众能分享到优质的医疗资源服务,某种程度上满足了“全民看专家”的愿望,解决了偏远地区群众“看病难”的问题,助推了医疗的可及性.然而,如何保证医疗质量,保障患者安全,调动各方面的积极性,这才是让“互联网＋医疗健康”线路更畅通的关键.

简介：摘要

简介：摘要目的探索Klotho抑制高糖条件下肾小管上皮细胞（HK-2）微RNA（miR）-21a-5p表达而减轻肾小管上皮细胞间质转分化的机制。方法将体外培养的HK-2分为低糖组、高糖组（30 mmol/L葡萄糖）和高渗组（30 mmol/L甘露醇）；按照高糖刺激时间分为4组：0、12、24、48 h；按照是否转染pcDNA3.1-Klotho/pcDNA3.1-Vector及转染后低或高糖刺激分为4组：低糖组、高糖组、高糖+pcDNA3.1-Vector组和高糖+pcDNA3.1-Klotho组；按照转染si-Klotho/si-Negative后是否加入二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC）和低或高糖刺激分为6组：低糖+si-Klotho组、低糖+si-Negative组、低糖+si-Klotho+PDTC组、高糖+si-Klotho组、高糖+si-Negative组和高糖+si-Klotho+PDTC组。染色质免疫共沉淀（CHIP）分组：低糖+pcDNA3.1-Vector组、高糖+pcDNA3.1-Vector组和高糖+pcDNA3.1-Klotho组。采用实时聚合酶链式反应检测各组细胞miR-21a-5p水平；Western blot检测Klotho、纤连蛋白（FN）、α-平滑肌动蛋白（α-SMA）、核因子κB（NF-κB）、NF-κB 抑制因子（IκB）表达水平；CHIP检测NF-κB对miR-21a-5p启动子的直接作用。两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析。结果与低糖组比较，高糖组Klotho蛋白表达下降至60.8%（P<0.05），miR-21a-5p表达升高至3.203倍（P<0.01），FN和α-SMA表达明显升高。随着高糖刺激时间延长，Klotho蛋白表达水平逐渐降低，而miR-21a-5p表达水平逐渐升高，呈现相反的变化趋势（P<0.05）。高糖组核蛋白NF-κB和miR-21a-5p表达水平是低糖组的2.934倍和3.154倍（均P<0.01），而过表达Klotho后，NF-κB和miR-21a-5p表达水平分别下降至高糖组的50.18%和49.24%（均P<0.05）。CHIP结果显示：高糖+pcDNA3.1-Vector组与低糖+pcDNA3.1-Vector组相比，NF-κB和miR-21a-5p启动子结合显著增加至3.121倍（1.000±0.742比3.121±0.115，P<0.01）；而过表达Klotho能显著减弱高糖引起的NF-κB和miR-21a-5p启动子结合至54.21%（3.121±0.115比1.692±0.073，P<0.01）。结论Klotho可抑制高糖条件下肾小管上皮细胞NF-κB和miR-21a-5p启动子的结合，使miR-21a-5p表达减少，从而减轻肾小管上皮细胞间质转分化。

简介：摘要目的研究富血小板血浆（PRP）中血小板源性生长因子（PDGF）对促进家兔椎间盘Ⅱ型胶原蛋白（collagen Ⅱ）及蛋白多聚糖（aggrecan）表达的作用及其机制。方法对13只3月龄新西兰大白兔椎间盘细胞进行分离培养，随机将培养细胞分成对照组、PRP组、PRP+AG1296组（PDGF因子抑制剂AG1296）、AG1296组，n=12。检测4组髓核细胞7 d中的生存率。荧光定量RT-PCR法检测collagen Ⅱ、aggrecan的mRNA表达。在上述分组基础上，加入PRP+PD98059组[细胞外调节蛋白激酶（ERK）通路抑制剂PD98059]、PRP+Wortmannin组[磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B（PI-3K/Akt）通路抑制Wortmannin]、PRP+PD98059+Wortmannin组，共7组；Western-blot法检测7组细胞磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、蛋白激酶B（Akt）、泛细胞外调节蛋白激酶（panERK）、磷酸化细胞外调节蛋白激酶（p-ERK）、collagenⅡ、aggrecan的蛋白表达。结果与对照组相比，PRP组可显著增加家兔髓核细胞的生存率、collagenⅡ及aggrecan的mRNA表达水平（P均<0.05）；与PRP组相比，PRP+AG1296组的上述指标均显著下降（P均<0.05）。PRP组的p-ERK、p-Akt、collagen Ⅱ及aggrecan蛋白表达明显高于对照组（P均<0.05）；与PRP组比较，PRP+AG1296组4种蛋白表达均明显降低（P均<0.05）；加入ERK和PI-3-K/Akt通路抑制剂PD98059及Wortmannin处理的各组p-ERK、p-Akt、collagenⅡ及aggrecan蛋白的表达均降低（P均<0.05）。结论PRP中PDGF可促进家兔髓核细胞的生存，并通过激活ERK和Akt信号通路上调髓核细胞collagen Ⅱ及aggrecan的表达。

简介：前列腺癌细胞主要向骨转移，肿瘤细胞与骨细胞的相互作用导致局部的骨形成和／或骨溶解。肿瘤细胞诱导的成骨或溶骨病变的分子机制目前尚不清楚，因此我们比较了两种前列腺癌细胞-成骨型的MDA-PCa-2b与溶骨型的PC-3细胞对成骨细胞的作用。

简介：DII4／Notch1信号通路是肿瘤血管形成、血管发育等领域的研究热点．然而其在消化道血管发育不良（AGD）中的作用机制尚未阐明。沙利度胺常用于治疗AGD所致的消化道出血。目的：探讨DII4／Notch1信号通路在消化道AGD形成中的作用以及沙利度胺的干预机制。方法：收集不明原因反复消化道出血、经胶囊内镜和（或）小肠镜检查确诊为AGD的患者25例和因AGD致消化道出血接受沙利度胺（100mg／d．疗程4个月）治疗者10例，18名健康志愿者作为正常对照。以ELISA法检测血清DII4、Notchl浓度。结果：AGD组血清DII4、Notch1浓度显著高于正常对照组（P〈0．01），且DII4与Notch1间呈正相关（r=0．900，P〈0．01）。沙利度胺治疗前后，AGD患者的血清DII4、Notch1浓度无明显改变；根据性别和疗效进行分层分析，差异亦无统计学意义。结论：DII4／Notch1信号通路可能参与了消化道AGD的形成．沙利度胺对该信号通路的调节作用不明显．

简介：目的构建HCV感染相关干扰素IFNL4蛋白融合His标签的真核表达载体,并将其在293-T细胞中表达后进行初步纯化鉴定。方法采用PCR法从含人IFNL4基因序列的质粒pFC14A-p179中扩增出目的片段,将其定向连接到pcDNA3.1-His真核表达载体中,经酶切和测序鉴定正确后,以脂质体法转染293-T细胞,培养72h后裂解细胞,采用抗His-Tag抗体行蛋白质印迹法检测目的蛋白的表达。结果成功构建了真核表达载体pcDNA3.1-IFNL4-His,转染后经Westernblot法检测显示20kDa位置有目的蛋白条带,大小与目的蛋白相符。结论我们成功构建了HCV感染相关IFNL4与His标签融合的真核表达载体,体外转染293-T细胞后鉴定其工作良好,为后续对干扰素在HCV感染及抗肝纤维化治疗中的研究奠定了基础。