简介:摘要目的研究长非编码RNA(lncRNA)肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1(AFAP1-AS1)对甲状腺癌细胞增殖和侵袭的影响,并探讨其机制。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测正常甲状腺和甲状腺癌细胞株中AFAP1-AS1的表达。将甲状腺癌细胞株WRO分成3组,AFAP1-AS1沉默表达组(AFAP1-AS1-siRNA组)、阴性对照组(NT-siRNA组)及空白对照组(Blank组),AFAP1-AS1-siRNA组和NT-siRNA组采用Lipofectamine™ 3000分别转染AFAP1-AS1-siRNA、NT-siRNA,Blank组加入PBST对照。CCK-8检测3组细胞增殖能力,Transwell实验检测侵袭能力,Western blotting检测Rho A、Cyclin D1和MMP-9蛋白的表达情况。结果正常甲状腺细胞株FRTL-5、甲状腺癌细胞株SW579、CAL-62、FRO、WRO的AFAP1-AS1相对表达量分别为1.03±0.04、2.95±0.17、5.31±0.35、7.26±0.49、9.67±0.53,5组间比较差异具有统计学意义(F=16.932,P=0.027);AFAP1-AS1在WRO细胞中表达量最高,因此,选择WRO细胞进行后续实验。AFAP1-AS1-siRNA组、NT-siRNA组、Blank组3组细胞AFAP1-AS1的相对表达量分别为0.23±0.02、1.02±0.04、1.03±0.05,差异具有统计学意义(F=13.590,P=0.006),与NT-siRNA组相比,AFAP1-AS1-siRNA组AFAP1-AS1表达量显著降低(P<0.001)。3组细胞转染后3、4 d的A450值分别为0.68±0.06、1.17±0.09、1.22±0.09,0.96±0.08、1.69±0.11、1.72±0.12,差异均具有统计学意义(F=7.318,P=0.016;F=10.351,P=0.004),第3、4 d AFAP1-AS1-siRNA组、NT-siRNA组两组比较,差异均有统计学意义(P=0.043;P=0.013)。3组侵袭细胞数分别为(72.8±5.7)个、(145.6±8.9)个、(148.4±7.3)个,差异具有统计学意义(F=37.273,P=0.034),AFAP1-AS1-siRNA组侵袭细胞数少于NT-siRNA组(P=0.021)。3组细胞Rho A蛋白表达量分别为0.34±0.03、1.02±0.04、1.04±0.03,差异具有统计学意义(F=9.667,P=0.013),AFAP1-AS1-siRNA组Rho A蛋白表达量显著低于NT-siRNA组(P=0.018);3组Cyclin D1蛋白表达量分别为0.52±0.04、1.03±0.02、1.05±0.04,差异具有统计学意义(F=15.464,P=0.010),AFAP1-AS1-siRNA组Cyclin D1蛋白表达量显著低于NT-siRNA组(P=0.023);3组MMP-9蛋白表达量分别为0.42±0.04、1.05±0.03、1.02±0.04,差异有统计学意义(F=10.328,P=0.032),AFAP1-AS1-siRNA组MMP-9蛋白表达量显著低于NT-siRNA组(P=0.035)。结论AFAP1-AS1沉默可抑制甲状腺癌细胞增殖、侵袭,其机制可能与下调Rho A、Cyclin D1、MMP-9蛋白表达相关。
简介:摘要目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)基因敏感突变的非小细胞肺癌(NSCLC)患者吉非替尼耐药前后血浆中长链非编码RNA(lncRNA)和mRNA表达谱的变化,筛选耐药相关RNA分子。方法选择2015年3月至2019年4月陕西省咸阳市中心医院及重庆医科大学附属永川医院收治的经吉非替尼治疗的EGFR基因敏感突变NSCLC患者12例,收集出现耐药前后的血浆,选取敏感阶段和耐药阶段各6份样本。运用基因芯片检测筛查出差异表达的lncRNA和mRNA,采用基因本体(GO)功能注释和京都基因与基因组数据库(KEGG)通路富集分析,得到差异表达mRNA参与的生物学途径。结果芯片检测结果显示,NSCLC患者血浆lncRNA和mRNA表达谱在吉非替尼耐药前后存在差异。以差异倍数≥2、P<0.05作为差异基因筛选标准,存在38个差异表达的lncRNA和53个差异表达的mRNA。相对于药物敏感阶段,耐药阶段患者血浆中表达上调的lncRNA 18个,上调倍数最大的lncRNA为RP1-102K2.6(差异倍数为47.31);表达下调的lncRNA 20个,下调倍数最大者为RP11-149I2.4(差异倍数为24.34)。在mRNA表达谱芯片中,相对于药物敏感阶段,耐药阶段患者血浆中表达上调的mRNA 29个,上调倍数最大的mRNA为CUL2(差异倍数为58.49);表达下调的mRNA有24个,下调倍数最大者为CHEK2(差异倍数为23.29)。GO功能分析显示吉非替尼发生耐药后血浆中差异表达的mRNA的作用富集在凋亡和蛋白结合过程调控等,KEGG分析显示差异表达的mRNA的作用靶点多集中于癌症通路、NSCLC通路等。结论EGFR基因敏感突变的NSCLC患者吉非替尼耐药前后血浆中存在多个差异表达的lncRNA和mRNA,其差异表达可能在吉非替尼耐药机制中发挥重要作用。
