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  • 简介:双精氨酸蛋白转运系统(twin-argininetranslocationsystem,Tat)伴侣蛋白校正监控下将已正确折叠蛋白通过细菌细胞质膜植物叶绿体类囊体膜。Tat分泌产物信号序列具典型双精氨酸基序,包含多拷贝膜蛋白TatA、TatBTatC。其中TarATatB基因在细菌进行了大量研究,但是植物作用机理尚不清楚。本实验以茄科植物马铃薯为研究对象,克隆基因并采用生物信息学手段进行序列比对,通过烟草脆裂病毒介导基因沉默技术,结合半定量RT—PCR来解析StTatAStTatB功能。结果表明:马铃薯StTatAStTatB大肠杆菌、衣藻、番茄具有高度同源性,且叶绿体发育过程起重要作用。

  • 标签: 基因StTatA和StTatB 全长克隆 VIGS 半定量RT—PCR 功能分析
  • 简介:通过增加外源CaCl2钙离子螯合剂EGTA处理后,研究香蕉幼苗60mmol/LNaCl人工模拟盐胁迫0、4h、8h、12h、24h48h不同时间下,测定其叶片CaMCa^2+-ATPase基因相对表达量。结果表明,NaCl胁迫过程,香蕉幼苗正常生长条件下,其根叶片CaM基因Ca^2+-ATPase基因均有表达。巴西蕉幼苗根盐胁迫过程CaM基因没有发生显著变化,但是粉蕉根却发生了显著变化,这可能与粉蕉耐盐性高于巴西有关。随着盐胁迫时间延长,巴西蕉粉蕉幼苗根Ca^2+-ATPase基因相对表达量均呈现先上升后下降趋势

  • 标签: 香蕉幼苗 盐胁迫 CaM基因 Ca2+-ATPase基因 荧光定量
  • 简介:启动子是调控外源基因在植物体内表达“开关”。随着植物转基因技术广泛应用,无论是基础研究还是应用研究,人们希望能够充分利用启动子来准确控制外源基因在植物体内表达,使目的基因“开”“关”、表达“多”“少”、“何地”“何时”表达等。能够听从人指挥,以实现植物育种分子设计。因此,快速分离鉴定植物体内各种特异启动子已经成为植物基因工程研究热点难点。本文互补末端连接反向PCR(CELI—PCR)技术基础上建立起…种快速分离目的基因全长cDNA启动子序列新方法。该方法利用CELI—PCR进行染色体连续步移,获取足够长目的基因及其上游基因组DNA序列,再根据转录起始位点是目的基因转录本启动子分界点,其下游转录本外显于可通过RT-PCR扩增,而上游启动子序列则不能被RT-PCR扩增这一特点,借助RT-PCR进行cDNA连续步移,直到获得全长cDNA,确定启动子基因5’非翻译区位置,进而精确定位转录起始位点。从而获取目的基因准确启动子序列全长cDNA序列。因此,建立CELI,PCR基础上RITIS技术,可绕过繁琐构建cDNA库5'-RACE等方法快速分离目的基因全长cDNA启动子序列。

  • 标签: 启动子 全长CDNA 转录起始位点
  • 简介:本研究利用常规回交育种结合分子标记辅助选择技术,将来自C750抗白叶枯病基因Xa23抗稻瘟病基因pi9聚合到感病杂交稻恢复系闽恢3139。最后回交后代获得了4个双抗稻瘟病白叶枯病改良系ZR21-sk1、ZR21-sk2,ZR21—sk3ZR21-sk4,且其遗传背景恢复率达96%以上。用来自福建省具有代表性24个稻瘟病菌株白叶枯病广致病型菌系P6对改良株系进行人工接菌鉴定,结果表明,聚合了Xa23pi9基因改良系同时抗稻瘟病白叶枯病,且抗性抗谱供体亲本C750相似。农艺性状分析显示,改良株系所配组合基本保持闽恢3139农艺性状配合力,可直接应用于生产或作抗性育种亲本。

