简介：为有效利用SSR-PCR技术分析国家一级重点保护植物银缕梅的遗传多样性,采用正交试验设计L16（43）,即3因素4水平,对影响SSR-PCR扩增结果的因素（引物,模板DNA浓度和循环数）进行优化筛选,并在此基础上对聚丙烯酰胺凝胶上样量进行优化,建立了适合银缕梅的最佳SSR-PCR反应体系：10μL2×PCRMix、40ng模板DNA、10μmol/L引物,其余用ddH_2O补齐至20μL。PCR扩增程序为：95℃预变性15min,95℃变性30s,57.5℃退火1.5min,72℃延伸1min,30个循环,循环结束后,60℃延伸30min,扩增产物4℃保存。聚丙烯酰胺凝胶电泳上样量以1.5~2.0μL为最佳。利用优化后体系进行引物筛选,从18对引物中筛选出11对具有多态性引物,说明该反应体系具有良好的稳定性。该体系的建立可以为今后利用SSR标记对银缕梅遗传多样性分析、系统发育研究、遗传图谱构建、基因定位和分子标记辅助育种等研究提供基础。

简介：本文介绍了一种用于PCR的植物基因组DNA的快速制备方法。该方法只需将少量（4～6mg）植物叶片、适量（200μL）TE缓冲液、和一粒钨合金珠放入1个2mL离心管，在多功能组织细胞研磨器中振动5min破碎组织后，直接取1μLDNA溶液作为PCR的模板。本方法具有简单快速、操作效率高、成本低、扩增效果好等优点，特别适合于大量样品的基因型检测。

简介：大豆是主要的油料作物，起源于中国，在我国种质资源十分丰富。大豆孢囊线虫（SCN）（HeteroderoglycinesIchinohe）是一种土传的定居性内寄生线虫，不易防治，常引起大豆黄萎病等病害，是大豆生产上危害最大的病害之一。大豆孢囊线虫病生理小种多达十几种，在我国，大豆孢囊线虫病病原主要为3、4号生理小种。大豆抗孢囊线虫的研究一直是世界上大豆抗病育种研究的热点之一。在本课题的前期研究中，根据已克隆的植物抗孢囊线虫病基因的保守序列设计引物，对经常规鉴定为抗（感）孢囊线虫3号生理小种的15个大豆品种基因组DNA进行PCR扩增，在大豆抗病品种中获得一条大豆抗孢囊线虫的特异条带。本研究在此基础上利用该对引物，对高抗孢囊线虫3号小种的北京小黑豆基因组DNA进行扩增，并克隆了特异扩增片段，命名为RSCN3，经测序及BLAST分析，发现其DNA序列与GenBank、EMBL、DDBJ、PDB中的大豆似受体激酶RHG4、水稻TMK（leucinerichprotein，receptor-likekinase）基因等均有80％以上的同源性。根据该DNA序列推测其氨基酸序列，在其序列中共找到21个亮氨酸，将该序列与蛋白质序列同源性进行比较，结果发现与植物中的受体激酶、富含亮氨酸重复的蛋白激酶有较高的同源性。因此推测RSCN3克隆片断为一个与受体激酶有类似作用的抗病相关基因的RGA，并将该序列登录到GenBank中，登录号为：AY580161。

简介：巨胚米富含的γ-氨基丁酸（gamma-aminobutyricacid,GABA）具有缓解和预防血压上升的功效。本研究对江苏地方巨胚种质10217巨胚基因进行了克隆,发现其GE基因编码区有三个位点发生突变,第1090个碱基由C突变为G;第1302个碱基由T突变为G;第1467个碱基由G突变为A,提前形成一个终止密码子TGA。10217中ge基因是一个新的ge等位基因。本研究根据ge基因突变位点设计了一对共显性的CAPS标记GE-2,对10217/日本晴的F2分离群体进行分析后,证实GE基因突变导致了10217巨胚表型。本研究开发GE-2标记能区分GEGE、GEge和gege三种基因型,可直接用于ge基因的分子标记辅助选择育种和基因聚合育种。

简介：本研究以普通小麦品种‘中国春’染色体组DNA为封阻,用生物素（biotin-16-dUTP）标记的大麦染色体组DNA作为探针,通过基因组原位杂交法解析了来自杂交组合CS×（CS＋Betzes2H）杂种后代X99-13的遗传组成,此材料含有42条染色体,其中1条大麦染色体,2条小麦-大麦易位染色体和39条小麦染色体,鉴定为小麦-大麦代换易位系。以小麦第二部分同源群短臂探针psr131进行RFLP分析,结果表明此代换易位系是涉及小麦染色体2B和大麦染色体2H的代换易位。为进一步选育小麦-大麦2H纯合易位系及利用其上的α-淀粉酶抑制蛋白基因打下了坚实的物质基础。

