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  • 简介:根据刺五加鲨烯合酶基因2(squalenesynthase,SS2)鲨烯环氧酶基因1(squaleneepoxidase,SE1)DNA序列,通过Southern杂交qRT-PCR法确定SS2SE1拷贝数。actin为内参照基因,利用qRT-PCR法分光光度法确定不同SS2SE1拷贝数下基因表达量皂苷含量。结果表明,刺五加SS2存在12拷贝,SE1存在1、23拷贝类型及其相互组合6种拷贝数组合基因型。刺五加SS2SE1表达量与皂苷含量均随拷贝数增加而显著提高(p〈0.05),两者间存在极显著正相关关系(P〈0.01)。SS2SE1每增加1个拷贝可使皂苷含量分别提高0.570.42倍。研究结果为进一步揭示刺五加皂苷含量差异形成分子机理奠定了基础。

  • 标签: 刺五加 鲨烯合酶 鲨烯环氧酶 拷贝数 皂苷
  • 简介:DNA条形码技术是基于物种种内特异性种间多样性利用一个或几个标准DNA片段(DNAbarcode)构建生物鉴别数据库。本研究根据GenBank中豆科牧草matKrbcL基因核苷酸序列,设计4通用引物豆科五个主要牧草属(苜蓿属Medicago,车轴草属Trifolium,红豆属Onobrychis,小冠花属Coronilla,野豌豆属Vicia)种牧草进行扩增。扩增产物进行测序分析,筛选出种牧草四个标记位点5’端3’端保守序列,并各标记位点保守区内核苷酸进行单核苷酸多态性(SNPs)单倍型分析,数据表明:matK1、matK2、matK3均有5个单倍型,五个牧草属其特有单倍型;rbcL基因6个单倍型,车轴草属白三叶红三叶其特有单倍型。根据matK(matK1,matK2,matK3)rbcL基因筛选四个标记位点为种牧草建立了相对应特异DNA识别码。说明matKrbcL组合作为豆科种牧草潜在条形码。

  • 标签: 单倍型组合 MATK基因 RBCL基因 DNA条形码
  • 简介:本研究贵州省黔东南自治州黎平县野生亮叶含笑为研究对象。采用水蒸气蒸馏法亮叶含笑8种不同器官(即一年生叶,一年生茎,两年生茎,花瓣,雄蕊,雌蕊,苞片,假种皮)进行精油提取,并使用GC-MS与峰面积归一化法分离、分析其化学成分与相对含量。结果表明:亮叶含笑8种器官精油中共检测出52种化合物,大多属于倍半萜类,部分单萜类萜类含氧衍生物,属于酸酯类化合物。亮叶含笑叶一年生中含有14种化合物;一年生茎含有16种化合物;两年生茎含有14种化合物;假种皮含有19种化合物;花含有24种化合物;苞片含有16种化合物。不同器官精油化合物种类存在一定差异。

  • 标签: 亮叶含笑 不同器官 精油成分 气相色谱-质谱联用
  • 简介:高质量mRNA分离纯化是转录组文库构建和基因表达调控等生物学实验前提。为了调取较完整、纯度较高mRNA,本研究采用磁性分离技术调取mRNA,磁性复合微粒通过其表面的功能团与oligo(dT)_(25)相偶联,形成杂交体-磁珠复合体,外加磁场来实现mRNA快速分离,并经过不同试剂纯化得到高质量mRNA,用于构建转录组文库。结果表明:mRNA被调取,使用不同缓冲液纯化时mRNA质量影响较大,经多次试验验证:结合缓冲液为2.5mol/LLiCl,洗脱缓冲液采用0.1mol/LLiCl1%LiDS相结合进行纯化时,检测结果显示文库条带位于400~600bp之间,条带大小符合上机要求。高质量转录组文库构建为高通量测序基因克隆等实验提供帮助。

  • 标签: MRNA 分离与纯化 转录组文库 磁性复合微粒
  • 简介:本研究6个超级稻品种(组合)及1个耐旱常规稻品种为材料,在防雨棚内进行盆栽试验,研究了孕穗期干旱胁迫超级稻剑叶部分生理指标及产量影响。结果表明:孕穗期干旱胁迫处理使超级稻剑叶含糖量、脯氨酸及丙醛含量均有显著或极显著增加,过氧化物酶、超氧化物歧化酶活性均极显著提高;有效穗及穗实粒数下降,千粒重提高;生物产量及经济产量均有不同程度下降;Y两优2号、新两优6号、丰两优4号在正常灌溉及干旱处理条件下经济产量均位居前三位,且较其他品种产量提高均达极显著水平。建议,在安徽江淮丘陵区可以推广种植Y两优2号、新两优6号、丰两优4号。

