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  • 简介:目的:分析冠心病和原发性高血压患者血脂、血糖和尿酸检测之间关联性。方法:利用先进生化分析仪将50例原发性高血压,60例冠心病和原发性高高血压并存病患和110例健康组血清中甘油三酯,高密度脂蛋白胆固醇,血糖,尿酸项目进行对比观察。结果:除了高密度脂蛋白胆固醇指标之外,冠心病以及原发性高血压病患各项指标均高于正常标准。结论:高血脂症,高血糖症,高尿酸症和原发性高血压与心脏病有着极其密切关系,共同令心脑血管疾病恶化。

  • 标签: 心脑血管疾病病发因素 原发性高血压 冠心病
  • 简介:目的:分析老年人群空腹血浆游离脂肪酸水平及构成特点。方法:采用高效液相色谱(highperformanceliquidchromatog.raphy,HPLC),检测149名60—104岁健康老年人空腹血浆游离脂肪酸(FreeFattyacids,FFAs)水平,包括月桂酸(C12:0)、二十碳五烯酸(C20:5)、豆蔻酸(C14:0)、软油酸(C16:1)、花生四烯酸(C20:4)、亚油酸(c18:2)、软脂酸(C16:0)、油酸(C18:1)和硬脂酸(C18:0)。结果:血浆FFA水平呈偏态分布;含量占血浆总FFA10%以上单个FFA有3种,分别为:C16:0,C18:1和C18:2,共占总FFA80%。结论:C16:0,C18:1和C18:2为血浆总FFA主要组分,可体现血浆总FFA水平,并给出了健康老年人群血浆总FFA及9种亚组分均值、四分位数及中位数水平。

  • 标签: 游离脂肪酸 高效液相色谱 老年人
  • 简介:目的探讨血液细菌感染对血清(1,3)-β-D-葡聚糖检测结果影响。方法排除影响G试验结果干扰因素后,选取符合入组条件血培养细菌阳性及血培养阴性患者各40例,采集血清进行G试验检测。结果40例血培养细菌阳性标本中革兰阳性菌22例,革兰阴性菌18例,其中只有1例大肠埃希菌G试验结果为阳性,4例在灰区,其余为阴性。40例血培养阴性标本3例G试验结果在灰区,其余为阴性。血培养细菌阳性组与血培养阴性组G试验结果差异无统计学意义(P>0.05)。结论血液细菌感染对G试验检测干扰较小。

  • 标签: (1 3)-β-D-葡聚糖 菌血症 交叉反应
  • 简介:【背景】番茄潜叶蛾是源自南美洲一种最具毁灭性世界性入侵害虫,其适生区范围广,且与其他潜叶类昆虫难以准确、快速识别。【方法】以田间常见其他6种潜叶类害虫为对照,采用基于mtDNACOl基因种特异性SS—COI方法,研究番茄潜叶蛾快速分子检测技术。【结果】种特异性检测结果显示,SS-COl引物只对番茄潜叶蛾mtDNA具有扩增能力,对美洲斑潜蝇、南美斑潜蝇、三叶草斑潜蝇、葱斑潜蝇、豌豆潜叶蝇、桃潜叶蛾等其他潜叶类害虫不具有扩增效果。该引物不仅对成虫和单粒卵具有很好扩增效能,对单根触角、头部、胸部、腹部以及翅和足等成虫残体亦具有同样扩增能力,其最低检出阈值为312.5Pg·μL^-1。【结论与意义】该方法在有效防范番茄潜叶蛾侵入我国,保障农业生产安全和生态环境安全中意义重大。

  • 标签: 番茄潜叶蛾 潜在入侵生物 种特异性SS-COⅠ引物 分子检测 快速鉴定
  • 简介:[目的]建立检测SV5PCR方法并加以初步应用。[方法]根据Genbank中报道SV5序列,针对其中SH基因设计引物进行PCR反应,扩增产物进行测序并用BLAST软件进行同源性比对,同时利用限制性内切酶酶切反应以证实此PCR反应特异性。在此基础上设计巢式PCR提高此方法灵敏度。利用此方法对20份猴肾源细胞培养物和40份血清标本进行检测。[结果]利用设计引物扩增出序列测序结果证实与报道SV5SH基因相对位置序列一致。AccIII限制性内切酶可对PCR产物进行特异性酶切。巢式PCR比一次PCR敏感度有所提高。用此方法检测20份猴肾源细胞培养物和40份血清标本结果为阴性。[结论]本文首次初步建立了检测SV5病毒PCR方法,排除实验室用20份猴肾源细胞培养物和40份血清标本SV5污染。