  • 标签: 分子标记辅助选择 稻瘟病 白叶枯病 杂交稻恢复系 pi9/Xa23基因
  • 简介:本研究以国家马尾松种质资源库(浙江省淳安县姥山林场)马尾松二代核心育种群体内36个亲本无性系为材料,研究其主要生长性状及ISSR遗传变异。马尾松二代育种亲本生长性状总体上优良,但生长性状亲本无性系之间存在显著差异,表明二代育种群体具有丰富表型性状变异。利用15个ISSR标记对36个二代亲本无性系进行分析,多态位点百分率(PPL)为83.33%。Nei's基因多样性(HE)为0.328,Shannon信息多样性指数(I)为0.476,亲本间分子遗传距离范围是0.24~0.82,平均为0.414,分子水平上证明马尾松二代育种群体遗传多样性较高,具有较好高世代遗传改良潜力。基于Nei's无偏遗传距离进行UPGMA聚类,36个无性系35个聚在5个类群内,聚类结果与马尾松二代亲本遗传背景、系谱关系及产地纬度部分吻合,证实了应用ISSR标记开展马尾松分子辅助育种可行性。本研究为合理选配二代亲本、开展杂交育种提供一定借鉴。

  • 标签: 马尾松 ISSR 生长性状 开花结实
  • 简介:本研究对来源于全球22个国家130份分子育种亲本材料,福建省上杭县茶地上自然鉴定其田间苗瘟、叶瘟穗颈瘟发病率,旨在筛选出稻瘟病抗性亲本,丰富现有的水稻品种资源。供试130份水稻亲本材料中,高抗(脉)、抗性(R)亲本分别都占全部鉴定材料11.5%,说明稻瘟病抗性资源丰富。但不同国家或地区存在抗源丰富程度不同,东南亚或南亚一些国家抗源比较丰富,中国、日本、韩国等东亚国家抗性材料相对较少。

  • 标签: 水稻 分子育种 供体亲本 稻瘟病 抗性筛选
  • 简介:杂种不育性是繁殖隔离一种主要形式,数年来,尽管繁殖隔离广泛生物体体进化生物学已经成为一个关键问题,但仅有几个基因在繁殖隔离中被鉴定。亚洲种分为个亚种,籼稻(indica)精稻(japonica)。这个亚种杂交种通常为高度不育,水稻胚一个特殊种群具有广泛亲和性,籼稻精稻进行回交时能产生高度育性杂交种。本研究,我们利用图位克隆方法,

  • 标签: 繁殖障碍 杂交种 亲和性 籼稻 调控因子 杂种不育性
  • 简介:桔小实蝇是重要柑橘害虫,目前已对多种杀虫剂产生不同程度抗性,化学防治方法往往效果不理想,近年来植物转基因抗虫育种技术表现出巨大潜力,这为更好地防治桔小实蝇提供了新思路。本研究为获得桔小实蝇抗性转基因柑橘,对桔小实蝇细胞色素P450基因(cytochromeP450monoxygenases,P450)电压门控钠离子通道基因(sodiumchannel,SC)进行核苷酸序列比对,分别克隆得到片段大小为590bp550bpP450基因SC基因正反目标片段,利用植物表达载体pFGC5941,将基因正反向片段Intron端连接,成功构建RNA干扰(RNAi)载体"pFGC-P1F1R1/P2F2""pFGC-C1R1/C2R2"。本研究利用XhoⅠ-NcoⅠ、XbaⅠ-BamHⅠ酶切位点对质粒载体进行双酶切分析实验,克隆测序得到大小为590bp550bp个酶切片段,经核苷酸序列比对分析,验证其插入片段一致,说明RNAi载体构建成功。通过农杆菌遗传转化体系,将外源重组载体整合到柑橘基因组,经除草剂筛选、PCR检测分别得到12株转P450基因阳性苗9株转钠离子通道基因阳性苗,这为后期柑橘抗桔小实蝇效果评价提供了实验材料。

  • 标签: 桔小实蝇 P450基因 钠离子通道基因 RNAI载体 遗传转化
  • 简介:利用甘蓝型油菜播娘蒿融合杂种不育株甘蓝型油菜杂交、回交,得到细胞质雄性不育系NJ65A。根据polnap雄性不育高度相关基因orf224orf222设计兼并引物,从NJ65A植株克隆得到一个长度为675bp基因,命名为orf224-NJ65A。该基因编码224个氨基酸,氨基酸序列orf224、orf222orf220序列相似性分别为:70%、53%、60%。RT—PCR表达分析表明:orf224-NJ65A在所检测组织中都有表达,但在花、花蕾表达量较大。推测orf224-NJ65A细胞质雄性不育有关。

