简介:目的:构建EF-1α-Flag到pcDNA3.0表达载体上,在哺乳动物细胞中表达并纯化延伸因子1α(EF-1α),测定其对体外蛋白翻译的影响。方法:通过PCR技术从293T细胞cDNA文库中扩增EF-1α基因片段,连接到pcDNA3.0载体上,经电泳、测序和转入细胞中检测EF-1α-Flag蛋白表达等方式验证所构建的重组质粒是否正确,然后经Flag肽置换法纯化出EF-1α蛋白用于体外蛋白翻译实验,萤光素酶活性检测翻译出的蛋白含量。结果:测序和蛋白表达鉴定结果表明扩增的EF-1α-Flag基因序列正确,所构建的重组载体在哺乳动物细胞中能获得表达;考马斯亮蓝染色发现经Flag肽置换的EF-1α蛋白纯度较高,在体外蛋白翻译实验中EF-1α蛋白能促进蛋白的翻译。结论:从哺乳动物细胞中纯化的EF-1α蛋白能促进蛋白翻译,可能与其作为翻译延伸因子相关,为进一步研究EF-1α的功能奠定了基础。
简介:辛弃疾是以英雄的身份登上词坛的。他身处亡国之乱世,目睹故土沦陷之悲凉,他日夜忧患苍生、痛惜思民,虽胸怀爱国之心和匡复之志、身兼沙场之略和经纶之才,却因当权者的昏庸而得不到重用。故时常悲愤交加、饮恨报国无门,英雄只能放歌词坛,唱出自己的悲壮之声和爱国情怀,于是在他的词中处处洋溢着慷慨激昂、悲痛沉郁的英雄情怀,这与他早年执戈横槊的戎马生涯及当时的历史背景是紧密相关的。刘辰翁《辛稼轩词序》就早已指出,他的词是'英雄感怆'。他是唐宋词史上罕有匹敌的,文韬武略兼备的英雄词人。他在国难当前的灾难年代,以一种'舍我其谁'的使命意识和英雄豪气自动地把雪耻救国当作自己的职责,表现出无味的忘我精神和坚强勇敢的可贵品质。他的词中所创造的抒情人物(自我)形象,是唐宋词史上唯一的一位性格丰满、情怀复杂的英雄——悲剧英雄。辛弃疾的英雄情怀体现为对崇尚的理想执着,强烈的使命感和坚定的进取精神,以及民族社会与个体人生的忧患意识。