简介:用原子力显微镜(AFM)观察线性DNA并探讨其成像条件。用RT-PCR技术扩增柯萨奇B1病毒VP1基因DNA片段,纯化回收后配制成含和不含1mmol/LMgCl2的水溶液,DNA终浓度为100μg/ml。分别取20μl滴加在新鲜解理的云母片上,吸收1min,用滤纸吸去残液,氮气吹干,在室温下采用MultiModeAFMNanoscopeⅢa的敲击模式成像。同时比较新制备和多次使用过的探析所获得图像的质量,对两种探针进行扫描电镜观察。电泳证明获得了0.83kb的VP1基因DNA线性片段,Mg^2+存在时,DNA在云母片上吸附延展较好,所获图像质量优于无Mg^2+时。新制备的探针较多次使用过的探针所获图像分辨率更高。DNA分子的表现宽度为18±2.9nm,高度为0.8±0.2nm。说明AFM能以高分辨率直接观察DNA分子,Mg^2+的存在和高质量的探针有助于获得理想的图象。
简介:AtthestartofournewJournalofBiosafety,IwaspromptedbymyCo-Editors-in-Chief,ProfessorWanandProfessorYou,toprovideregularreviewsorupdatesonbiosafetyforourreaders,giventhatImostlyresideoutsideChina,andhavemanyinternationalconnections.Thatisaverybigtask,andIwasnotsurethatIcoulddoitasthejournaldemands.However,Ihadthoughtthatinalighterway,IcouldattempttopresentmythoughtsonsomeissuesthatIfeelareofimportancetoday.Chinaisveryquicklyopeningtotheworld,economically,scientifically,andinmanyotherfields,andformanycolleaguesinsideandoutsideChina,thisisanewsituation.Duringmycareer,IhaveworkedinseveralcountriesofEurope,inNewZealand,andhadprojectsonothercontinents.Thisgavemeexperiencesindifferentpartsofourglobe,andIfeelthatallofus,ecologists,havetostartthinkingmorewidely,andbeawareofdevelopments,especiallyofhumanimpacts,onfarawayplaces.Somyviewwhenwritingtheseessayswilltrytobebothlocalandglobal.ThereforeIhavechosentheoveralltitleforthisseriesofessays'Thoughtsofatravellingecologist'.Belowyouwillbeabletoreadthefirstone-Ihopeyouwillenjoythem.Ifyoufeelliketoadd,orcommentonmyessays,pleasefeelfreetodoso.Anyfeedbackwillbemostwelcome.
简介:TheyeastHAL1genewasintroducedintoArabidopsisthalianabyAgrobacteriumtumefaciens-mediatedtransformationwithvacuuminfiltrationunderthecontrolofCaMV35Spromoter.Thirty-threeindividualkanamycinresistantplantswereobtainedfrom75,000seeds.SouthernblottinganalysisindicatedthatHAL1genehadbeenintegratedintoallofthetransgenicplants'genomes.ThecopynumberofHAL1geneintransgenicplantswasmostly1to3bySouthernanalysis.Phenotypesoftransgenicplantshavenodifferenceswithwildtypeplants.Severalsamplesoftransformantswereself-pollinated,andprogeniesfromtransformedandnon-transformedplants(controls)wereevaluatedforsalttoleranceandgeneexpression.MeasurementofconcentrationsofintracellularK+andNa+showedthattransgeniclineswereabletoretainlessNa+thanthatofthecontrolundersaltstress.ResultsfromdifferenttestsindicatedtheexpressionofHAL1genepromotesahigherlevelofsalttoleranceinvivointhetransgenicArabidopsisplants.