  • 标签: 猴副流感病毒SV5 聚合酶链反应 巢式PCR 检测
  • 简介:【目的】梣粉虱是新近人侵中国大陆一种危险性果树和园林植物害虫,针对其体型微小,与近缘种粉虱形态相仿,很难快速准确区分问题,以田间常见11种/隐种粉虱为参考,采用基于mtDNA细胞色素C氧化酶亚基I(mitochondrialDNAcytochromecoxidasesubunitI,mtDNAC0I)基因物种特异性(species-specificCOI,SS-COI)PCR法,研究梣粉虱快速分子检测鉴定技术.【方法】利用mtDNACOI基因通用型引物对LC0-1490/HC0-2198获得梣粉虱和其他常见粉虱C0I基因序列,根据测序结果设计梣粉虱特异性SS-COI引物1对(SPZWCF1/SPZWCR1),之后确定其对目的片段扩增长度,并对该引物对物种特异性和检测灵敏性进行检验.【结果】引物对SPZWCF1/SPZWCR1扩增片段长度为426bp.物种特异性检验结果显示,该对引物只对梣粉虱mtDNAC0I基因具有扩增效果,对我国常见其他种类粉虱包括5种烟粉虱隐种(AsiaI、AsiaH1、AsiaH3、MED、MEAM1隐种)以及桑粉虱、螺旋粉虱、黑刺粉虱、柑橘粉虱、双钩巢粉虱和温室粉虱等不具有交叉反应和扩增能力.灵敏性检验结果显示,该对引物不仅对不同性别、不同采集地成虫具有良好扩增效能,对2~4龄若虫以及单粒卵和初孵若虫亦具有同样扩增效力,其最低检测阈值为75.1pg·μL^-1(相当于1/10240头雌性成虫).【结论】该技术体系可用于梣粉虱快速准确鉴定及其检测和监测,对有效阻截其进一步传播扩散具有重要作用.

  • 标签: 梣粉虱 种特异性引物 检测阈值 快速鉴定 分子检测 监测
  • 简介:采用显微观察和PCR检测分析了人工接种后稻曲病菌在水稻穗部增殖状况。结果表明:分生孢子萌发后产生菌丝首先附着在花粉上或花丝上,柱头上未发现有菌丝附着;后期(接种后8d)在柱头上有附着菌丝花粉粒。显微观察和PCR检测结果表明:在不同小穗内菌丝增殖速度不同,该结果为进一步研究该病发生规律提供了信息。

  • 标签: 稻曲病菌 人工接种 PCR 组织观察
  • 简介:目的建立泰泽氏病原体(Ty)纯化方法,获得纯菌体供抗原研究,为ELISA诊断抗原制备提供依据;并尝试建立Ty隐性感染血清学抗原检查方法。方法选择特异性抗体包被磁珠,从感染大鼠肝脏中富集和纯化Ty;用SDS-PAGE和Westernblot技术考察纯化Ty蛋白和抗原图谱;同时用免疫磁珠分离技术(IMS)直接检查隐性感染大鼠肠道上皮细胞内Ty。结果用辛酸-硫酸铵纯化Ty单克隆抗体M5以0.5μg/10^7beads以上浓度包被抗IgG抗体预结合磁珠4h,可最大效率地富集Ty;分离反应进行1h,敏感性达到1矿菌体/mL;吖啶黄染色镜检法可以直接、快速地观察到结合于磁珠上细菌;抗原分析表明,IMS较好地去除了肝组织和真核细胞成分,纯化TvRJ株具有3个免疫优势抗原成分,相对分子质量(Mr)分别为160×10^3、116×10^3、55×10^3;此外,IMS法可直接从隐性感染大鼠盲肠上皮细胞中检测到少量寄生Ty。结论用IMS技术可有效地富集和纯化Ty,并可以作为Ty隐性感染血清学抗原检查候选方法。

  • 标签: 免疫磁珠 泰泽氏病原体 血清学试验
  • 简介:目的:建立一种基于qRT—PCR微量细胞中和实验改良法,快速、定量检测汉滩病毒感染中中和抗体活性。方法:将本室前期制备抗汉滩病毒高中和活性鼠源性单抗3G1、鼠/人嵌合单抗1D9和感染剂量为100TCIDso病毒混合液于37℃孵育1h后感染Vero—E6细胞,提取细胞总RNA。根据GenBank数据库中汉滩病毒76—118株S基因序列设计特异性引物,在上述实验基础上以细胞总RNA为检测样品,建立qRT—PCR快速、定量检测汉滩病毒感染中中和抗体活性实验方法。结果和结论:建立了一种基于qRT—PCR微量细胞中和实验改良法,可定量测定汉滩病毒感染中中和抗体活性,该法具有快速、灵敏、特异和重复性好等优点。