  • 标签: 水稻 孕穗期 干旱胁迫 生理指标 产量
  • 简介:SSRSNP被推荐为玉米品种DNA指纹鉴定优选标记技术。本研究选用大面积推广11套玉米杂交种及其亲本作为试验材料,基于SNP芯片分型平台SSR荧光毛细管电泳平台分析比较两种标记在玉米品种真实性鉴定中应用。基于上述两种检测平台获得3072个SNP位点40SSR引物基因型数据,分析比较各个参数。结果显示:(1)两种标记数据获得率均较高,3072个SNP位点平均数据获得率为98.4%,40SSR引物平均数据获得率为99.47%。(2)两种标记均具备较高品种区分能力,3072个SNP位点平均MAF(minorallelefrequency)值为0.357,MAF值大于0.30占71%,平均DP(discriminationpower)值为0.515,DP大于0.5占56%;40SSR引物平均PIC(polymorphisminformationcontent)值为0.605,PIC大于0.5132,平均DP值为0.745,DP值大于0.7129。(3)两种标记位点鉴定样品杂合率、亲子关系方面结果是一致,样品杂合率均介于0.4~0.6之间,平均杂合率分别为0.5250.514;SNP数据显示符合亲子关系位点百分比介于95.2%~99.9%之间,SSR数据显示符合亲子关系位点介于36~40个之间。综上所述,SSRSNP两种标记在数据完整性、区分品种能力、位点稳定性等方面差别较小。

  • 标签: 玉米 SSR SNP 真实性鉴定
  • 简介:通过增加外源CaCl2钙离子螯合剂EGTA处理,研究香蕉幼苗在60mmol/LNaCl人工模拟盐胁迫0、4h、8h、12h、24h48h不同时间下,测定其叶片CaMCa^2+-ATPase基因相对表达量。结果表明,在NaCl胁迫过程中,香蕉幼苗在正常生长条件下,其根叶片CaM基因Ca^2+-ATPase基因均有表达。巴西蕉幼苗根在盐胁迫过程中CaM基因没有发生显著变化,但是粉蕉根却发生了显著变化,这可能与粉蕉耐盐性高于巴西有关。随着盐胁迫时间延长,巴西蕉粉蕉幼苗根Ca^2+-ATPase基因相对表达量均呈现先上升后下降趋势。

  • 标签: 香蕉幼苗 盐胁迫 CaM基因 Ca2+-ATPase基因 荧光定量
  • 简介:根据2015年4月7日,中国科学院文献情报中心公布2015-2016年度中国科学引文数据库(ChineseScienceCitationDatabase,CSCD)收录来源期刊目录(网址http://sciencechina.cn/cscd_source.jsp),《基因组学与应用生物学》榜上有名,入选中国科学引文数据库来源期刊核心库。中国科学引文数据库(CSCD)被誉为"中国SCI",是中国最具权威收录数据库之一,被CSCD收录标志着入选期刊在该领域领先水平。

  • 标签: 应用生物学 核心库 基因组学 HTTP
  • 简介:简要介绍了5种传统、最常用DNA分子标记(RFLP、RAPD、AFLP、SSRSNP)技术原理及它们优缺点,也总结了TRAP这种新产生分子标记技术原理、优点及应用前景。综述了这几类分子标记在花生种质进化、遗传多样性分析、分子图谱构建及抗虫、抗病等方面的研究。利用SSRRAPD标记能够发现野生种栽培种多态性进而实现分子标记花生遗传多样性分析,可以将许多花生品种分为不同品种群,能够花生进行种质进化研究。RFLPAFLP技术利于花生图谱构建,利用DNA中特定限制性酶切位点上碱基改变及酶切位点之间分予重排,可以发现花生品种间DNA许多多态性位点,进而绘制分子标记图谱。AFLP技术在花生青枯菌花生抗黄曲霉研究方面有很大进展。RAPD技术在花生根瘤菌、花生线虫病等方面已有显著进展。最后对分子标记在花生育种中应用前景进行了简单展望。