简介:Brassinosteroids(BR)是植物激素的一个主要的组调整植物生长和开发。BRI1,对质膜局部性的蛋白质,当BR受体和它被建议了,工作它的kinase活动在调整BR的植物生长和开发有一个必要角色。这里,我们报导隔离和bri1的新等位基因的分子的描述,bri1-301,哪个表演中等词法显型和减少的回答到在正常生长条件下面的BR。顺序分析从GG识别了二底的改变到,导致到在BRI1kinase领域的989I的989G的变换在。kinase活动的试管内试金证明bri1-301不向BRI1底层TTL和BAK1举办可检测的autophosphorylation活动或磷酸化活动。而且,我们的结果建议甚至与极其损害的kinase活动,bri1-301仍然在调整植物生长和开发保留部分功能,它提出BRI1kinase活动是否在高等植物为调停BR的生长和开发是必要的问题。
简介:Galα(1,3)Gal(galepitope)isacarbohydrateepitopeandsynthesizedinlargeamountbyα(1,3)galactosyltransferase[α(1,3)GT]enzymeonthecellsoflowermammaliananimalssuchaspigsandmice.Humanhasnogalepitopeduetotheinactivationofα(1,3)GTgenebutproducesalargeamountofantibodies(anti-Gal)whichrecognizeGalα(1,3)Galstructuresspecifically.Inthisstudy,areplicationdeficientrecombinantadenoviralvectorAd5sGTcontainingpigα(1,3)GTcDNAwasconstructedandcharacterized.Adenoviralvector-mediatedtransferofpigα(1,3)GTgeneintohumantumorcellssuchasmalignantmelanomaA375,stomachcancerSGC-7901,andlungcancerSPC-A-1wasreportedforthefirsttime.ResultsshowedthatGalepitopedidnotincreasethesensitivityofhumantumorcellstohumancomplement-mediatedlysis,althoughhumancomplementactivationandthebindingofhumanIgGandIgMnaturalantibodiestohumantumorcellswereenhancedsignificantlyafterAd5sGTtransduction.AppearanceofgalepitopeonthehumantumorcellschangedtheexpressionofcellsurfacecarbohydratesreactingwithUlexeuropaeusI(UEAI)lectins,Viciavillosaagglutinin(VVA),Arachishypogaeaagglutinin(PNA),andGlycinemaxagglutinin(SBA)todifferentdegrees.Inaddition,noeffectofgalepitopeonthegrowthinvitroofhumantumorcellswasobservedinMTTassay.
简介:目的研究调控细胞程序性坏死(necroptosis)的关键分子———受体相互作用蛋白激酶3(receptorinteractingprotein3,RIP3)在甲型流感病毒H1N1PR8感染中的作用。方法用5.25×10^3半数组织细胞感染剂量(50%tissuecultureinfectivedose,TCID50)的流感病毒H1N1PR8通过滴鼻方式感染RIP3敲除(RIP3-/-)小鼠和野生型(WT)C57BL/6小鼠,连续14d每天称量小鼠体重,观察小鼠生存状态,并记录死亡情况。分别在感染后第3天(daypostinfection,d.p.i)和第7天处死解剖小鼠。取整个肺称重,左叶肺用4%多聚甲醛固定后进行HE染色,检测感染后肺组织的病理变化;通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测肺组织病毒载量;流式微珠阵列术(CBA)检测肺匀浆上清中部分炎症相关细胞因子。结果5.25×10^3TCID50流感病毒感染后,各组小鼠均出现一定程度临床症状:RIP3-/-组小鼠感染后死亡率(50%)较WT组小鼠(87.5%)显著降低(P<0.05)。