简介：葡萄浆果的颜色是由花色素苷的量来决定的,UFGT控制花色素苷的合成,Myb相关基因通过时空表达调节UFGT,从而使花色素苷在葡萄发育的不同阶段和不同部位表达。不同葡萄品种调节花色素苷的合成的强度和模式的差异造成了有色葡萄品种的果皮有多种颜色,白色葡萄品种果皮是由于没有花色素苷的合成。Myb相关基因家族主要有八个成员,其中MybA的三个种类VlmybA1-1,VlmybA1-2和VlmybA2以及MybB的两个种类VlmybB1-1和VlmybB1-2得到了较深入的研究。

简介：本研究建立了以甘蓝型油菜下胚轴为外植体的一步不定芽再生培养和遗传转化体系。首先，以甘蓝型油菜中双11号含部分子叶节的下胚轴为外植体，从6-BA和NAA配比、AgNO3以及无菌苗苗龄等方面对影响油菜组织培养的因素进行了研究，建立了甘蓝型油菜快速高频一步不定芽再生培养技术体系。该技术体系为，切取5d苗龄含部分子叶节的下胚轴置于添加4mg/L6-BA的MS基本培养基中培养，5d再生出不定芽，再生频率为100%。在此基础上，进行了甘蓝型油菜的遗传转化，成功地将用pFGC5941双元载体构建的BnTFL1基因干扰载体转入中双11号中。整个转化过程中，芽的诱导生成只需5d，接着完成抗性芽的PPT筛选需要30d，整个转化周期从播种到得到生根抗性苗仅需大约70d，而传统转化方法抗性芽的诱导筛选需要90d，整个转化周期需要130d左右，大大缩短了转化周期，简化了转化过程，提高了转化效率。

简介：针对多浆旱生植物霸王富含多酚和多糖类物质的特点，在常规异硫氰酸胍方法的基础上进行改进，摸索出一种霸王叶和根总RNA提取的方法。本方法主要通过在提取缓冲液中加入4％β-巯基乙醇以去除多酚物质的干扰；用2mol／L醋酸钠（pH4．0）、水饱和酚和氯仿：异戊醇（24：1）抽提以去除多糖和蛋白物质。采用该方法提取的霸王总RNA纯度高、完整性好，电泳条带清晰，OD260/OD280值在1．8～2．0之间，其质量完全可以满足进一步分子生物学研究的要求。

简介：为研究一株诺丽内生真菌M50的抗菌和抗肿瘤生物活性并鉴定此菌株,本研究对实验室保藏的诺丽内生真菌M50,采用ITSrDNA测序鉴定内生真菌M50;以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌和枯草芽孢杆菌为指示细菌,采用滤纸片扩散法对其次生代谢产物的抗菌性进行测试;以新暗色柱节孢菌、辣椒疫霉、西瓜枯萎病菌和拟盘多毛孢为指示真菌,采用平板对峙法对其抑菌性进行测试;以肝癌细胞株SMMC-7721、Lewis肺癌、前列腺癌细胞株PC-3为指示癌细胞,采用MTT法对其次生代谢产物的抗肿瘤活性进行测试。内生真菌M50鉴定为Leptoxyphiumfumago;金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌和枯草芽孢杆菌抑菌圈的大小分别为(13.16±0.22)mm、(12.06±0.31)mm、(7.89±0.17)mm和(11.05±0.22)mm;新暗色柱节孢菌、辣椒疫霉、西瓜枯萎病菌和拟盘多毛孢的抑制率分别为50.00%、18.36%、12.35%和46.91%;肝癌细胞株SMMC-7721、Lewis肺癌、前列腺癌细胞株PC-3的半抑制浓度分别为45.46μg/mL、53.33μg/mL、80.48μg/mL。说明内生真菌M50具有广谱的抗菌和抗肿瘤的生物活性。本研究为解决药源问题带来新的希望和契机,为开发诺丽新产品提供理论依据和技术支撑。

简介：利用甘蓝型油菜与播娘蒿融合杂种中的不育株与甘蓝型油菜杂交、回交，得到细胞质雄性不育系NJ65A。根据pol和nap雄性不育高度相关的基因orf224和orf222设计兼并引物，从NJ65A植株中克隆得到一个长度为675bp的基因，命名为orf224-NJ65A。该基因编码224个氨基酸，氨基酸序列与orf224、orf222和orf220序列相似性分别为：70％、53％、60％。RT—PCR表达分析表明：orf224-NJ65A在所检测的组织中都有表达，但在花、花蕾和茎中的表达量较大。推测orf224-NJ65A与细胞质雄性不育有关。

简介：杂种不育性是繁殖隔离的一种主要形式，数年来，尽管繁殖隔离在广泛的生物体体的进化生物学中已经成为一个关键问题，但仅有几个基因在繁殖隔离中被鉴定。亚洲种分为两个亚种，籼稻（indica）和精稻（japonica）。这两个亚种的杂交种通常为高度不育，水稻胚的一个特殊种群具有广泛的亲和性，与籼稻和精稻进行回交时能产生高度育性杂交种。在本研究中，我们利用图位克隆的方法，