  • 标签: 花生 分子标记 辅助育种
  • 简介:为探讨庙台槭不同组织DNA高效提取方法,分别叶片果实为材料,完全随机区组试验设计,设置不同浓度β-巯基乙醇和不同浓度PVP作为预处理,采用试剂盒法提取基因组DNA,提取基因组DNA进行浓度、分光光度值测定以及PCR扩增,综合各项指标选择出效果最好预处理方法,并进一步CTAB法进行验证,之后应用于不同个体庙台槭DNA提取中。结果发现:庙台槭果实为材料,不需要预处理,提取DNA即可满足下游实验需要;叶片为材料,用0.5%β-巯基乙醇和1%PVP预处理能有效提高提取DNA浓度质量,经验证发现该预处理方法适用于CTAB法,且能够极显著地提高DNA提取浓度质量;进一步应用于所有132个庙台槭个体总DNA提取,获得DNA均能满足后续实验要求。本研究为进一步研究庙台槭遗传多样性等工作提供帮助,同时也能够为槭属其他植物相关研究提供参考。

  • 标签: 庙台槭 多酚 组织 DNA提取
  • 简介:启动子是调控外源基因在植物体内表达“开关”。随着植物转基因技术广泛应用,无论是基础研究还是应用研究,人们希望能够充分利用启动子来准确控制外源基因在植物体内表达,使目的基因“开”“关”、表达“多”“少”、在“何地”“何时”表达等。能够听从人指挥,实现植物育种分子设计。因此,快速分离鉴定植物体内各种特异启动子已经成为植物基因工程研究热点难点。本文在互补末端连接反向PCR(CELI—PCR)技术基础上建立起…种快速分离目的基因全长cDNA启动子序列新方法。该方法利用CELI—PCR进行染色体连续步移,获取足够长目的基因及其上游基因组DNA序列,再根据转录起始位点是目的基因转录本启动子分界点,其下游转录本中外显于可通过RT-PCR扩增,而上游启动子序列则不能被RT-PCR扩增这一特点,借助RT-PCR进行cDNA连续步移,直到获得全长cDNA,确定启动子基因5’非翻译区位置,进而精确定位转录起始位点。从而获取目的基因准确启动子序列全长cDNA序列。因此,建立在CELI,PCR基础上RITIS技术,可绕过繁琐构建cDNA库5'-RACE等方法快速分离目的基因全长cDNA启动子序列。

  • 标签: 启动子 全长CDNA 转录起始位点
  • 简介:为了进一步了解大兴安岭不同类型云杉遗传多样性和亲缘关系,本研究采用正交设计方法,优化了云杉SRAP反应体系,筛选出14条多态性引物,分析了不同类型云杉物种水平和群体水平上遗传多样性。结果表明:云杉12.5μLSRAP-PCR最佳反应体系为正反向引物0.3μmol/L、2×TaqMasterMix5.0μL、DNA模板量20ng;14引物总扩增条带为149,多态性条带为69,多态性比率为46.30%,平均每对引物扩增多态性条带为4.93。观测等位基因数为2.00,平均有效等位基因数为1.58;有效等位基因数(Ne)、香浓信息指数(I)Nei’s遗传相似系数(H)在物种水平上分别为1.4970、0.51420.3513;在群体水平上分别为1.3803、0.27320.4200;各群体遗传多样性指数依次排序为泥炭藓红皮云杉>杜香越桔红皮云杉>越桔偃松鱼鳞云杉>塔藓越桔鱼鳞云杉>塔藓鱼鳞云杉;塔藓越桔鱼鳞云杉与越桔偃松鱼鳞云杉群体之间遗传距离最近,杜香越桔红皮云杉与塔藓鱼鳞云杉群体之间遗传距离最远。研究表明,大兴安岭5种类型云杉林种间遗传变异大于生境相同云杉种产生遗传变异。本研究为大兴安岭不同类型云杉开发利用种质资源保护提供科学依据。

