简介:摘要目的观察布鲁菌外膜蛋白(OMP)16脂化型(L16)和非脂化型(U16)对成骨细胞的毒力效应。方法利用大肠埃希菌BL21(DE3)原核表达系统制备L16和U16重组蛋白,并使用镍柱纯化。采用成组设计,利用小鼠成骨细胞系(MC3T3细胞)分别与L16和U16重组蛋白共孵育(L16、U16刺激组),以布鲁菌脂多糖(LPS)刺激物为阳性对照(LPS对照组),未加任何刺激的细胞作为阴性对照,孵育时间为24 h。CCK-8法检测MC3T3细胞的活力;离心收集培养细胞上清,生物发光法测定上清中乳酸脱氢酶(LDH)的释放率,评价L16和U16对MC3T3细胞的毒力作用;进一步使用Annexin Ⅴ-PE/7-AAD双染流式细胞术检测MC3T3细胞的凋亡率,以及通过免疫印迹法(WB)检测凋亡执行蛋白Caspase-3的活化水平。结果L16刺激组细胞活力[(56.16±1.63)%]显著低于U16刺激组和LPS对照组[(97.02±1.44)%、(98.64±0.90)%,P均< 0.01],LDH释放率[(84.64±0.96)%]显著高于U16刺激组和LPS对照组[(34.82±3.41)%、(26.75±1.95)%,P均< 0.01]。Annexin Ⅴ-PE/7-AAD染色结果显示,L16刺激组细胞凋亡率为(46.45±2.19)%,而其余组均< 1%。WB结果显示,L16刺激组细胞内存在活化的Caspase-3,而U16刺激组和LPS对照组未检测到此活化片段。结论L16能诱导成骨细胞的凋亡,使成骨细胞的增殖受到抑制,而U16的作用不明显,具备完整脂化结构的布鲁菌L16是毒力效应所必需的。
简介:摘要班级管理的合力主要来自三方面,班主任与学生的相互理解;班主任与任课教师的相互沟通;班主任和家长相互配合。只有做到三位一体,才能形成班级管理的强大合力
简介:摘要: 一维活用文本 读学导写 仿中有创作;二维在课堂内外搭建习作平台,充分发挥他们的主体作用,多样化的训练习作力,在习作中体味成功的喜悦;三维合理评价,激励兴趣,为学生乐于写作保驾护航,这样多维合力,走吸收、传承、仿写、创新习作之路,促使学生的想象力和创造性思维得以强有力的培养,以达成提高学生习作能力的目标。
简介:摘要: 时代的进步与社会的转型对我们的教育教学提出了更高 ﹑ 更明晰的要求 —— 培养全面发展的学生。可这一要求光是靠老师这一方面的因素很难实现,这有要求需要学校 ﹑ 教师 ﹑ 家长等各方面的因素相互配合,相互作用。尤其是教师与家长这两个最主要因素相互理解和相互沟通。