简介：目的建立-种灵敏、可靠、快速对水中大肠埃希菌富集和DNA提取的最佳方法组合，以便应用TaqMan探针实时荧光PCR技术进行定量检测。方法膜过滤洗脱环节，采用3种不同的方法进行富集洗脱，通过平板计数法比较各方法富集洗脱效果；DNA提取环节，采用4种方法进行DNA提取。所得DNA进行实时荧光PCR扩增，定量检测DNA拷贝数，比较各方法的DNA提取效率；并采用最优的方法组合，对模拟水样进行膜过滤和DNA提取，考察全过程的回收率和灵敏度。结果采用加表皮葡萄球菌过滤＋漩涡混合器＋玻璃棒刮擦洗脱方法（C法），洗脱效率能达到75％-93％；TritonX-100法和磁珠法的线性范围达到6个数量级稀释度（10^0-10^-5），r2分别为0．998和0．999，然而，TritonX—100法更省时，更简便，经济性更好。采用该最优的方法组合，其全过程的回收率为79．7％～104．0％且灵敏度达到1cfu／ml。结论c法＋Triton-100法组合可以快速、准确、经济地对饮用水中大肠埃希菌进行富集和DNA提取。

简介：目的研究急性酒精暴露下对人原代培养肝细胞中CYP2E1依赖的毒性作用和氧化损伤.方法分离培养人原代肝细胞,以25～100mmol/L乙醇作用于人原代肝细胞9h及100mmol/L乙醇作用于人原代肝细胞0～24h后,检测人原代肝细胞中CYP2E1的含量,并研究100mmol/L乙醇作用于人原代肝细胞0～24h后,天冬氨酸转胺酶(aspartatetransaminase,AST)的释放量及肝细胞中谷胱甘肽(Glutathione,GSH)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)的含量.结果急性酒精暴露导致人原代肝细胞中CYP2E1的释放增加,并呈明显的剂量效应和时间效应关系;在100mmol/L乙醇作用下,AST和MDA明显升高,在0～24h内呈明显的时间效应关系,而GSH含量在6h后明显降低.结论100mmol/L乙醇急性暴露可导致人原代培养肝细胞明显的氧化损伤,这种损伤与CYP2E1活性的变化直接相关.

简介：目的探讨富含黄酮类物质的果蔬汁对大鼠肝脏内氧化损伤相关Ⅱ相代谢酶基因表达的影响。方法SPF级雄性成年大鼠54只按体重随机分为对照组、低剂量果蔬汁干预组和高剂量果蔬汁干预组,对照组每日给予生理盐水灌胃、干预组给予低剂量和高剂量果蔬汁灌胃。干预5周后,腹主动脉采血用于生化指标检测;取肝脏组织检测基因表达情况。RT-PCR方法检测肝脏中氧化损伤相关Ⅱ相代谢酶mRNA的表达情况;试剂盒法测定血清总抗氧化能力（T-AOC）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）含量。结果与对照组相比,低、高剂量果蔬汁饮食干预组大鼠的血清抗氧化能力增强,同时上调肝脏中药物代谢Ⅱ相酶人醌NADH脱氢酶（NQO1）和谷氨酰-半胱氨酸连接酶催化亚基（GCLC）mRNA的表达（P〈0.05）,但对GSTP1、GCLM、GSTM2、GSTA2Ⅱ相代谢酶基因mRNA表达无影响。结论富含黄酮类物质果蔬汁可以增强大鼠血清抗氧化能力,同时诱导肝脏中抗氧化Ⅱ相代谢酶NQO1及GCLC基因mRNA的表达。