  • 标签: 云杉 遗传多样性 正交设计 SRAP
  • 简介:本研究油茶品种‘长林4号’无性系扦插苗为材料,采用RT-PCR技术分离出一个油茶铝激活苹果酸转运体基因。该基因cDNA全长1761bp,编码586个氨基酸,分子量为65.59kD,理论等电点(PI)为6.27。与其他植物ALMT蛋白高度同源,将该基因命名为CoALMT(GenBank登录号:KT932706)。CoALMT蛋白含有6个跨膜区,可能定位在细胞质膜上。CoALMT蛋白级结构中α-螺旋(Alphahelix)、β折叠(Extendedstrand)、β转角(Betaturn)、无规则卷曲(Randomcoil)分别占52.05%、16.89%、8.70%、22.35%。‘长林4号’‘长林166号’无性系扦插苗为材料,利用qRT-PCR技术分析了沙培条件下两个不同无性系在不同磷水平下不同器官组织中CoALMT基因表达。结果表明,低磷处理下,两个无性系油茶根系CoALMT表达量均上升,说明油茶根系中CoALMT基因表达受到低磷诱导。茎叶中表达模式与根中存在差异。低磷处理下不同组织中,‘长林166号’中CoALMT基因表达量均比‘长林4号’高。综上结果可知CoALMT基因参与油茶低磷响应,其可能会影响油茶磷吸收与利用效率。

  • 标签: 油茶 苹果酸转运体 低磷胁迫下 基因克隆 表达分析
  • 简介:小白菜为试验材料,在水培条件下,研究叶面喷施不同浓度黄腐酸(0.08%,0.15%,0.25%)硝酸盐胁迫下(120mmol/L)小白菜活性氧代谢及相关基因表达影响。结果表明,硝酸盐胁迫可引起小白菜叶片中MDA、O2^-H2O2含量增加,生长受到抑制;硝酸盐胁迫下施用黄腐酸(fulvicacid,FA)能显著促进小白菜生长发育,提高膜稳定指数抗氧化酶活性,增加脯氨酸可溶性糖等渗透调节物质含量,减少O2^-H2O2积累,其中处理Ⅳ(0.15%FA)处理效果最好;随黄腐酸浓度增加,活性氧代谢相关基因Cu/Zn-SODPOD表达水平呈先升趋势,CAT基因表达水平持续增加,APX基因表达水平则表现为先降升随后下降趋势,其中Cu/Zn-SOD、PODAPX基因表达水平均在处理Ⅳ(0.15%FA)时达到顶峰,CAT基因表达水平在处理Ⅴ(0.25%FA)时最高。适宜浓度黄腐酸可有效缓解硝酸盐胁迫小白菜造成伤害,增强其抗盐性。本研究通过喷施外源黄腐酸,研究其硝酸盐胁迫下小白菜生长、活性氧、渗透调节物、抗氧化酶活性及相关基因表达影响,为探讨黄腐酸调控蔬菜盐害提供理论依据。

  • 标签: 黄腐酸 硝酸盐胁迫 小白菜 活性氧 基因表达
  • 简介:不论是野生还是离体条件下,珠芽均是植物进行繁殖再生重要器官,已从多方面进行了研究,但缺乏全面系统介绍。本综述从植物珠芽定义、起源与发生部位、发育过程、显微结构、生理生态及实际生产中作用等方面介绍了珠芽研究进展,认为植物珠芽可着生于叶腋、花序或叶片表面,是由薄壁细胞分裂分化而来;珠芽发育一般经历了启动、膨大和成熟三个阶段,与内源激素含量变化有关;珠芽在数量、萌发率生活力等方面有明显优势,是良种繁育种群繁衍高效方式;并探讨了珠芽形成分子机制,未来珠芽研发进行了展望。

  • 标签: 珠芽 发育过程 形成机制 研究应用
  • 简介:49份申请品种保护提供品种47份收集草莓已知品种为材料,通过从208草莓SSR引物中筛选出20多态性好核心引物,采用变性聚丙烯酰氨凝胶电泳检测毛细光电泳检测相结合方式96份草莓品种进行标记分析,检测每个标记不同等位变异大小,并为每个等位变异选取了相应参照品种。结果显示:20引物共检测出206个等位位点,每对引物检测到等位位点6~15个平均10.3个;共检测到600个带型,每对引物检测到带型数11~58个,平均30个,平均多态性信息含量(polymorphisminformationcontent,PI

