简介:启动子是调控外源基因在植物体内表达的“开关”。随着植物转基因技术的广泛应用,无论是基础研究还是应用研究,人们希望能够充分利用启动子来准确控制外源基因在植物体内的表达,使目的基因的“开”和“关”、表达的“多”和“少”、在“何地”和“何时”表达等。能够听从人的指挥,以实现植物育种的分子设计。因此,快速分离和鉴定植物体内各种特异启动子已经成为植物基因工程研究的热点和难点。本文在互补末端连接反向PCR(CELI—PCR)技术基础上建立起…种快速分离目的基因全长cDNA和启动子序列的新方法。该方法利用CELI—PCR进行染色体连续步移,获取足够长的目的基因及其上游基因组DNA序列,再根据转录起始位点是目的基因转录本和启动子的分界点,其下游转录本中的外显于可通过RT-PCR扩增,而上游启动子序列则不能被RT-PCR扩增这一特点,借助RT-PCR进行cDNA连续步移,直到获得全长cDNA,确定启动子基因5’非翻译区的位置,进而精确定位转录起始位点。从而获取目的基因准确的启动子序列和全长cDNA序列。因此,建立在CELI,PCR基础上的RITIS技术,可绕过繁琐的构建cDNA库和5'-RACE等方法快速分离目的基因全长cDNA和启动子序列。
简介:在政府的林业工程中应用社区林业的参与式方法是一种全新的林业规划设计方法,其目的是合理进行土地利用规划,依据工程建设的要求和农户的需求确定适宜的造林地、造林树种、参与农户及经营管理形式等.目前,参与式方法正在一些地方的'退耕还林还草工程'中试用.文章论述了社区林业机制和参与式方法在政府林业工程中应用的重要性和必要性.作者认为,如果农民真正参与了工程的规划设计,可以充分调动农民的积极性,促进农民从被动的'要我退'变为主动的'我要退'.通过在渠县的调研,文章讨论了参与式方法在退耕还林还草工程的规划设计中应用的可能性,并提出了操作方法的建议.