简介:摘要目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)尿路上皮癌胚抗原1(UCA1)在肺腺癌A549细胞中的表达及对糖代谢关键酶和细胞侵袭、转移的影响。方法构建lncRNA UCA1沉默及其对照稳定转染的肺腺癌A549细胞系,将小干扰RNA (siRNA)转染细胞分为NC组(阴性对照组,转染siRNA-UCA1序列)和siRNA-UCA1组(转染siRNA-UCA1敲降序列)。采用实时荧光定量PCR、Western blot检测糖代谢相关指标葡萄糖转运蛋白(GLUT) 1、己糖激酶(HK) 2和丙酮酸激酶(PKM) 2水平的变化。采用Transwell实验和划痕实验检测siRNA-UCA1的侵袭和迁移能力。采用18F-氟脱氧葡萄糖(FDG)摄取实验检测siRNA-UCA1的摄取率。计量资料的比较采用t检验。结果UCA1在肺腺癌A549细胞中高表达。与NC组相比,siRNA-UCA1组能够抑制GLUT1、HK2和PKM2基因在肺腺癌A549细胞中的表达(t=19.66、5.81、11.98,均P< 0.001),且三者的蛋白表达水平明显下降(t=61.35、145.90、88.19,均P<0.001)。与NC组相比,siRNA-UCA1组肺腺癌A549细胞的侵袭能力、迁移运动能力和对18F-FDG的摄取率均明显降低(t=19.43、7.71、5.79,均P<0.05)。结论LncRNA UCA1能够抑制糖代谢的关键酶并促进肺腺癌的转移能力,其可能成为肺癌新的诊断指标和治疗靶点。
简介:摘要目的检测三阴乳腺癌(TNBC)中长链非编码RNA-HOX转录反义RNA(HOTAIR)表达,并探讨HOTAIR对TNBC发生发展的分子调控机制。方法收集64例2016年1月至2019年7月东莞市人民医院乳腺科手术治疗TNBC癌及癌旁腺体组织,以实时定量荧光聚合酶链反应(qPCR)检测HOTAIR表达,比较其在癌及癌旁中表达差异,并分析其与病理分期的相关性。在TNBC MDA-MB231细胞株中以小干扰RNA下调HOTAIR表达,以siControl为对照组检测对细胞增殖能力和凋亡的影响。进一步研究下调HOTAIR表达对于多梳蛋白复合体2(PRC2)核心亚基Zeste基因增强子同源物2(EZH2)表达的影响,应用SPSS 19.0统计软件分析,组间差异采用t检验。结果与癌旁组织比较,HOTAIR在TNBC中表达明显上调(0.71±0.10比0.50±0.06,t= 20.286,P<0.01),差异有统计学意义。且HOTAIR在晚期TNBC组织中的表达明显高于早中期(0.78±0.05比0.64±0.07,t=8.625,P<0.01),差异有统计学意义。MDA-MB231细胞中以小干扰RNA(siRNA)沉默HOTAIR或EZH2的表达均引起细胞增殖能力下降、细胞凋亡增加。HOTAIR沉默表达后,EZH2表达明显下调,而下调EZH2 RNA对HOTAIR表达无影响。结论TNBC中HOTAIR表达明显上调,与不良预后相关。TNBC中HOTAIR可能通过调节PRC2复合物核心蛋白EZH2表达发挥生物效应。
简介:摘要目的观察基于疾病编码和症状为基础的医护一体化平台的构建对医疗安全的影响。方法2018年3月至2019年6月建立以疾病编码和症状为基础的医护一体化的智慧护理平台体系,在平台上根据疾病和症状的结构化病历系统,护理端形成的各项生命体征、血糖等监测指数、评估分数、预警分数等自动在医生病历端,医生端的评估也自动在护理端,分析系统构建前后医护记录一致性、MEWS预警的应答时间、医疗安全不良事件的发生率。结果各项指标实施前后差异均具有统计学意义(均P<0.05);实施后对所有MEWS高危预警的患者均在1 min内得到报告和处理,医护一致性达到100%,不良事件发生率下降。结论基于疾病编码和症状为基础的医护一体化平台的构建可以提高医疗质量,保障医疗安全,该模式值得临床广泛推广。
简介:摘 要 使用高压水枪水冲洗法清洗运行中的变压器散热器,通过对清洗效果的彻底检查 ,这种方法是完全可靠的。使用高压水枪水冲洗法可以防止因变压器过热引起的大量停运事故 ,同时可比用其它方法清洗散热器节省大量工时。
简介:【摘 要】对林华煤矿35/10kV变压器呼吸器硅胶更换后,长时间未见有呼吸现象。通过对该现象的分析及处理提出了一些看法、处理方法及注意事项,以此保证变压器能够安全可靠运行。