简介:目的分析巨噬细胞不同极化状态下14-3-3ηmRNA表达及其生物信息,并构建14-3-3η蛋白原核表达载体,为研究其在巨噬细胞活化中的作用提供实验基础。方法提取C57BL/6小鼠骨髓原代巨噬细胞mRNA,反转录后用实时定量聚合酶链式反应(PCR)检测14-3-3ηmRNA水平的改变。运用ProtParamtool、SOPMA等在线软件对14-3-3η氨基酸序列进行分析。以小鼠巨噬细胞cDNA为模板,采用PCR的方法扩增14-3-3η基因,插入pGEX-4T-3载体中,双酶切和测序鉴定正确的重组质粒转化入大肠杆菌BL21菌株,用异丙基硫代半乳糖苷诱导其原核表达并纯化,SDS-PAGE法和Westernblotting法对融合蛋白进行鉴定。采用Graphpadprism5软件进行统计分析。样本比较均采用配对t检验。结果M1型巨噬细胞14-3-3η表达降低,M2型趋势相反。生物信息学表明14-3-3η蛋白其二级结构中主要为α-螺旋(占62.60%)且疏水性较差(疏水系数为-0.607)。酶切和测序结果提示重组质粒pGEX-4T-3-14-3-3η构建成功。SDS-PAGE和Westernblotting结果表明融合蛋白谷胱甘肽-S-转移酶(GST)-14-3-3η成功表达和纯化。结论本实验对14-3-3η进行了初步的生物信息学分析,成功表达并纯化融合蛋白GST-14-3-3η,为14-3-3η在巨噬细胞极化上的功能研究奠定了实验基础。
简介:<正>控制结核病规划中的一个实质性部分即成功的监测。象中国这样一个大国,人口超过1l亿,80%人口居住在农村,任务是十分艰巨的。中国防痨协会声望很高,10年内进行了两次大规模的全国性结核病调查(本刊注:中国全国结核病流调系在卫生部领导下进行)。1979年对全国29个省、市进行了随机抽样调查,888个点,受检人口140万人。其中对所有成年人群进行X线筛选(MMR),对可疑肺结核病例常规痰涂片两次检查抗酸杆菌。多数病例系x线发现,患病率为717/10~5,涂阳患病率为187/10~5。不同地区患病率差异很大。如菌阳患病率最低为上海,最高为福建,分别为60/10~5和318/10~5。某些地区对15岁以下未接种过BCG儿童采用不做结素试验直接接种BCG。15万儿童接