简介:目的探讨骨髓间充质干细胞静脉输注对大鼠免疫功能的影响.方法实验组和对照组大鼠尾静脉分别注射骨髓间充质干细胞和生理盐水3次,观察大鼠一般情况,第10天处死,流式细胞仪检测CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群,ELISA法检测血清IL-10、IL-2、TNF-a含量.结果两组大鼠一般情况无统计学差异;实验组大鼠血清CD4+计数降低,CD8+计数升高,CD4+/CD8+比值下降,与对照组相比有统计学差异(P<0.05):实验组大鼠血清IL-10升高,IL-2降低,与对照组相比有统计学差异(P<0.05);两组TNF-a无统计学差异.结论骨髓间充质干细胞静脉输注能负性调节大鼠免疫功能.
简介:目的前期研究表明,膜型TNF-α较分泌型TNF-α具有更强和更广的细胞毒作用,本研究拟进一步研究两型TNF-α介导胞毒效应的差异。方法采用对两型TNF-α反应性不同的HL-60为靶细胞;MTT法检测两型TNF-α对HL-60的胞毒活性;RT-SSCP法检测p53基因;通过检测荧光素酶报告基因表达水平,反映NF-kB活性的变化。结果TM-TNF可以有效杀伤HL-60,S-TNF则不能。S-TNF诱导HL-60的NF-kB活性升高,TM-TNF则不能诱导HL-60的NF-kB活性升高。同时我们发现HL-60细胞的p53基因是突变的。结论HL-60细胞对S-TNF胞毒作用耐受,对TM-TNF敏感;此种差异可能在于TM—TNF能够有效抑制NF-kB的激活,进而下调突变p53基因,最终导致其抗凋亡效应减弱,杀伤效应增强,其具体机制有待深入研究。
简介:Objective:Todeterminewhetherpyrrolidinedithio-carbamate(PDTC)enhancesTNFα-inducedapoptosisinculturedbreastcancercellsandexploretheroleofNF-κBinTNFα-inducedapoptosis.Methods:HumanbreastcancercelllinesMCF-7andMDA-MB-435sweretreatedwithTNFα,PDTCandcombinationtherapy.CellsurvivalsweredeterminedbyMTTassay.ApoptosiswasdetectedbyTUNELandflowcytometry.NF-κBDNAbindingactivitywasdetectedusingelectrophoresismobilityshiftassay(EMSA).WesternblotswereperformedtodemonstrateIκBα(InhibitorproteinofnuclearfactorκB)phosphorylationanddegradation.Results:CellgrowthwasnotsuppressedbyeitherTNFα(2000U/mlorless)orPDTCalone.BothcelllinestreatedwithTNFα(2000U/ml)combinedwithPDTC(50μmol/L)showedsignificantgrowthinhibition.PDTCinhibitedTNFα-inducedIκBαphosphorylationanddegradationinbothcelllines.EMSAshowedthatPDTCcontinuouslyinhibitedTNFαinducedNF-κBDNAbindingactivity.TNFαinducedapoptosis(TUNEL)wasincreasedsignificantlywhenbothcellswerepretreatedwithPDTC,andthiswasconfirmedbyFlowcytometry.Conclusion:PDTCenhancesTNFα-inducedapoptosisviainhibitingIκBαphosphorylationanddegradationinhumanbreastcancercells.NF-κBprotectsagainstTNFα-inducedapoptosis.
简介:客观尽管放射疗法在非小的房间肺癌症(NSCLC)的局部疗法起一个主要作用,很少在这个肿瘤对照耀的分子的效果被知道。在现在的学习,我们在照耀以后为他们TNF-α的内长的生产检验了二根NSCLC房间线。在NSCLC房间线调查导致放射的TNF-α生产。二个人的NSCLC房间衬里的方法(A549:有鳞;NCI-H596:adenosquamous)在暴露以后为他们的TNF-αmRNA(即时RT-PCR)被调查到不同照耀剂量(2,5,10,20,30,40Gy);时间间隔(1,3,6,12,24,48或72h)。TNF-αmRNA表示被即时RT-PCR确定。clonogenic幸存与2在照耀以后被评估,4,6;8Gy。非照耀的NSCLC房间不或很展出了的结果低TNF-α表示。为NCI-H596房间线,TNF-α表示显著地被提高1~12h(最大的6h:相对unirradiated房间的568fold增加)以一种时间依赖者方式。导致放射的增加能比正常控制高在照耀以后被观察,在40Gy最大的2Gy到达,与83次。这些房间线的clonogenic幸存是将近相同的。结论NCI-H596房间在一时间生产TNF-α追随者照耀的重要数量--并且剂量依赖者举止。支持inflammatorycytokineTNF-α是为放射肺炎的致病的一个关键调停人。在NSCLC房间的导致放射的内长的TNF-α表示可以影响邻近肿瘤的正常的肺;可以与病人的不利临床的结果被联系。
简介:目的:研究益气清热养阴中药对晚期肺癌恶病质小鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及其受体(TNFR1、TNFR2)表达的影响。方法:建立小鼠Lewis肺癌胸腔移植恶病质模型,随机分为6组:正常对照组(NC)、模型对照组(MC)、中药组(TCM)、消炎痛组(IND)、顺铂组(DDP)、甲羟孕酮组(MPA)。ELISA法检测恶病质小鼠血清中TNF-α水平变化;免疫组织化学法(IHC)检测肿瘤组织中TNF-α、TNFR1、TNFR2的表达情况。结果:除正常对照组外,中药组中TNF-α的血清浓度明显低于其他组(P〈0.05)。肿瘤组织IHC:中药组TNF-α和TNFR1表达较其他组有不同程度减少(P〈0.05);而TNFR2表达较其他组增加(P〈0.05)。结论:益气清热养阴中药可能通过调节TNF-α、TNFR1和TNFR2的表达发挥抗癌性恶病质的作用。
简介:目的:构建双特异性细胞因子融合基因表达载体及在肝细胞癌细胞中瞬时表达。方法:应用PCR方法对各目的基因进行扩增并经测序载体pGEM-T-Easy测序后,以逆转录病毒载体pLXSN中的多克隆位点将二者融合为融合基因TK-TNF-α,并将其亚克隆至pEGFP-N3的EcoRl和BamHl位点间,成功地构建表达载体pEGFP-TK-TNF-α仅,并在该载体转染人肝细胞癌细胞HCC9204后观察融合蛋白表达情况。结果:酶切鉴定证实TK-TNF-α融合基因片段已克隆到pEGFP-N3的EcoRl和BamHl位点问,并在转染人肝细胞癌细胞7901中观察到TK-TNF-α融合基因绿色荧光蛋白的表达。结论:pEGFP-TK-TNF-α表达载体便于观察转染细胞中融合蛋白的表达情况及蛋白定位,为双特异细胞因子基因疗法提供有利条件。