简介：造血干细胞因其具有自我更新和多向分化能力而成为基因治疗的理想靶细胞，但由于逆转录病毒介导的造血干细胞基因转染效率低，外源基因表达时间短等，大大影响了造血干细胞基因治疗的临床应用。为克服上速难点，目前的研究策略主要集中在构建新型理想的逆转录病毒载体及从不同的方面优化转染体系，从而提高基因转染效率。

简介：目的构建人雌激素受体相关受体α(hERRα)逆转录病毒载体.方法用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切pSG-hERRα质粒和pLXSN空白质粒,采用凝胶DNA回收方法回收纯化hERRα片段,用T4连接酶进行连接反应,构建成PLXSN-neo-hERRα重组体.结果经pCR、酶切鉴定、测序等对重组体进行鉴定,证实构建的重组体方向、序列正确.结论已成功构建hERRα逆转录病毒载体,为研究hERRα的功能奠定了基础.

简介：目的建立不同水源中GⅡ型诺如病毒(NoVGⅡ)实时荧光逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测方法,对某市疾病预防控制中心送检的10份疑似引起诺如病毒中毒的水样进行NoVGⅡ检测。方法以瓶装水、河水和生活污水为研究对象,采用硝酸纤维素膜-聚乙二醇(PEG)沉淀法富集病毒,对取样体积、病毒洗脱条件、PEG终浓度及PEG沉淀条件等进行了优化,提取病毒RNA、建立实时荧光RT-PCR检测方法;通过外加MS2计算方法的回收率,评价所建方法对水样中诺如病毒的回收效果。结果建立的方法对瓶装水、河水和生活污水中NoVGⅡ的平均回收率分别为(60.1±8.0)%、(22.0±6.5)%和(35.7±8.1)%,10份送检水样中3份检出NoVGⅡ。结论建立的实时荧光RT-PCR方法适用于瓶装水、河水和生活污水中NoVGⅡ的检测,饮用水被NoVGⅡ是引发某市人员中毒的原因之一。

简介：摘要目的建立基于SYBR Green I颜色判定的检测新型冠状病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2）ORF1ab基因的逆转录环介导等温扩增方法（reverse transcription loop-mediated isothermal amplification，RT-LAMP），为诊断SARS-CoV-2提供简便、快速和准确可靠的工具。方法基于GenBank中SARS-CoV-2 ORF1ab基因序列保守区设计引物，经引物筛选和RT-LAMP反应体系优化后进行灵敏度和特异性评价，并与实时荧光定量RT-PCR（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）方法进行比较。结果基于颜色判定的RT-LAMP方法可在65℃45 min内完成SARS-CoV-2的快速检测，检测限为3 copies/reaction，与qRT-PCR的敏感度一致。RT-LAMP检测人冠状病毒OC43、人冠状病毒NL63和乙型流感病毒核酸样本结果为阴性，具有较好的特异性。经SARS-CoV-2临床样本验证，RT-LAMP与qRT-PCR的检测符合率达100%。结论基于颜色判定的RT-LAMP方法灵敏度高、特异性强，适用于SARS-CoV-2的快速可视化检测，具有应用于SARS-CoV-2样本的初筛及基层卫生医疗机构和现场推广的潜力。

简介：目的构建GATA-3特异性短发夹状RNA（shRNA）逆转录病毒表达载体。方法设计、合成两对GATA-3编码基因的反向重复序列，中间插入9个碱基的短发夹，经退火形成互补双链，再克隆至逆转录病毒载体RNAi-RelypSIREN-RetroQ。结果构建的重组逆转录病毒载体可以被限制性内切酶BamHI,EcoRI切开，电泳可显示相应条带，经测序其序列与设计的一致。结论成功构建GATA-3特异性shRNA逆转录病毒载体RetmQ／GATA-3／shRNA，为进一步进行肿瘤细胞GATA-3基因沉默的研究奠定了基础。