  • 标签: 汉滩病毒 QRT-PCR 中和抗体 微量中和实验 肾综合征出血热
  • 简介:目的建立实验大小鼠金黄色葡萄球菌快速检测方法--PCR法.方法根据已公布金黄色葡萄球菌耐热核酸酶nuc基因序列,设计并合成一对特异性引物,利用PCR技术扩增nuc基因片段.对金黄色葡萄球菌和其他非金黄色葡萄球菌菌株抽提DNA进行扩增.结果金黄色葡萄球菌PCR产物出现668bp特异性DNA扩增片段,而其他非金黄色葡萄球菌未出现扩增片段,证实了合成引物对金黄色葡萄球菌具有特异性.将抽提金黄色葡萄球菌DNA进行系列稀释,测定此PCR体系敏感性,结果显示,该PCR体系能检出3pg金黄色葡萄球菌DNA,且从抽提DNA到PCR扩增及电泳结束仅需4h.结论本研究所建立扩增耐热核酸酶nuc基因检测鼠金黄色葡萄球菌PCR方法,具有快速、可靠、敏感和特异特点,可用于临床样品和金黄色葡萄球菌感染时检测,适合应用于实验大小鼠监测.

  • 标签: 大鼠 小鼠 葡萄球菌 金黄色 聚合酶链反应 j诊断技术
  • 简介:【目的】建立一种基于环介导等温扩增(loop-mediatedisothermalamplification,LAMP)技术,从植物罹病组织中直接检测3种常见根结线虫,为根结线虫监测和防治提供技术支持。【方法】分别采用3种根结线虫种类特异性引物对所选择根结线虫DNA片段进行PCR扩增,扩增产物纯化、回收并测序。根据3种根结线虫测序结果,针对种类特异区段,采用PrimerExplorerV4软件,分别设计3种根结线虫LAMP引物。设计引物组人工合成后,以提取纯化种群线虫DNA为模板,分别进行引物组特异性测试,筛选出分别针对3种根结线虫最佳引物组。【结果】研究设计3种根结线虫LAMP特异性引物能够直接从植物根结中检测出南方、花生、爪哇3种常见根结线虫,LAMP快速检测体系为:dNTPS浓度为1mmol·L^-1,Mg2+浓度为5mmol·L^-1,不添加甜菜碱,反应时间为45min。【结论】本实验建立南方、花生、爪哇根结线虫LAMP快速分子检测方法,具有特异性强、灵敏度高、简单、快速、经济等特征,能够从罹病植物组织中快速准确地检测出南方、花生和爪哇根结线虫,具有极高实践应用价值。

  • 标签: 环介导等温扩增 根结线虫 特异性 快速检测
  • 简介:目的:建立实时定量检测口腔内变形链球菌实时定量聚合酶螺旋反应(PSR)方法。方法:针对变形链球菌gtfB基因设计4套引物,通过实时浊度法和显色法两种方法判断结果。结果:从4套引物中筛选出最佳引物,并确定最佳温度为65%;进一步实验表明采用最佳引物能特异性地检测变形链球菌,与13种其他病原核酸无交叉反应,敏感性达10拷贝/μL。结论:建立了实时定量检测变形链球菌PSR方法,该方法具有简单快速、特异性强、敏感性高特点,为实时定量检测变形链球菌提供了新技术。

  • 标签: 聚合酶螺旋反应 变形链球菌 龋病 实时定量
  • 简介:根据GenBank上报道内生真菌Neotyphodiumcoenophialum和N.loliiNc25基因序列,设计了2对特异性引物FM1/R1和F3/R652,建立了一套适合于从高羊茅和多年生黑麦草种子中检测内生真菌N.coenophialum和N.lolii常规PCR和巢式PCR方法。

  • 标签: 高羊茅 多年生黑麦草 内生真菌 分子检测
  • 简介:[目的]随着杀虫剂阿维菌素广泛应用,靶标生物对其抗性问题日益严重。以往研究显示,细胞膜转运蛋白P糖蛋白可能与抗药性有关。但在昆虫对阿维菌素抗性研究中,由于目前市场上缺少专门针对昆虫商业化抗体,使得这一研究受限。为此,本研究尝试应用其他物种抗体开展P糖蛋白检测。[方法]以果蝇为测试昆虫,以阿维菌素作为测试药物,采用免疫印迹方法用鼠抗人P糖蛋白单克隆抗体检测阿维菌素敏感品系与阿维菌素抗性品系果蝇中P糖蛋白表达水平。[结果]检测出果蝇体内P糖蛋白特异性表达,且无明显非特异性条带;与敏感品系果蝇相比,阿维菌素抗性品系果蝇P糖蛋白表达水平明显升高。[结论]用针对人及其他脊椎动物P糖蛋白单克隆抗体检测果蝇P糖蛋白表达可行,且果蝇对阿维菌素抗性可能与P糖蛋白表达升高有关。

