简介:摘要目的探讨外泌体在草酸钙晶体所致肾损伤及肾间质纤维化中的作用。方法C57小鼠30只(6~8周龄,体重24~26 g),其中24只野生型(WT)小鼠,6只纯合子Rab27a-/-(KO)小鼠。WT小鼠随机分为空白对照(NC)组、造模1周组、造模2周组、造模4周组(WT造模组),Rab27a-/-小鼠为KO造模组,每组6只,1.25%乙二醇灌胃,分别持续给药0、1、2、4及4周,构建肾结石小鼠动物模型。苏木精-伊红(HE)染色评估肾小管损伤,Von-kossa染色评估结石晶体形成,Masson染色评估肾间质胶原纤维沉积,免疫组织化学染色检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(Fibronectin)及外泌体标志物白细胞分化抗原63(CD63)表达,两组间比较采用t检验。结果HE染色显示,在野生型小鼠中,造模1周、造模2周及造模4周肾小管损伤逐渐加重(0.57±0.18比1.30±0.19,t=6.248,P<0.05;1.30±0.19比2.30±0.28,t=6.642,P<0.05),Von-kossa染色显示,肾脏晶体形成逐渐增加(1.42±0.61比5.24±0.55,t=10.410,P<0.05;5.24±0.55比10.01±0.94,t=9.946,P<0.05),差异均有统计学意义。免疫组织化学染色显示,造模1周、造模2周及造模4周CD63阳性表达面积逐渐增加(1.33±0.34比4.92±0.71,t=10.250,P<0.05;4.92±0.71比8.55±1.04,t=6.448,P<0.05)差异有统计学意义。WT造模组Masson染色胶原纤维沉积面积高于NC组(8.57±0.84比0.60±0.34,t=19.660,P<0.05),α-SMA阳性表达面积高于NC组(11.30±1.04比1.63±0.55,t=18.430,P<0.05),Fibronectin阳性表达面积高于NC组(12.85±0.68比2.78±0.55,t=25.810,P<0.05),差异均有统计学意义。WT造模组Masson染色胶原纤维沉积面积高于KO造模组(8.57±0.84比5.53±0.74,t=6.082,P<0.05),α-SMA阳性表达面积高于KO造模组(11.30±1.04比6.63±0.91,t=7.553,P<0.05),Fibronectin阳性表达面积高于KO造模组(12.85±0.68比8.80±0.93,t=7.875,P<0.05),差异均有统计学意义。结论肾结石形成过程中,肾小管损伤加重,外泌体分泌增加。同时,抑制外泌体分泌能减轻草酸钙晶体诱导的肾脏纤维化。
简介:摘要目的探讨微小RNA-325(miRNA-325)在肾小管上皮细胞缺氧复氧(H/R)损伤模型中的作用及其机制。方法选取人肾小管上皮细胞HK-2,建立适当的肾小管上皮细胞H/R模型(缺氧24 h复氧2 h)。将HK-2细胞分为对照组、H/R组、H/R+抑制剂(inhibitor)组和H/R+抑制剂阴性对照(inNC),转染miRNA-325 inhibitor和inNC后进行缺氧复氧处理,然后进行后续实验。用流式细胞术检测各组细胞凋亡率。利用蛋白质印迹法(Western blot)检测HK2细胞在H/R后活化半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)和X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)等的表达水平。利用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测HK2细胞中miRNA-325、Caspase-3和XIAP mRNA表达水平。使用双荧光素酶报告基因实验检测miRNA-325与XIAP 3’端非编码区(3’UTR)之间的关系。组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果H/R组细胞凋亡率高于对照组[(12.11±1.65)%比(3.88±0.24)%,t=8.311,P<0.05];H/R+Inhibitor组细胞凋亡率低于H/R组[(7.60±3.07)%比(12.11±1.65)%,t=4.557,P<0.05]。Western blot结果显示,实验组Cleaved Caspase-3[(0.50±0.02)、(0.63±0.01)、(0.61±0.02)比(0.41±0.01),F=212.095,P<0.05]和bax[(0.53±0.02)、(0.63±0.01)、(0.64±0.04)比(0.41±0.02),F=105.138,P<0.05]蛋白表达量显著高于对照组,bcl-2[(0.57±0.02)、(0.52±0.02)、(0.49±0.01)比(0.62±0.02),F=89.498,P<0.05]和XIAP[(0.29±0.01)、(0.24±0.03)、(0.24±0.01)比(0.33±0.03),F=27.575,P<0.05]表达量显著低于对照组;H/R+Inhibitor组Cleaved Caspase-3[(0.50±0.02)比(0.61±0.02),t=11.437,P<0.05]和bax[(0.53±0.02)比(0.64±0.04),t=7.253,P<0.05]的表达低于H/R组,bcl-2[(0.57±0.02)比(0.49±0.01),t=9.471,P<0.05]和XIAP[(0.29±0.01)比(0.24±0.01),t=4.231,P<0.05]的表达量高于H/R组,差异均有统计学意义。