简介：摘要抗逆转录病毒治疗是一个长期的治疗过程，病人的依从性决定着治疗的效果。然而，对于静脉吸毒感染艾滋病的病人来说，由于种种特殊因素的存在，导致服药依从性较差，治疗效果不理想甚至治疗失败。探索影响吸毒人群接受抗病毒治疗的各种问题，提出合理、科学的应对措施，是吸毒感染艾滋病病人较多的艾滋病高流行地区防治工作的重要研究课题。

简介：目的观察高效抗逆转录病毒治疗对艾滋病病人机体免疫重建的作用。方法以前瞻性队列研究方式对48例人组治疗病人分别在治疗前和治疗半年、1年后检测病人的外周血CD4^＋T细胞和血浆RNA。结果经半年和1年治疗后，外周血CD4^＋T细胞≥200／mm^3的病例分别为30．23％和32．56％；血浆RNA≤5×10^2copies／ml的病例分别为62．50％和94．29％；外周血CD4^＋T细胞计数增量与血浆RNA病毒载量的下降幅度呈正相关关系（r=0．647，P〈0．001），78例艾滋病病人治疗满1年并存活的比例为91．03％。结论通过高效抗逆转录病毒治疗，艾滋病病人的免疫功能得到了重建。

简介：摘要目的构建在人肝癌HepG2细胞内可稳定表达血管内皮生长因子受体3(VEGFR3)的逆转录病毒载体。方法采用PCR技术扩增VEGFR3片段，克隆至pBABE-puro质粒，构建重组质粒pBABE-puro-VEGFR3，经PCR、酶切、测序等验证后，体外与PIK包装质粒共同转染293FT细胞，获得携带VEGFR3基因的重组逆转录病毒，感染人肝癌HepG2细胞，获得转入VEGFR3的HepG2细胞，通过QPCR和Westernblot进一步验证VEGFR3在HepG2细胞内的表达。结果①获得携带VEGFR3基因的重组质粒pBABE-puro-VEGFR3和人肝癌细胞株HepG2-pBABE-puro-VEGFR3；②QPCR和Westernblot分别检测到VEGFR3在靶细胞HepG2-pBABE-puro-VEGFR3中的稳定表达。结论成功构建了携带VEGFR3基因的人肝癌细胞重组逆转录病毒载体。

简介：<正>获得性免疫缺陷综合征(acquiredimmunodeficiencysyndrome,AIDS),又称艾滋病,是由人类免疫缺陷病毒(humanimmunodeficiencyvirus,HIV)感染所致。HIV感染/AIDS是世界上严重的公共卫生问题,尤其是在中低收入的国家。根据世界卫生组织(WorldHealthOrganization,WHO)的数据,截止到2013年末,全世界有3500万人感染

简介：摘要目的为探讨高效抗逆转录病毒治疗的效果，以指导抗病毒治疗工作顺利开展，达到降低艾滋病患者发病率和病死率的目的。方法收集我单位32例治疗满1年的AIDS患者的临床资料并加以统计分析。结果经治疗1年后，所有病例病毒载量均在检测水平以下，CD4+T淋巴细胞计数获得不同程度提升，治疗期间无新发艾滋病相关性机会性感染；治疗期间发生头晕不良反应29例。结论在服药依从性良好的情况下，高效抗逆转录病毒治疗可有效抑制艾滋病病毒，提升CD4+T淋巴细胞计数水平，极大程度降低了艾滋病患者发病率和病死率。

简介：目的构建并鉴定C—erbB-2特异性siRNA逆转录病毒载体。方法体外合成含针对C—erbB-2特异基因序列的寡核苷酸，并定向克隆入逆转录病毒载体RNAi—ReadypSIREN—RetroQ。结果构建的重组逆转录病毒载体可以被限制性内切酶MIuI、BamHI、EcoRI切开，电泳可显示相应条带，经测序其序列与设计的一致。结论成功构建了C—erbB-2特异性siRNA逆转录病毒载体pRetroQ／C—erbB-2／siRNA-1、pRetroQ／C—erbB-2／siRNA-2、pSIREN—RetroQ／C—erbB-2／siR—NA-3，为进一步研究p185基因沉默奠定了基础。

