简介：目的：构建4E—BPl及其T37A、T46A、$65A、T70A突变体4E—BPl-4A基因表达的重组慢病毒载体，研究其对胃癌HGC27细胞生长的影响。方法：PCR扩增4E—BPl基因及其突变体aE—BPl-4A基因并克隆到pCDH载体，构建成pCDH-4E—BPl、pCDit一4E—BPl—4A，将其-9包装载体共转染293T细胞，包装成Lenti-4E—BPl及Lenti-4E—BPl—4A重组慢病毒载体，将此慢病毒感染胃癌HGC27细胞，Western印迹鉴定病毒载体介导的4E—BPl、4E～BPl—4A蛋白的表达，MTT、克隆形成和软琼脂方法研究过量表达4E—BPl、4E—BPl—4A对胃癌HGC27细胞生长的影响。结果：包装成Lenti-4E—BPl及Lenti-4E—BPl—4A重组慢病毒载体，并将此慢病毒载体感染胃癌HGC27细胞；MTT、克隆形成、软琼脂实验表明过量表达4E—BP!可抑制胃癌HGC27细胞的生长，过量表达4E—BP!一4A时抑制效果更明显。结论：构建了4E—BPl、4E—BPI-4A的重组慢病毒表达载体，在胃癌HGC27细胞中过量表达4E—BPl可抑制细胞生长，过量表达4E—BPl-4A的抑制效果更明显。

简介：目的：在类风湿性关节炎（RA）成纤维样滑膜（FLS）细胞中筛选并鉴定盘状结构域受体2（DDR2）的相互作用蛋白,并研究其对FLS细胞侵袭能力的影响。方法：首先利用免疫沉淀结合SDS-PAGE分离鉴定DDR2互作蛋白波形蛋白,进而采用免疫沉淀和激光共聚焦实验,进一步验证波形蛋白是DDR2的相互作用蛋白,最后采用Transwell实验考察波形蛋白对RAFLS细胞侵袭能力的影响。结果：Ⅱ型胶原刺激引起RAFLS细胞中DDR2的磷酸化水平升高,DDR2被活化,活化前后共有8个DDR2相互作用蛋白发生变化,经质谱分析,其中变化最大的是波形蛋白和膜联蛋白A2;在HEK293T细胞中,免疫共沉淀结果显示FcDDR2与波形蛋白存在相互作用;激光共聚焦结果显示在RAFLS细胞中,DDR2和波形蛋白存在共定位;下调RAFLS细胞中波形蛋白的表达后,细胞的侵袭能力较对照组显著下降。结论：波形蛋白是DDR2的相互作用蛋白,Ⅱ型胶原可引起RAFLS细胞的DDR2磷酸化水平升高,并通过波形蛋白促进RAFLS细胞的侵袭。