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  • 简介:目的:SARA/SBD是纤维化形成过程中负性调节因子。原核表达、纯化含反式激活蛋白(TAT)蛋白转导域(PTD)TATPTD-SARA/SBD融合蛋白,并鉴定其生物学活性。方法:将TATPTD-SARA/SBD基因克隆入带His标签原核表达载体pET-44a(+)中,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,表达产物经Ni2+-NTA亲和层析柱纯化后,SDS-PAGE和Western印迹鉴定目的蛋白;用人腹膜间皮细胞系(HPMC),通过免疫细胞化学方法检测其穿膜能力,及与TGF-β1信号通路中Smad2因子共定位情况。结果:用基因工程方法表达和纯化了TATPTD-SARA/SBD融合蛋白,目的蛋白约占菌体总蛋白20%左右,且以可溶形式表达,经Ni2+-NTA纯化后,所获蛋白纯度高于95%(HPLC归一法);功能学实验结果显示该蛋白能穿过胞膜,主要定位于胞核,且与Smad2因子具有核内共定位。结论:表达了TATPTD-SARA/SBD融合蛋白,该蛋白具有生物学活性。

  • 标签: 蛋白转导域 SARA/SBD融合蛋白 原核表达 纯化 生物学活性
  • 简介:目的探讨半夏总生物碱(totalalkaloidsfromPinelliaTernate,TAPT)对帕金森病模型大鼠防治作用及其抗氧化机制。方法采用脑内定位注射6-羟基多巴胺(6-OHDA)建立帕金森病大鼠模型,在模型建立成功同时给予半夏总生物碱预防性治疗。采用Morris水迷宫进行帕金森病大鼠行为学检测,用化学比色法检测大脑皮质及血清超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)、过氧化氢(H2O2)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量。结果与正常组比较,帕金森病模型组大鼠逃避潜伏期明显延长(P〈0.01),跨越平台次数明显减少(P〈0.01);经半夏总生物碱治疗组,大鼠逃避潜伏期明显缩短(P〈0.05,P〈0.01),跨越平台次数明显增加(P〈0.01)。帕金森病模型组大鼠脑皮质及血清中MDA、H2O2含量增加,SOD活性及GSH含量降低(P〈0.01);经半夏总生物碱治疗组,脑皮质MDA、H2O2含量显著减少(P〈0.01),皮质GSH、SOD含量显著增加(P〈0.01);半夏总生物碱给药组中低浓度组、中浓度组血清MDA含量无统计学意义(P〉0.05),高浓度组血清MDA含量下降(P〈0.01),各治疗组中血清H2O2含量明显下降(P〈0.01),血清GSH含量显著增加(P〈0.01)。结论半夏总生物碱具有改善学习记忆能力,对抗大鼠神经系统退行性变有一定作用,可能通过改变帕金森病模型大鼠皮质部分及血清SOD、GSH含量,而抑制了MDA和H2O2产生。

  • 标签: 半夏总生物碱 6-羟基多巴胺 MORRIS水迷宫 大鼠 还原型谷胱甘肽
  • 简介:目的:对2006年广州流行登革热病原进行分离鉴定及生物学性质研究。方法:采用传代蚊细胞微量培养方法对2006年广州登革热病原进行分离,并通过脑内途径观察其对乳鼠致病性;经间接免疫荧光和RT-PCR技术,对患者血清标本中病毒特异抗体及新分离病原体进行检测和鉴定;将此次分离病原体与1980年分离同型毒株进行生物学性质比较。结果:从57份患者血清标本中分离出10株病毒,在传代蚊细胞中可产生稳定细胞病变并对乳鼠致病;其基因组为登革1型病毒特异RNA分子,经鉴定为登革1型病毒;此次分离登革1型病毒与1980年分离同型毒株在致细胞产生病变时间和严重程度,蚀斑大小、形态以及致乳鼠发病时间等生物学性质上有所不同。结论:2006年广州流行登革热病原为登革1型病毒,且与1980年分离同型毒株在生物学性质方面存在明显差异。

  • 标签: 登革1型病毒 病毒株 病毒分离 生物学性质
  • 简介:利用TP-M13-SSR分子标记方法,构建27份中国原产苹果属植物在12个SSR位点指纹图谱,并运用条码技术生成其分子身份证。12对引物共获得251个等位基因,平均21个。引物多态性好,仅用引物CH05b06即可区分全部供试材料。27份苹果材料在12个SSR位点遗传多样性、多态性信息含量和位点杂合度变化范围分别为0.6620~0.9455、0.6327~0.9211和0.6538~0.9319。基于CH05b06位点处获得指纹谱图即可得到每份供试材料独有的分子身份证。TP-M13-SSR分子标记技术适用于苹果属植物种质资源指纹图谱构建,利于分子基础数据库积累。基于苹果种质资源TP-M13-SSR指纹图谱可获得每份苹果种质资源独有的分子身份证。