简介：摘要目的探讨钦州市艾滋病病人高效抗逆转录病毒治疗（HAART）依从性的影响因素。方法采用统一的AIDS医疗救治疗效评估调查表回顾性分析艾滋病患者的临床资料，比较依从性好与依从性差的患者在社会人口学因素、心理维度、社会关系维度变量上的差异。结果抗病毒治疗的艾滋病病人依从性好与依从性差的患者在社会人口学因素、心理维度社会关系维度变量上差别没有统计学意义（P>0.05)。结论深入的艾滋病健康教育、预防干预、心理支持，提高患者自我意识是保证艾滋病长期规范治疗的可行策略。

简介：

简介：摘要目的探讨艾滋病合并急性盆腔炎采用高效抗逆转录病毒治疗的临床疗效。方法收集我中心江北门诊和抗病毒治疗点2016年8月至2017年8月收治的60例艾滋病合并急性盆腔炎患者临床资料作回顾性分析，所有患者均使用高效抗逆转录病毒治疗3个月，比较患者治疗前后的HIV病毒载量以及分泌物分级情况。结果治疗3个月后，①患者HIV病毒载量＜100052例，1000-49998例，均比治疗前显著降低（P＜0.05）；②患者分泌物分级情况阴道杆菌++11例，+49例；球菌+++1例，++12例，+47例；上皮细胞++++48例，+++11例，++1例，均显著优于治疗前（P＜0.05）。结论艾滋病合并急性盆腔炎采用高效抗逆转录病毒治疗后，可有效降低患者HIV病毒载量，且患者的阴道杆菌、球菌、上皮细胞指标均有显著改善，具有较好的临床疗效。

简介：背景与目的：同源盒基因是生物发育调节的主控基因，具体作用体现在调控DNA的转录过程。近年来已发现多种恶性肿瘤中有不同种类的同源盒基因异常表达。胶质瘤中同源盒基因的表达尚未全部确定。本研究旨在观察胶质瘤细胞C6中异常表达的同源盒基因中HoxA族基因的种类。方法：应用HoxA族基因特异引物，对原代培养大鼠正常脑组织星形胶质细胞和胶质瘤C6细胞进行逆转录PCR。结合图像分析法分组检测HoxA族11种基因mRNA的表达水平。统计分析比较两种细胞中HoxA族基因表达水平。Hox基因表达水平用基因／β-肌动蛋白（β—actin）灰度比值表示。结果：HoxA3、A5、A6、A7、A9、A11、A13基因在正常脑组织和C6细胞中表达没有显著差异；HoxA1基因在正常大鼠和胶质瘤细胞C6中表达虽有显著差异，但均为弱表达；HoxA4基因在正常脑组织中弱表达，在C6细胞中有明显表达，二者比较，差异显著（P〈0.01）；HoxA2、HoxA10基因在正常大鼠脑组织中未见表达，在胶质瘤细胞c6中有明显表达。结论：HoxA2、A4、A10基因mRNA表达增高，可能与胶质瘤的发生、发展相关。

简介：【摘要】目的：观察探讨应用艾可清胶囊与高效抗病毒逆转录疗法（HAART）联合治疗对艾滋病患者的临床治疗效果。方法：选取我院2018年10月~2020年10月期间收治的艾滋病患者88例，随机分为观察组和对照组各44例。对照组采取HAART疗法，观察组在对照组基础上联合艾可清胶囊治疗。