  • 标签: 甘蓝型油菜 雄性不育 克隆 表达
  • 简介:本文应用CTAB法从37种竹类植物中提取基因组DNA,根据GenBank中发表5SrDNAITSmatK基因设计引物,通过PCR进行扩增。结果表明:37种竹子5SrDNAITS序列PCR产物大小约为450bp,刚竹属内部无长度上差异,但是舒竹(Phyllostachysshuchengensis)与其他刚竹属植物相比,有一个位点差异(由A变为C)。因此,5SrDNAITS属下水平上无法提供较大信息量,变异性较低,不适于刚竹属属下水平系统分类研究。同样,选取37种竹子3个竹种matK基因PCR扩增产物直接进行测序,结果显示matK基因在竹亚科属间长度上无差异,产物长度约为1500bp,将测序结果进行同源性比对,变异位点附近寻找多态性酶切位点,碱基序列上有一个位点差异(BstNⅠ)。PCR-RFLP结果显示,共有3种竹子在此位点发生变异分别为:浙江淡竹(Phyllostachysmeyeri)、安吉金竹(Phyllostachysparvifolia)黄古竹(phyllostachysangusta)。刚竹属植物基因序列相当保守,片段刚竹属间绝对核苷酸差异不到1个,所提供信息量不够充分。因此,叶绿体5SrDNAITSmatK基因序列不适用于刚竹属植物系统分类研究,但其可能适合在属或属以上分类等级竹类植物系统分类应用。

  • 标签: 竹亚科 刚竹属 5S RDNA ITS基因 MATK基因
  • 简介:第十一届国际植物组织培养生物技术大会(简称IAPTC&B)定于2006年8月13-18日北京举行。大会主席:许智宏(北京大学校长),大会秘书长:李家洋(中国科学院副院长),组委会主席:薛勇彪(中国科学院遗传发育所所长),大会财经委员会主席:朱祯(中国科学院生物局副局长)。

  • 标签: 植物组织培养 生物技术 北京大学 国际 中国科学院 主席
  • 简介:出于对转基因作物中标记基因安全性考虑,植物转基因育种中标记基因删除将成为未来研究热点之一。位点特异性重组系统之一Cre/loxP系统是目前植物遗传转化应用较多,较成熟一个标记基因删除系统。为了利用Cre/loxP系统构建一种可调控标记基因删除系统,本研究首先从拟南芥克隆了逆境诱导型启动子rd29A,同时从质粒pCre上克隆了Cre基因,构建了含有rd29A:Cre:Tnos表达元件中间载体,将这一表达元件插入到另一植物双元表达载体pKsb,最终构建了含有loxP-Pnos—nptⅡ-Toes—rd29A—Cre-Tnos-loxP可诱导型删除标记基因nptⅡ植物双元表达载体。

  • 标签: CRE/LOXP系统 RD29A启动子 诱导型标记基因删除系统
  • 简介:为了研究M9矮化砧八棱海棠砧YUCCA10a基因结构特征及其嫁接树体表达特征,从M9矮化砧八棱海棠砧克隆了YUCCA10a基因,并对该基因进行了序列分析以及不同时期2种砧木嫁接“烟富3”定量表达分析。通过分析表明,该基因编码序列为1149bp,推导编码382个氨基酸,预测蛋白质分子量为94285.29Da,理论等电点为5.08。实时荧光定量PCR结果表明,5月10月份M9矮化砧嫁接“烟富3”YUCCA10a基因相对表达量明显低于八棱海棠砧,2种砧木嫁接“烟富3”YUCCA10a基因在10月份相对表达量略高于5月份。本试验结果为研究M9矮化砧八棱海棠砧YUCCA10a基因结构特征砧木对嫁接“烟富3”影响机理方面提供理论依据。

  • 标签: YUCCA10a 苹果砧木 克隆 定量表达
  • 简介:根据2015年4月7日,中国科学院文献情报中心公布2015-2016年度中国科学引文数据库(ChineseScienceCitationDatabase,CSCD)收录来源期刊目录(网址http://sciencechina.cn/cscd_source.jsp),《基因组学应用生物学》榜上有名,入选中国科学引文数据库来源期刊核心库。中国科学引文数据库(CSCD)被誉为"中国SCI",是中国最具权威收录数据库之一,被CSCD收录标志着入选期刊在该领域领先水平。