  • 标签: P糖蛋白 蛋白质印迹 果蝇 抗药性
  • 简介:目的对吉林省扶余县35例儿童孢子丝菌病进行临床分析并对部分菌株进行基因测定,了解该地区孢子丝菌病致病菌菌株基因是否发生变异而致致病力增强及发病率增高。方法收集2011年1月1日~4月30日来自扶余县就诊于我科并确诊为孢子丝菌病患儿35例,进行临床分析;从中选取8株菌,对其核糖体保守区及内转录间隔区(ITS)、非转录间隔区(NTS)区进行基因测定,了解基因水平上异同。结果8株孢子丝菌菌株中5株NTS区可见较大范围碱基缺失。结论吉林省扶余县孢子丝菌菌株可能由于NTS区碱基较大范围缺失而致致病力增强,导致该地区短时间内发病率增高。

  • 标签: 申克孢子丝菌 NTS 致病力
  • 简介:目的:检测原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血淋巴细胞亚群,探讨其与PBC发病关系。方法:采用流式细胞术检测PBC患者及正常人外周血中CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4/CD8、CD3-CD16+/CD56+、CD3+HLA-DR+细胞水平。结果:与对照组比较,PBC组CD3+CD8+、CD3+HLA-DR+细胞百分比明显减低(P〈0.05),CD3-CD19+、CD3-CD16+/56+细胞、CD4+/CD8+明显增高(P〈0.05),CD3+、CD3+CD4+细胞均有所升高,但无显著性差异(P〉0.05)。结论:PBC患者存在免疫功能紊乱。T淋巴细胞亚群改变和NK细胞比例减少,导致B细胞功能亢进,产生多种自身抗体,在PBC发病机理中起重要作用。

  • 标签: 原发性胆汁性肝硬化 流式细胞术 淋巴细胞亚群
  • 简介:目的建立检测常见丝状真菌感染病原菌PCR-RFLP和多重PCR方法。方法建立以PCR技术为基础限制片段长度多态性(RFLP)方法,首先用真菌通用引物扩增丝状真菌ITS区,然后用限制性核酸内切酶对PCR产物进行酶切。用4种丝状真菌特异性引物建立多重PCR体系,用该体系检测单模板、双模板和三模板扩增情况,并测定该体系特异性和敏感性。结果用PCR-RFLP技术能够鉴别5种常见丝状真菌,多重PCR能够根据扩增片段不同鉴别菌种,在合适反应条件下,对单模板、双模板和三模板均能扩增出目的片段。结论PCR-RFLP和多重PCR技术能够快速鉴定丝状真菌感染病原菌,有临床应用良好前景。

  • 标签: 丝状真菌 PCR-RFLP 多重PCR 分子鉴定
  • 简介:[目的]全球转基因植物及其产品数量和种类越来越多,迫切需要可同时精准高效检测多个转化载体检测方法。[方法]针对RF1、MS8、Topas19/2、Oxy235和RF3等5个转基因油菜品系侧翼序列及油菜内源基因cruciferinA(CruA)序列设计多重聚合酶链式反应特异性引物,通过对转基因油菜、转基因大豆、转基因玉米、转基因水稻、转基因棉花等不同作物进行PCR扩增来测试所选择引物特异性,优化多重PCR反应引物浓度,用所建立检测体系对不同混合比例转基因油菜进行多重PCR扩增来测试所建立检测方法灵敏度。[结果]通过测试,仅在含有目标样品中检测出阳性结果,灵敏度达0.05%,表明所建立6重PCR检测方法可同时精准检测RF1、MS8、Topas19/2、Oxy235和RF3等5种转基因油菜转化载体。[结论]所建立6重转基因油菜转化体特异性PCR检测方法通量高、特异性好、灵敏度高,符合有关转基因产品检测要求,可作为转基因油菜检测有效方法。

  • 标签: 多重PCR 转基因油菜 转化载体特异性
  • 简介:荧光漂白后恢复(FRAP)是一项利用荧光探针研究活体细胞中各类分子迁移特性技术。简要介绍了FRAP技术原理和具体实施要求,列出了动态比和扩散系数计算公式,并例举了近几年FRAP技术在细胞分子机制研究中应用。

  • 标签: 荧光漂白后恢复 荧光漂白损失 动态比 扩散系数