简介：目的：利用TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ—RT—PCR)检测强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞白细胞介素-2受体α(IL-2Rα)mRNA的表达水平，并进行疾病的活动性相关分析。方法：用PrimerExpressv2．0软件，根据GenBank提供的序列，在人IL-2RαmRNA的第2和第3外显子之间设计一对引物和一条TaqMan探针。提取总RNA，加入已优化的一步法FQ—RT—PCR反应体系，扩增产物经凝胶电泳后切胶回收，并与pUCm—T载体连接。制备好的重组质粒转化感受态细胞进行克隆。经测序分析确定为特异性片段后，用T7RNA聚合酶转录为cRNA，作为FQ—RT—PCR系列浓度标准品。评价FQ—RT—PCR检测IL-2RαmRNA的特异性、线性、精密度和探针稳定性等。定量测定HLA—B27阳性活动组与阴性非活动组强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞IL-2RαmRNA基因的表达水平，结合血浆可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2R)浓度，探讨与炎症活动的相互关系。结果：成功构建了cRNA标准品。该方法的线性范围为7～107cells／ml，其批内CV8．4％，批间CV9．6％；扩增产物克隆的双向测序结果经BLAST比较、分析，证实为IL-2RαmRNA特异性片段。对各30例HLA—B27阳性与阴性的强直性脊柱炎的测定表明：与正常人对照组结果比较，HLA—B27阳性组与HLA—B27阴性组IL-2RαmRNA和sIL-2R都有明显增加(P<0．01)。IL-2RαmRNA对炎症活动评价的灵敏度为96．7％。结论：FQ—RT—PCR具有灵敏、特异、结果重复性好等优点；IL-2RαmRNA与sIL-2R比较更能反映强直性脊柱炎患者的免疫状态，可能为免疫药物的疗效评价和药物筛选提供基因表达水平上的信息。

简介：摘要目的探讨高效抗逆转录病毒治疗（HAART）过程中的临床毒副作用及疗效的动态变化。方法选择自2010年3月-2017年6月我院门诊初治的152例接受高效抗逆转录病毒药物治疗（HAART）患者，分析其临床毒副作用及治疗方案的变更和疗效。结果152例患者中有48例（31.58%）出现药物毒副作用，其中胃肠道反应32例（66.7%）、骨髓抑制7例（14.58%）、肝毒性8例（16.67%）、药疹4例（8.33%）。其他毒副反应如脂肪重分布，末梢神经炎等均有少量发生。结论接受高效抗逆转录病毒治疗的艾滋病患者临床毒副作用发生率较高，需密切观察并对症处理。长期服用药物的患者需要保肝治疗。

简介：摘要目的探讨提高艾滋病（AIDS）合并恶性肿瘤患者抗逆转录病毒+穴位注射治疗效果的方法，为提高患者生活水平和降低治疗费用提供依据。方法对照组30例用抗逆转录病毒治疗，治疗组30例在对照组用抗逆转录病毒治疗的基础上加用足三里穴位注射治疗，疗程为3个月，观察治疗前后两组患者CD4+T细胞计数和HIV裁量变化情况。结果治疗前两组患者CD4+T细胞计数和HIV裁量差异无统计学意义（P＞0.05），治疗后，治疗组CD4+T细胞计数较对照组高（P＜0.01），HIV裁量较对照组低（P＜0.01）。结论对于合并有恶性肿瘤的艾滋病患者，配合足三里穴位注射治疗，可以提高治疗效果，表现为配合足三里穴位注射胸腺肽治疗的患者其CD4+T细胞计数改善幅度和HIV裁量控制幅度优于对照组。

简介：目的构建具有高效转染率且含有标记基因的携带白介素4受体拮抗剂（IL-4RA）基因的重组逆转录病毒载体pLNC-IL-4RA。方法将IL4RA基因插入pLNC—Laz逆转录病毒载体获得重组的逆转录病毒表达载体pLNC—IL-4RA，重组的逆转录病毒表达载体pLNC—IL4RA通过质脂体转染PA317细胞进行包装，PA317抗性克隆经过G418的抗性筛选产生并扩增，将含有病毒的PA317细胞培养液上清收集后转染NIH3T3细胞进行病毒滴度的测定。结果扩增后的G418抗性克隆经过检测和滴度测定结果显示含有目的基因的逆转录病毒最高的病毒滴度为1×10^4CFU／mL。选择含有最高病毒滴度的PA317细胞抗性克隆进行基因组的提取和鉴定，结果显示目的基因IL-4RA成功地整合到了宿主的基因组中。结论含有目的基因IL-4RA的逆转录病毒载体经过PA317细胞包装后获得了较高的病毒滴度，为下一步哮喘模型的基因治疗打下了基础。