  • 标签: 中国原产 苹果属 TP-M13-SSR 分子身份证
  • 简介:[背景]红火蚁入侵后对新发生地区生物多样性影响及与土著物种关系是入侵生物学研究重点之一,解释红火蚁与类似生态位土著蚂蚁关系对全面了解该蚁入侵生态学效应具有重要意义。[方法]通过野外模拟设置蚁巢,观察、记录距离红火蚁和黑头酸臭蚁蚁巢30(3Ill处诱集到黑头酸臭蚁工蚁在红火蚁人侵前、入侵中及移除后数量变化,研究短期入侵红火蚁实验种群与荒草地和荔枝园黑头酸臭蚁间干扰竞争。[结果]红火蚁实验种群短期入侵对荒草地生境黑头酸臭蚁干扰较明显,而对荔枝园生境黑头酸臭蚁干扰较小;红火蚁未入侵荒草地生境黑头酸臭蚁受干扰最明显,移除红火蚁20rain后,处理诱饵上召集黑头酸臭蚁数量才与入侵前差异不显著;红火蚁未入侵荔枝园生境黑头酸臭蚁受干扰最小,移除红火蚁仅5min后,处理诱饵上黑头酸臭蚁数量就恢复到入侵前,甚至超过入侵前数量。[结论与意义]红火蚁入侵对黑头酸臭蚁觅食行为存在较大干扰抑制作用,其影响程度与生境复杂性有着密切关系。研究结果可为了解红火蚁入侵生态学效应提供证据。

  • 标签: 红火蚁 黑头酸臭蚁 短期入侵 干扰竞争
  • 简介:目的:获得齐口裂腹鱼过氧化物酶体增殖物激活受体Y辅助活化因子1a(PGC-1a)cDNA序列,探讨其在齐口裂腹鱼肌肉组织中表达规律。方法:根据斑马鱼基因PGC-1a序列设计引物,提取齐口裂腹鱼肌肉组织总RNA,经RT-PCR扩增PGC-1a仪基因序列;利用半定量RT-PCR分析齐口裂腹鱼PGC-1a基因在红肌和白肌中mRNA表达特性。结果:获得齐口裂腹鱼PGC-1a基因序列2633bp,GenBank登陆号为JNl95738,其中ORF为2631bp,编码876个氨基酸残基,与同鲤科斑马鱼、草鱼和金鱼同源性较高,为88%~93%,但与哺乳动物和禽类如人、小鼠、大鼠、猪、牛和鸡同源性较低,为49%~50%。在基础状态下,PGC-1a在齐口裂腹鱼红肌中表达显著高于白肌,禁食可显著诱导PGC-1a在红肌和白肌中表达水平。结论-首次克隆得到齐口裂腹鱼PGC-1a基因序列,其在红肌中表达显著高于白肌中,禁食可显著诱导其在红肌和白肌中表达,为研究PGC-1a在齐口裂腹鱼肌肉中作用提供了理论依据。

  • 标签: 齐口裂腹鱼 过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助活化因子1α 基因克隆 红肌 白肌
  • 简介:目的:检测人胃癌细胞系中FHIT基因mRNA表达状况及构建pcDNA3.1-FHIT真核表达载体。方法:RT-PCR法检测三种不同类型人胃癌细胞系中FHIT基因mRNA表达,构建真核表达质粒pcDNA3.1-FHIT,通过酶切法、PCR扩增法和DNA序列分析鉴定重组质粒后,用脂质体转染至FHIT基因mRNA阴性表达人胃癌细胞系MKN-45,经G418筛选后RT-PCR鉴定。结果:FHIT基因在人胃癌细胞系BGC-823中呈阳性表达,在MGC-803、MKN-45细胞系中呈阴性表达。FHIT基因cDNA正确克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1中,并成功转染FHIT基因mRNA阴性表达人胃癌细胞系MKN-45。结论:FHIT基因在不同类型人胃癌细胞系中表达各异。成功构建pcDNA3.1-FHIT,并转染到FHIT基因mRNA阴性表达人胃癌细胞系MKN-45,使其FHIT基因阳性表达。

