简介：目的观察敲减BTBD7基因后人乳腺癌MCF-7细胞的运动侵袭能力的变化,并探讨其作用机制。方法将经慢病毒转染shRNA,敲减BTBD7基因表达后的细胞作为实验组（MCF-7-shBTBD7）,未进行慢病毒转染的细胞为对照组（MCF-7-vec）。应用划痕愈合实验、Transwell侵袭实验、MTT法绘制细胞生长曲线等方法来检测实验组和对照组内MCF-7细胞的侵袭转移以及增殖能力之间的区别,两组试验结果比较采取独立样本t检验。在此基础上通过肿瘤信号通路筛选芯片筛选出BTBD7作用的下游信号通路,并以Westernblot实验验证这条信号通路是否确实参与其中发挥作用。结果划痕愈合实验结果显示,与对照组相比,实验组MCF-7细胞的迁移能力显著降低[24h愈合率：（85.95±5.30）%比（43.38±4.01）%,t=18.108,P〈0.001];Transwell侵袭实验显示实验组和对照组细胞侵袭能力出现明显的差别,与对照组相比,实验组细胞的侵袭能力显著降低（24h细胞计数：152±7比50±8,t=27.378,P〈0.001）;MTT实验显示从第4天开始两组细胞增殖能力出现差异,对照组细胞数为（3.17±0.23）×10^4/ml,明显高于实验组的细胞数为（2.58±0.21）×10^4/ml,差异具有统计学意义（t=3.189,P〈0.050）;第7天对照组的细胞数为（9.57±0.36）×10~4/ml,仍然显著高于实验组的细胞数（7.29±0.37）×10^4/ml,差异具有统计学意义（t=7.654,P〈0.050）。通过双荧光素酶检测系统检测肿瘤信号通路筛选芯片的结果表明Wnt信号通路的相对荧光强度在两组间差异有统计学意义（t=12.509,P〈0.001）,Westernblot实验结果同样表明,与对照组相比,实验组的c-Myc、MMP-7以及β-catenin的蛋白水平均发生变化。结论BTBD7基因可能通过作用于Wnt/β-catenin信号通路促进人乳腺癌MCF-7细胞的侵袭转移。

简介：目的探讨第三代杂交捕获技术定量分型（daltonbiohybridcapture3,DH3）检测高危型人乳状瘤病毒（humanpapilomavirus,HPV）在宫颈癌筛查中的应用价值。方法采用DH3和第二代杂交捕获技术（HC2）检测264例宫颈癌筛查女性宫颈脱落细胞的HPV,同时行TCT检查,TCT结果异常者（≥意义不明确的非典型鳞状细胞）行阴道镜下宫颈活检。比较两种方法检测HPV结果的一致性及检出宫颈病变情况。结果264例女性中,HC2法检出HPV阳性者32例（12.12%）。DH3法检出HPV阳性者39例（14.77%）,其中HPV16/18阳性患者14例（35.90%）。264例女性中,DH3和HC2检出HPV结果的符合率为94.32%（249/264）;15例结果不一致,其中8例的检测值在临界值,排除此8例后再次统计分析,符合率为97.27%（249/256）。264例中TCT异常者10例,阴道镜下宫颈活检LSIL1例、HSIL2例、宫颈癌1例。DH3HPV16/18阳性女性TCT异常及宫颈病变检出率（71.43%,10/14;21.42%,3/14）显著高于HC2HPV阳性检出率（31.25%,10/32;9.38%,3/32）（P〈0.05）。结论DH3与HC2检测高危型HPV符合率高,DH3HPV16/18阳性宫颈病变检出率高,DH3技术可作为临床上宫颈癌初筛的有效手段。

简介：目的探讨针对多药耐药基因（MDR-1）的小分子干扰RNA（siRNAs）和反义脱氧寡核苷酸（asODNs）联合应用逆转人乳腺癌细胞MCF-7／ADR的作用效果。方法设计并合成针对MDR-1基因同一序列的siRNAs和asODNs及阴性对照siRNAs，采用转染试剂lipofectamine^TM2000分别转染人乳腺癌耐药细胞MCF-7／ADR；利用RT—PCR检测MDR—1mRNA和Westernblot检测MDR-1蛋白质的表达；采用罗丹明123外排实验检测P—gP的转运功能，MTT法检测MCF-7／ADR细胞对阿霉素的耐药逆转效果。结果siRNAs、asODNs、asODNs和siRNAs联合应用均能降低MDR-1mRNA及其蛋白质表达，提高P—gP的转运功能，使细胞对阿霉素的敏感性明显恢复；asODNs和siRNAs联合应用效果明显提高；低浓度siRNAs（200mmol／L）比高浓度asODNs（5umol／L）的效果强。结论siRNAs、asODNs能有效逆转人乳腺癌细胞MCF-7／ADR的多药耐药，asODNs和siRNAs联合应用效果明显加强。

简介：目的探讨生育期妇女宫颈上皮内瘤变（CIN）中高危型人乳头瘤病毒（HR—HPV）感染与Ki一67表达的关系。方法通过第二代杂交捕获方法（HC2）检测248例生育期妇女HR—HPV感染情况，同时采用免疫组化法测定Ki-67的表达情况。结果①正常或慢性宫颈炎组、CIN1、CIN2和CIN3组HR—HPV感染率分别为14％（7／50）、55．1％（38／69）、88．7％（63／71）和93．1％（54／58），差异有统计学意义（P〈0．05），②各级别CIN患者HR—HPV载量明显高于正常或慢性宫颈炎组，差异有统计学意义（P〈0．05），CIN各组HR—HPV载量两两比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）；③HR-HPV病毒载量与Ki-67呈正相关（r=0．817，P〈0．05）。结论HR-HPV载量持续高表达可能引起组织中Ki-67异常表达，可能是低级别CIN进展为高级别的原因。

简介：目的研究高危型人乳头瘤病毒（high-riskhumanpapillomavirus,hrHPV）E6/E7mRNA在结果意义不明的非典型鳞状上皮细胞（atypicalsquamouscellsofundeterminedsignificance,ASCUS）中的分流效率,探索其在ASCUS分流中的临床价值。方法选取2013年至2015年在青岛市立医院妇科门诊行细胞学筛查结果为ASCUS的女性405例,年龄21~65岁。根据HPV检测方法,分为3组：HC2组、HPV分型组、hrHPVE6/E7mRNA（E6/E7）组。比较3种HPV检测方法分流ASCUS的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、阴道镜转诊率、CIN2~＋/CIN3~＋检出率。结果（1）E6/E7分流ASCUS的CIN2~＋灵敏度为100.00%（90.51%~100.00%）,CIN2~＋/CIN3~＋的特异度分别为64.84%（53.06%~75.99%）、56.46%（43.98%~69.72%）,阴性预测值分别为100.00%（99.41%~100.00%）、100.00%（99.34%~100.00%）,与HC2和HPV分型比较差异无统计学意义（P〉0.05）。阳性预测值分别为40.79%（37.91%~44.29%）、15.79%（10.07%~20.94%）,高于HC2（P〈0.05）。阴道镜转诊率为47.80%,低于HC2和HPV分型（P〈0.05）。CIN2~＋检出率为19.50%,高于HC2（P〈0.05）。（2）E6/E7分流ASCUS检测CIN2~＋的曲线下面积为0.815,〉HC2和HPV分型（P〈0.05）。结论hrHPVE6/E7mRNA分流ASCUS的灵敏度、特异度与HC2相似,PPV和CIN2~＋检出率更高,阴道镜转诊率更低,可用于ASCUS的分流。