简介:造血干细胞是最重要的成体干细胞之一,通常认为其能够通过程序性的分裂完成自我更新,并具备向下分化为完整血细胞谱系的能力,因此,自体造血干细胞被认为是人类血液疾病的治疗手段之一,受到了较大的关注和重视。由于哺乳动物的造血干细胞能够在成体中被分离出来并实现体外培养,因此关于其分裂和分化的行为倾向和调节因子方面的研究也已相当成熟、然而。囿于哺乳动物营胎生造成胚胎期活体观察的诸多不便,造血干细胞在体内的产生方式一直以来都悬而未决。本研究中使用的斑马鱼是一种硬骨鱼类,其在进化水平上与哺乳动物具有很高的相似性,具备相对完善的血液系统,更重要的是,在受精后0~7天(f)~7dpfdayspostfertilization)的斑马鱼幼鱼的皮肤是通体透明的、本研究基于此项独特优势,使用荧光蛋白转基因斑马鱼品系,实现在体观察尾部动脉血管腹侧壁的造血干细胞产生过程。后又使用另一个可变色荧光蛋白转基因品系TgLL将既有研究中发现的背部动脉前段产生之造血干细胞和尾部产生之造血干细胞进行分别标记和追踪,得出这两批产生时间和产生位置均不相同的造血干细胞在分裂和分化上的异同,希望能为斑马鱼和哺乳动物造血系统的相关研究提供新的思路和依据。
简介:目的通过显微注射吗啡啉修饰的反义寡核苷酸(MO)阻抑视黄醛脱氢酶2(raldh2)基因表达,探讨raldh2基因阻抑对斑马鱼胚胎心脏发育的影响及可能的分子机制。方法根据斑马鱼raldh2基因起始密码区域序列设计合成吗啡啉修饰的反义寡核苷酸,采用显微注射方法阻抑斑马鱼胚胎raldh2基因表达。构建raldh2-EG-FP重组质粒进一步验证MO的特异性和有效性。分析raldh2基因阻抑后对胚胎发育,尤其心脏表型和功能的影响。通过胚胎整体原位杂交,分析心脏相关nppa和tbx20基因表达模式以及raldh2阻抑后对其表达的影响。结果显微注射raldh2-MO能有效地特异地阻抑斑马鱼胚胎raldh2基因表达,raldh2-MO对胚胎发育影响呈剂量依赖性。raldh2基因阻抑可导致胚胎心脏发育畸形,干扰正常的房室分化和向右环化,导致房室瓣血液反流。与野生型胚胎比较,raldh2基因阻抑组胚胎心率和心室收缩分数降低(P〈0.05),心功能受损。整体原位杂交结果显示raldh2基因阻抑后nppa基因表达改变,心室部位nppa表达清晰,而心房部位表达减弱。tbx20基因在心脏、运动神经元、顶盖及视网膜表达,raldh2基因阻抑后,tbx20表达下调,在心脏表达减弱,以心房和流出道部位更显著。结论raldh2基因在心脏早期发育的多个环节发挥重要作用,影响房室分化、心管环化和心肌收缩等。在心脏发育过程中nppa和tbx20基因表达受到raldh2基因调控,可能参与RA信号缺乏导致心脏畸形的潜在分子机制。
简介:目的建立河鲀鱼DNA条形码鉴定方法,探讨细胞色素氧化酶亚基I(COI)及细胞色素b(cytb)基因对我国常见东方鲀属、兔头鲀属河鲀鱼鱼种鉴定的适用性。方法野捕河鲀鱼经形态学鉴定后,钓取COI及cytb基因序列并测序。从GenBank下载已有河鲀鱼参考序列,分别构建COI及cytb基因分子进化树,确定样品种属并与形态学鉴定比对。应用所建方法对中毒样品进行河鲀成分鉴定。结果COI和cytb基因分子进化树将57份样品聚类到东方鲀属和兔头鲀属的9个鱼种,除棕斑兔头鲀和暗鳍兔头鲀(COI进化树)、暗纹东方鲀和晕环东方鲀(cytb进化树)外,2种条形码均能对其余鱼种进行有效区分。中毒样品经鉴定均含有月兔头鲀。结论所建立的DNA条形码方法可有效鉴定河鲀鱼鱼种,弥补形态学鉴定的缺陷。