qRT-PCR结果显示,实验组miRNA-325[(7.27±0.30)、(4.66±0.21)、(7.11±0.25)比(1.05±0.13),F=1453.045,P<0.05]和Caspase-3 mRNA[(1.52±0.05)、(1.26±0.06)、(1.53±0.05)比(1.00±0.01),F=241.375,P<0.05]表达水平显著高于对照组,而XIAP mRNA[(0.38±0.01)、(0.76±0.02)、(0.39±0.02)比(1.01±0.02),F=2569.583,P<0.05]表达低于对照组;H/R+Inhibitor组miRNA-325[(4.66±0.21)比(7.27±0.30),t=24.236,P<0.05]和Caspase-3 mRNA[(1.26±0.06)比(1.52±0.05),t=11.451,P<0.05]低于H/R组,而XIAP mRNA[(0.76±0.02)比(0.38±0.01),t=45.678,P<0.05]高于H/R组,差异均有统计学意义。荧光素酶活性检测表明共转染miRNA-325的野生型组酶活性低于对照组[(0.69±0.03)比(1.01±0.02),t=22.809,P<0.05],而突变型组酶活性无明显变化[(1.04±0.11)比(0.99±0.06),t=0.983,P>0.05]。结论XIAP是miRNA-325的靶基因之一,抑制miRNA-325可以下调凋亡蛋白的表达,降低细胞凋亡率,从而保护肾小管上皮细胞。
简介:【摘要】目的 探讨分析在尿常规检验中应用尿液干化学检验法联合尿沉渣检验法的效果。方法 选取2020年3月到2022年期间于我院接受尿常规检验的300例患者进行此次研究,采集患者60毫升尿液,平均分为两份,其中1份采用常规尿液干化学检验法进行检验,另一份则联合尿沉渣检验,观察对两组样本的检验结果。结果 比较两种检验方法的红细胞阳性检出率,联合检验高于尿液干化学检验(P<0.05);比较两种检验方法的白细胞阳性检出率,联合检验高于尿液干化学检验(P<0.05)。结论 在尿常规检验中应用尿液干化学检验法联合尿沉渣检验法有着极为确切的效果,能够有效提高对白细胞与红细胞的阳性检出率。
简介:摘要目的探讨新型长链非编码RNA(lncRNA) XLOC_032768在顺铂诱导急性肾损伤小鼠中的作用及其机制。方法30 mg/kg顺铂腹腔注射小鼠(鼠龄范围为6~8周,体重20~25 g,购自江苏卡文斯实验动物中心)建立急性肾损伤模型,通过小鼠肾脏全转录组测序和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)筛选出新型lncRNA进行实验研究。将24只雄性C57小鼠随机分为4组:对照+lncRNA对照组、顺铂+lncRNA对照组、对照+lncRNA治疗组、顺铂+lncRNA治疗组。血清检测肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)含量;苏木精-伊红(HE)染色观察肾脏组织病理学变化评估肾小管损伤;RT-PCR检测肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6表达。组间两样本均数的比较采用t检验及单因素方差分析。结果全转录组测序结果显示新型lncRNA-XLOC_032768在顺铂诱导的急性肾损伤小鼠肾脏中表达显著降低,RT-PCR结果亦显示顺铂组lncRNA XLOC_032768表达量较对照组显著降低(0.99±0.01比0.41±0.05,t=11.850,P<0.05),差异有统计学意义。与对照+lncRNA对照组比较,顺铂+lncRNA对照组肌酐(26.67±2.12比93.83±3.50,t=20.670,P<0.05)、尿素氮显著升高(20.83±1.70比52.17±2.36,t=10.780,P<0.05),加重肾小管损伤(0.17±0.17比2.50±0.22,t=8.370,P<0.05)及TNF-α表达增高(0.95±0.22比3.35±0.15,t=16.060,P<0.05)、IL-1β(0.98±0.01比2.68±1.23,t=13.340,P<0.05)、IL-6(0.98±0.01比3.53±0.17,t=15.300,P<0.05),差异有统计学意义。与顺铂+lncRNA对照组比较,顺铂+lncRNA-XLOC_032768治疗组显著降低肌酐(65.83±2.39,t=6.610,P<0.05)及尿素氮表达(33.00±1.83,t=6.420,P<0.05),改善肾小管损伤(1.33±0.21,t=3.790,P<0.05)及降低TNF-α(1.83±0.17,t=6.330,P<0.05)、IL-1β(2.03±0.13,t=3.560,P<0.05)、IL-6表达(2.55±0.18,t=4.050,P<0.05),差异有统计学意义。结论lncRNA-XLOC_032768通过减少炎性反应保护顺铂诱导的急性肾损伤。