  • 标签: 应用生物学 核心库 基因组学 HTTP
  • 简介:普通洋葱(AlliumcepaL.)是一种开放授粉重要蔬菜作物,洋葱品种纯度鉴定因其亲本保有一定程度异质性,所以杂交种纯度百分率难以确定。为了有效地控制杂交种纯度质量,本研究从收集于各文献89对引物筛选出了12对具有多态性引物,利用筛选出12对SSR引物对39份洋葱种质进行分析,检测到47条多态性带,平均有效等位基因数为7.25。可变类平均法(Flexiblegrouplinkage)聚类分析表明,SSR标记可将39份洋葱划分为三类,聚类分析结果与洋葱自然属性是相符合。同时发现这些标记在常规品种、亲本自交系内,甚至杂种一代中都显示出很高遗传异质性。为了促进提升繁育品种质量鉴定准确性,本研究所提出SSR分子标记辅助育种方案,可通过选定SSR位点纯原种田,制出杂交种。该方案能在选育几个SSR位点检测出准确杂交率,还可以有效地监测洋葱F1代杂交种纯度质量,并且这个方案可以用于任何表现出严重近交衰退异花授粉作物SSR标记分子纯度鉴定,为促进提升繁育品种质量鉴定准确性提供帮助。

  • 标签: 洋葱 SSR标记 遗传多样性 种内异质性 纯度鉴定
  • 简介:用DNA分子标记技术,对21份番茄种苗进行黄化曲叶病毒病(TYLCV,TY)抗病基因及病毒病感染检测。结果表明:9份材料携带ty-1/ty-1、ty-2/ty-2Ty-3a/ty-3a抗性基因,1份材料携带ty-2/ty-2Ty-3a/ty-3a抗性基因;自根苗欧迪斯、嫁接苗金棚/11-8、金棚/荣威和金棚/双飞8号已经感染TY。种苗进行田间种植,其中携带抗性基因番茄品种没有发生TY,抗性较强;已感染TY4份材料中,欧迪斯田间表现感染TY,其余3份未发生TY。试验表明,TY分子标记技术检测可靠,可以番茄育苗生产中推广应用。

  • 标签: 番茄 TYLCV 分子标记 抗性基因 检测
  • 简介:农杆菌介导遗传转化生物技术已经被广泛应用。蚜传辅助因子(helpercomponent-proteinase,HC-Pro)是一种RNA沉默抑制子,而HC-Pro蛋白对植物基因组DNA甲基化影响及其作用机制并不十分清楚。我们采用农杆菌介导烟草(NicotianabenthamianaL.)叶盘转化法将外源基因HC-Pro转化烟草。并优化了各种侵染条件,包括农杆菌重悬液浓度,选择培养基卡那霉素浓度生根培养基活性炭比例。此外,我们介绍了一种简单而有效生根技术,即水培生根法,并利用这种技术快速获得了HC-Pro转基因株系。半定量RT-PCR(Reversetranscription-PCR)检测结果表明,HC-Pro转基因烟草及转基因后代植株稳定表达,为HC-Pro蛋白功能研究提供了实验帮助。

  • 标签: 烟草 叶盘转化法 RNA沉默抑制子 蚜传辅助因子
  • 简介:为了明确黑龙江主栽水稻品种及骨干育种亲本抗稻瘟病基因分布情况利用价值,本研究对102份水稻资源抗稻瘟病基因Pid2、Pid3、Pi9、Pi2/Pizt、Pita、Pi5及Pib进行了分子检测,并对他们分布情况抗病效应进行相关性分析。结果表明:102份水稻资源,PitaPi5检出率相对较高,为31.37%29.41%,其次是Pib、Pi2/Pizt、Pid2Pid3,检出率分别为18.62%、9.8%、1.96%1.96%;本研究没有检测到Pi9。同时,我们发现多基因聚合品种较携带单基因或不含抗病基因品种抗性强;其中龙粳41携带抗稻瘟病基因最多(4个),表现为抗病。在被检测基因,Pi2/Pizt、PitaPi5对黑龙江水稻稻瘟病抗性贡献都较大,但当PitaPi5聚合时对黑龙江省水稻抗瘟性改良最大。本研究为黑龙江省水稻抗稻瘟病基因聚合育种以及抗瘟基因合理利用提供了科学依据。

  • 标签: 黑龙江 水稻资源 抗稻瘟病基因 分子检测