简介:摘要目的探讨nicastrin(nct)基因对斑马鱼黑素细胞生物学功能的影响。方法利用吗啉代寡核苷酸(MO)技术针对斑马鱼nct基因mRNA设计nct-MO序列,同时设计对照MO序列(ctrl-MO),并构建5′端为MO靶序列的增强绿色荧光蛋白(EGFP)mRNA,通过显微注射的方式将nct-MO或ctrl-MO与EGFP mRNA共注射入斑马鱼胚胎中,验证nct-MO的沉默效率,观察其表型变化。以野生型斑马鱼作为空白对照组,实时荧光定量PCR检测黑素合成notch信号通路相关基因mitfa、tyr、tyrp1a、tyrp1b、dct、pmela、notch1a、notch1b、hey1 mRNA表达水平的变化。多组间均数比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。结果斑马鱼受精后8 h,ctrl-MO+EGFP mRNA组斑马鱼胚胎中均有绿色荧光表达,而nct-MO+EGFP mRNA组及空白对照组胚胎均未见绿色荧光。受精后48 h,nct-MO组幼鱼尾部色素沉着区面积占比(0.169 ± 0.083)低于ctrl-MO组(0.258 ± 0.042,t=3.202,P=0.005),且nct-MO组色素分布紊乱。实时荧光定量PCR显示,nct-MO组、ctrl-MO组、空白对照组间pmela、tyrp1a、hey1基因mRNA相对表达量差异有统计学意义(均P < 0.05),mitfa、tyr、tyrp1b、dct、notch1a、notch1b mRNA相对表达差异无统计学意义(均P > 0.05);nct-MO组pmela、tyrp1a相对表达水平(0.708 ± 0.028、0.558 ± 0.136)低于ctrl-MO组(1.023 ± 0.142、1.016 ± 0.134,均P < 0.05)。结论nct基因可能通过调控斑马鱼黑素合成影响黑素细胞生物学功能。
简介:关于鱼的故事——鱼的两个版本,是在一次喝茶中无意得来的。那天参加市里在泽镇搞的文学沙龙活动,从泽镇返回已是晚上十点多了。下车后,老全提议去上岛,反正明天是周末大家休息,大家难得聚在一
简介:本文通过实时荧光定量PCR检测了igfbp-1、igfbp-3、igfbp-4、igfbp-5基因在金钱鱼(Scatophagusargus)下丘脑、脑垂体、性腺、鳃、心脏、肾、肝、脾、肠、肌肉组织中的表达量及经过饥饿和复投处理后在肝脏中的表达量差异.结果显示:4种igfbp在金钱鱼11种组织中均有表达,其中igfbp-1在脑垂体和肝脏中表达量最高,在下丘脑和鳃中次之,在肾脏中最低.igfbp-3在脑垂体和肌肉中表达量最高,而在脾脏、胃、肾脏、肠中相对较低;igfbp-4在下丘脑和心脏中表达量最高,在其他组织中较低;igfbp-5在肠、鳃、脾中表达量最高,在肌肉、下丘脑、心脏、肾脏和肝脏中较低.饥饿2d后,金钱鱼肝脏中igfbp-1和igfbp-3基因的表达量组显著升高,而igfbp-4和igfbp-5基因与对照组相比无显著差异;饥饿7d后,肝脏中igfbp-1、igfbp-3、igfbp-4、igfbp-5基因的表达量均较对照组显著升高;在饥饿7d后复投,igfbp-1、igfbp-3、igfbp-4、igfbp-5基因表达量均显著降低.结果表明igfbp-1、igfbp-3、igfbp-4、igfbp-5在金钱鱼的摄食调节中起着重要作用.