简介:摘要目的探讨左心室Tei指数评估动脉导管未闭(PDA)介入治疗术后血流动力学变化的价值。方法选取2017年5月至2019年5月安徽省儿童医院行介入治疗的PDA患儿50例(PDA组)和健康体检儿童27例(健康对照组)。比较两组左心室Tei指数、血浆B型利钠肽(BNP)、左心室舒张末内径(LVDD)、左心室射血分数(LVEF)等。结果两组左心室Tei指数均与心率和年龄无相关(P>0.05)。PDA组术前左心室Tei指数明显低于健康对照组[0.20(0.16,0.25)比0.27(0.20,0.30)],差异有统计学意义(P<0.05)。PDA组术后即刻、3 d、1个月和3个月左心室Tei指数明显高于术前[0.38(0.29,0.47)、0.32(0.26,0.40)、0.30(0.27,0.35)和0.32(0.26,0.37)比0.20(0.16,0.25)],差异有统计学意义(P<0.05);术后即刻血浆BNP明显低于术前[288(126,433)ng/L比582(303,1 675) ng/L],差异有统计学意义(P<0.05);术后3个月LVDD明显低于术前[(3.03 ± 0.54) cm比(3.38 ± 0.51) cm],差异有统计学意义(P<0.05);术后即刻LVEF明显低于术前[(54.24 ± 6.09)%比(59.45 ± 5.93)%],术后1、3个月明显高于术后即刻[(63.18 ± 4.71)%和(65.46 ± 4.78)%比(54.24 ± 6.09)%],差异有统计学意义(P<0.05)。术前左心室Tei指数与PDA肺动脉端内径和术前血浆BNP呈负相关(r = - 0.362和- 0.388,P = 0.013和0.009),与术前LVDD和LVEF无相关性(r = - 0.192和- 0.283,P = 0.229和0.053)。术前与术后即刻左心室Tei指数差值与PDA肺动脉端内径呈正相关(r = 0.325,P = 0.030),与术前BNP、LVDD和LVEF无相关性(r = 0.234、0.283和- 0.039,P = 0.126、0.076和0.798)。结论左心室Tei指数能快速准确地反映PDA介入治疗前后血流动力学的变化。
简介:摘要目的探讨左心室Tei指数评估动脉导管未闭(PDA)介入治疗术后血流动力学变化的价值。方法选取2017年5月至2019年5月安徽省儿童医院行介入治疗的PDA患儿50例(PDA组)和健康体检儿童27例(健康对照组)。比较两组左心室Tei指数、血浆B型利钠肽(BNP)、左心室舒张末内径(LVDD)、左心室射血分数(LVEF)等。结果两组左心室Tei指数均与心率和年龄无相关(P>0.05)。PDA组术前左心室Tei指数明显低于健康对照组[0.20(0.16,0.25)比0.27(0.20,0.30)],差异有统计学意义(P<0.05)。PDA组术后即刻、3 d、1个月和3个月左心室Tei指数明显高于术前[0.38(0.29,0.47)、0.32(0.26,0.40)、0.30(0.27,0.35)和0.32(0.26,0.37)比0.20(0.16,0.25)],差异有统计学意义(P<0.05);术后即刻血浆BNP明显低于术前[288(126,433)ng/L比582(303,1 675) ng/L],差异有统计学意义(P<0.05);术后3个月LVDD明显低于术前[(3.03 ± 0.54) cm比(3.38 ± 0.51) cm],差异有统计学意义(P<0.05);术后即刻LVEF明显低于术前[(54.24 ± 6.09)%比(59.45 ± 5.93)%],术后1、3个月明显高于术后即刻[(63.18 ± 4.71)%和(65.46 ± 4.78)%比(54.24 ± 6.09)%],差异有统计学意义(P<0.05)。术前左心室Tei指数与PDA肺动脉端内径和术前血浆BNP呈负相关(r = - 0.362和- 0.388,P = 0.013和0.009),与术前LVDD和LVEF无相关性(r = - 0.192和- 0.283,P = 0.229和0.053)。术前与术后即刻左心室Tei指数差值与PDA肺动脉端内径呈正相关(r = 0.325,P = 0.030),与术前BNP、LVDD和LVEF无相关性(r = 0.234、0.283和- 0.039,P = 0.126、0.076和0.798)。结论左心室Tei指数能快速准确地反映PDA介入治疗前后血流动力学的变化。
简介:【摘要】目的 分析电化学发光免疫分析技术(ECLIA)定量检测乙型肝炎病毒表面抗体(抗-HBs)的临床价值。方法 选取本院2020年04月-2021年04月间100例乙型肝炎病毒确诊患者作为观察对象,分为参照组(使用ELISA检测法)和研究组(使用ECLIA检测法),并病理检查结果为依据,比较应用效果。结果 研究组抗-HBs阳性检出率高于参照组(P<0.05),研究组检查准确率接近于病理检查,差异无统计学意义(P<0.05)。结论 ECLIA在检测抗-HBs中应用价值更高,其检出准确率近似于病理检查,在早期乙肝筛查及后续治疗中应用效果更加突出,具有推广价值。