分别对比每天两组小鼠体重,发现从第3天开始,WT组小鼠的体重降低比率大于RIP3-/-组,但两组小鼠体重总体改变趋势无统计学差异。病毒学方面,两组小鼠在相同时间点(3、7d.p.i)病毒载量差异均无显著性。炎症应答方面:两组小鼠肺指数(肺重与体重比值)差异无显著性。病理方面:肉眼观察大体病理及HE病理切片显示:RIP3-/-组小鼠肺组织损伤较轻,炎症浸润较少;小鼠肺部炎症细胞因子也较WT组相对减少。结论RIP3敲除的条件下,流感病毒H1N1PR8感染小鼠时因减弱了炎症应答导致肺部病理损伤减轻,提示RIP3可能在H1N1PR8流感病毒感染中发挥促炎症病理作用。
简介:报道1例慢性皮肤黏膜念珠菌病。患者女,16岁。1岁开始发病,持续存在口腔、皮肤、甲板损害,真菌镜检阳性,真菌培养为白念珠菌,皮损组织病理为感染肉芽肿改变,在角质层中可见大量真菌菌丝,内分泌功能和免疫学检查未见明显异常。口服伊曲康唑治疗有效。
简介:SomerecentstudiesindicatedthatGABAergicsystemisinvolvedinmammalianspermacrosomereaction(AR),butdirestevidencepertainingtotheexpressionofgatlinmammalianspermisnotyetdemonstrated.Inthisstudy,weevaluatedthepresenceof67kDaGAT1proteinandmRNAinrattestisbyWesternblottingandreversetranscription-polymerasechainreaction.Meanwhile,immunohistochemicalandimmunofluorescentanalysesalsoidentifiedGAT1proteinontheelongatedspermatidandsperm.Theseresultsindicatedthatrattestisisanovelsiteofgatlexpression.FurtherstudiesshouldbetakentoexploretheroleofGAT1proteinonspermacrosomereaction.
简介:以便学习TGF-beta1的结构功能细节,重组体老鼠TGF-beta1的成熟形式在细菌被表示。TGF-beta1(氨基酸279-390)的112氨基酸的carboxyl终端部分的合成被一个可诱导的基因表示系统基于抗菌素T7RNA控制。这个系统允许重组体TGF-beta1的活跃、选择的合成。在减少条件下面在SDS-polyacrylamide胶化上决定的表示TGF-alpha1单体的分子量是大约13kD。连续净化洗与纯化步是足够的净化表示产品到同质的单个胶化过滤结合了。氨基终端的定序表明重组体蛋白质的N终端与出版数据相同。在西方的污点分析,重组体多肽对polyclonalTGF-beta1抗体显示出优秀antigenicity。在这研究表示的成熟重组体老鼠TGF-beta1提供一个有用工具因为未来详细说明了结构、功能的研究。
简介:昆虫是在勘探让新奇的可加水分解纤维素的酶从lignocellulosic生物资源改进乙醇燃料的生产的一个大部分未开发的资源。lignocellulosic乙醇生产的费用被期望在一个单个过程由纤维素降级(saccharification)和产生葡萄糖的发酵的联合减少到乙醇,由Saccharomycescerevisiae转变了表示有效绗维素酶的酵母催化。当时S。cerevisiae是一个确定的heterologous表达式系统,昆虫的功能的表达式上没有可得到的数据为这种的可加水分解纤维素的酶。为了探讨这知识,豁开,S。cerevisiae被转变表示从红面粉甲壳虫编码endoglucanase的全身的cDNA,Triboliumcastaneum(TcEG1),并且评估了转基因的产品(rTcEG1)的活动。在S的TcEG1cDNA的表示。cerevisiae在强壮的glyceraldehyde-3磷酸盐脱氢酶倡导者控制下。有教养的转变酵母作为功能的β-1,4-endoglucanase分泌了rTcEG1蛋白质,它允许transformants在作为唯一的可得到的碳来源包含纤维素的选择媒介上幸存。为分泌rTcEG1的底层特性的评估表明了endoglucanase活动,尽管某活动也对复杂纤维素底层被检测。与在生产rTcEG1活动与pH条件增加了的biofuel的使用潜在地相关,与在pH检测的最高的活动12。我们的结果在S为昆虫绗维素酶的功能的生产表明潜力。cerevisiae并且在强壮的碱的环境证实rTcEG1活动的稳定性。