  • 标签: 品种指纹 图谱构建 指纹图谱
  • 简介:本文应用CTAB法从37种竹类植物中提取基因组DNA,根据在GenBank中发表5SrDNAITSmatK基因设计引物,通过PCR进行扩增。结果表明:37种竹子5SrDNAITS序列PCR产物大小约为450bp,在刚竹属内部无长度上差异,但是舒竹(Phyllostachysshuchengensis)与其他刚竹属植物相比,一个位点差异(由A变为C)。因此,5SrDNAITS在属下水平上无法提供较大信息量,变异性较低,不适于刚竹属属下水平系统分类研究。同样,选取37种竹子中3个竹种matK基因PCR扩增产物直接进行测序,结果显示matK基因在竹亚科属间长度上无差异,产物长度约为1500bp,将测序结果进行同源性比对,在变异位点附近寻找多态性酶切位点,碱基序列上有一个位点差异(BstNⅠ)。PCR-RFLP结果显示,共有3种竹子在此位点发生变异分别为:浙江淡竹(Phyllostachysmeyeri)、安吉金竹(Phyllostachysparvifolia)黄古竹(phyllostachysangusta)。刚竹属植物基因序列相当保守,片段中刚竹属间绝对核苷酸差异不到1个,所提供信息量不够充分。因此,叶绿体5SrDNAITSmatK基因序列不适用于刚竹属植物系统分类研究,但其可能适合在属或属以上分类等级竹类植物系统分类中应用。

  • 标签: 竹亚科 刚竹属 5S RDNA ITS基因 MATK基因
  • 简介:MADS-box基因家族中AG(AGAMOUS)基因心皮胚珠发育起重要作用。本研究甜樱桃(PrunusaviumL.)为试验材料,通过RT-PCR扩增AG保守片段,利用RACE技术获得一个全长表达序列,采用实时荧光定量方法研究了外源赤霉素该基因表达影响。结果表明:(1)所获得基因PaMADS5(Genebank登录号:JQ686726),全长为1092bp,编码246个氨基酸;(2)蛋白同源性分析系统进化分析表明,PaMADS5属于MADS-box家族中AG亚族;组织特异性分析表明,PaMADS5在花雄蕊心皮中表达。(3)PaMADS5在雌蕊中表达量受赤霉素影响,随着赤霉素处理浓度升高,PaMADS5表达逐渐升高,表明PaMADS5可能参与调控甜樱桃雌蕊发育。

  • 标签: 甜樱桃 AGAMOUS 基因克隆 赤霉素处理 实时荧光定量PCR
  • 简介:寄主诱导基因沉默(hostinducedgenesilencing,HIGS)技术是基于RNAi而发展起来新技术,它既可以从反向遗传学方向鉴定植物病原真菌基因功能,又可以通过在寄主植物中表达沉默病原物特定基因HIGS载体,达到控制病原菌扩展,提高作物抗病性目的。因此HIGS在研究植物病原真菌致病机理作物抗病育种中极具应用前景。HIGS技术从报道以来在植物保护领域得到了广泛运用,其适用范围广,可以在多种病原真菌中进行应用,特别对于难培养难以进行遗传转化真菌。并可以在植物抗病育种中发挥更大空间,为病害防治提供可靠策略。本综述总结概括了HIGS技术原理和它在植物病原丝状真菌研究最新进展,为该技术在更多植物病原真菌使用提供参考依据。

  • 标签: 寄主诱导基因沉默 丝状真菌 致病基因 抗病育种
  • 简介:大豆花叶病毒SMV抗性遗传研究一直是大豆抗病遗传研究热点之一。本研究哈91R3—301×黑农41组合构建了遗传群体,其F2分离单株SSR标记基因型基本符合1:2:1比例,说明这个群体没有偏分离。根据F3株系病情指数分布推测SMV3F2成株抗性似乎由多基因控制。根据SSR分子标记基因型F2:3株系SMV3抗病性表型结果连锁分析,推测Satt296是与大豆花叶病毒(SMV)3号株系抗性主基因连锁分子标记,应用Joinmap作图软件将该标记定位在D1b连锁群上,这一结果与部分文献报道研究结果一致。本研究获得与抗性基因连锁分子标记在其他RIL群体中验证得到了初步证实,推测定位在D1b连锁群上抗性座位可能是控制SMV3主基因之一,该标记可望应用于大豆抗SMV3分子标记辅助选择。

  • 标签: 大豆 大豆花叶病毒 SMV3抗性遗传 SSR标记