简介:摘要目的探讨时钟基因芳烃受体核转位因子样蛋白1(Bmal1)调控沉默信息调节因子1(SIRT1)通过转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad蛋白2(Smad2)通路在人肾小管上皮细胞(HK-2)缺氧/复氧后纤维化中的作用。方法将HK-2细胞随机分组:正常对照组(A组)、缺氧/复氧组(B组);siCTRL组(C组)、siBmal1组(D组)、HR +siCTRL组(E组)、HR+ siBmal1组(F组); HR + siCTRL +二甲基亚砜(DMSO)组(G组)、HR+ siCTRL+白藜芦醇(Resveratrol)组(H组)、HR+ siBmal1 +DMSO组(I组)、HR+ siBmal1 + Resveratrol组(J组),用小干扰RNA(siRNA)敲低Bmal1,各组给予相应干预措施,蛋白质印迹法(Western blot)分别检测细胞Bmal1、SIRT1、TGF-β1、Smad2、磷酸化Smad蛋白2(p-Smad2)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(COL1)、锌指转录因子1(snail1)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)蛋白的表达量。使用GraphPad Prism 8.0软件进行统计分析。结果B组Bmal1、SIRT1指标低于A组(0.310±0.039、0.248±0.037比0.668±0.161、0.416±0.049,t=3.046、3.873,P<0.05),而B组TGF-β1、p-Smad2指标高于A组(0.734±0.022、0.563±0.07比0.280±0.102、0.190±0.021,t=6.115、7.062,P<0.05);D、E组Bmal1、SIRT1指标低于C组(0.547±0.031、0.647±0.029比0.754±0.036,0.311±0.024、0.339±0.017比0.450±0.032,t=6.335、3.289、5.861、4.688,P<0.05),D、E组TGF-β1、p-Smad2指标高于C组(0.314±0.011、0.379±0.007比0.072±0.009,0.399±0.015、0.313±0.025比0.240±0.013,t=15.910、20.150、7.736、3.553,P<0.05);F组Bmal1、SIRT1指标低于D、E组(0.199±0.033比0.547±0.031、0.647±0.029,0.158±0.016比0.311±0.024、0.339±0.017,t=10.950、14.000、6.433、7.606,P<0.05),F组TGF-β1、p-Smad2指标高于D、E组(0.443±0.026比0.314±0.011、0.379±0.007,0.488±0.026比0.399±0.015、0.313±0.025,t=8.472、4.233、4.304、8.488,P<0.05);H组Bmal1、SIRT1指标高于G组(0.964±0.026、0.444±0.031比0.629±0.036、0.339±0.019,t=11.830、4.829,P<0.05),而H组TGF-β1、p-Smad2指标低于G组(0.235±0.022、0.213±0.016比0.386±0.027、0.297±0.011,t=7.583、4.867,P<0.05);I组Bmal1、SIRT1指标低于G组(0.484±0.018、0.183±0.015比0.629±0.036、0.339±0.019,t=5.115、7.189,P<0.05),I组TGF-β1、p-Smad2指标高于G组(0.497±0.015、0.637±0.025比0.386±0.027、0.297±0.011,t=5.613、19.620,P<0.05);J组Bmal1、SIRT1指标低于H组(0.579±0.030、0.278±0.019比0.964±0.026、0.444±0.031,t=13.600、7.660,P<0.05),J组TGF-β1、p-Smad2指标高于H组(0.323±0.012、0.463±0.015比0.235±0.022、0.213±0.016,t=4.430、14.430,P<0.05);J组Bmal1、SIRT1指标高于I组(0.579±0.030、0.278±0.019比0.484±0.018、0.183±0.015,t=3.351、4.358,P<0.05),J组TGF-β1、p-Smad2指标低于I组(0.323±0.012、0.463±0.015比0.497±0.015、0.637±0.025,t=8.767、10.050,P<0.05)。结论时钟基因Bmal1通过调控SIRT1抑制TGF-β1/Smad2信号通路进而减轻HK-2细胞缺氧/复氧后纤维化。