  • 标签: FHIT基因 胃癌 基因表达 构建 转染
  • 简介:目的初步研究巴尔通体在恒河猴体内存在情况,并分析其柠檬酸合成酶(gltA)基因序列,判断巴尔通体种属。方法16只来自福建恒河猴,用血琼脂培养基分离可能存在巴尔通体。根据NCBI数据库上巴尔通体gltA基因序列,设计一对引物,以巴尔通体菌落为模板进行扩增,将获得序列进行克隆测序。结果从3只恒河猴体内成功分离到了巴尔通体病原,并获得了巴尔通体gltA全长基因序列,测序结果表明该序列与五日热巴尔通体同源性99%。结论福建来源恒河猴种群携带巴尔通体病原,巴尔通体流行地区可能存在鼠与灵长类动物之间病原体流行和传播。

  • 标签: 五日热巴尔通体 柠檬酸合成酶 恒河猴 序列分析
  • 简介:对用固相扣除杂交方法从低温驯化沙冬青克隆得到AmLEA5基因进行表达模式分析和生物信息学分析,表明该基因编码一种第5族胚胎发育晚期丰富蛋白(LEA),全长693bp,含有1个297bp开放阅读框,编码98个氨基酸,预测Am-LEA5分子量为10.6kDa,是一种亲水性蛋白,有多个磷酸化位点。密码子偏好性分析表明该基因略偏好于用A或T结尾密码子。系统发生分析表明,AmLEA5蛋白与蒺藜苜蓿LEA(ACJ84182.1)亲缘关系最近。qRT-PCR结果显示AmLEA5表达量在低温、干旱、盐和热胁迫条件下均有上调,尤其在低温胁迫后期富集量最高。亚细胞定位表明,用YFP标记AmLEA5位于细胞质和细胞核内。一系列试验结果表明AmLEA5基因在沙冬青抵御非生物胁迫,尤其是在抵御低温胁迫机制中发挥重要作用。

  • 标签: 沙冬青 AmLEA5 生物信息学分析 表达模式 亚细胞定位
  • 简介:目的鉴于目前对斑马鱼视锥细胞视蛋白运输机制并不明确,且缺乏相应抗体,本实验拟构建一种可以在视锥细胞中特异表达荧光转基因斑马鱼.方法利用编码紫外敏感型视蛋白基因(sws1)启动子,构建了一种在紫外敏感型视锥细胞中特异表达红色荧光蛋白tdTomato转基因斑马鱼.同时,将tdTomato荧光蛋白与非洲爪蟾rhodopsin蛋白末端44个氨基酸相融合,将该融合蛋白定位于紫外敏感型视锥细胞外节段,进而可模拟内源性视蛋白定位.结果共筛选出三种不同品系转基因斑马鱼,经过免疫组化分析,确定其中一种转基因品系是正确目标品系.结论该转基因斑马鱼构建将会为进一步研究视锥细胞中视蛋白运输机制提供帮助.

  • 标签: 斑马鱼 视锥细胞 紫外敏感型 SWS1 转基因 sws1
  • 简介:目的:构建含Ubc9逆转录病毒表达载体,筛选建立携带该基因高滴度产毒细胞系,深入研究SUMO化修饰作用。方法:聚合酶链反应(PCR)扩增获取目的基因Ubc9,定向插入逆转录病毒表达载体pMSCVneo,形成重组质粒pMSCV-Ubc9;脂质体法将pMSCV-Ubc9转染逆转录病毒包装细胞PT67;G418筛选产毒细胞克隆,扩大培养产毒细胞克隆,收获病毒感染NIH3T3细胞。结果:限制性酶切和测序鉴定证实Ubc9正确插入逆转录病毒表达载体。G418筛选获得稳定产毒抗性细胞克隆,收获病毒能有效感染NIH3T3细胞。结论:携带Ubc9基因重组逆转录病毒表达载体pMSCV-Ubc9构建成功,转染PT67细胞后包装出重组逆转录病毒,进而筛选获得了能转录表达Ubc9产毒细胞系PT67-Ubc9。

  • 标签: Ubc9基因 逆转录病毒载体pMSCVneo PT67细胞
  • 简介:自上世纪以来对智能机器人研制与应用己呈高速发展,日臻完善,它在对工业操作、水下作业等方面能代替人难以完成任务。但尽管如此,其应用范围还有一定局限性。所以近年已开始研究对动物智能化训练,即用神经生理学技术“包装”动物,让它们完成许

  • 标签: 生理学 自动化科学 阳性强化手段 智能动物 训练
  • 简介:在最近发表在《MolecularPsychiatry》杂志上一项研究中。科学家们检测了阿兹海默症患者在发病过程不同阶段大脑中tau蛋白沉积样扩散特征。这一结果表明沉积斑块大小以及其扩散速度具有明显个体差异性,而大脑中tau蛋白水平与记忆损伤严重程度之间也有明显相关性。

  • 标签: TAU蛋白 扩散特征 沉积 患者 检测 MOL
  • 简介:柏拉图:为了追求更高善。亚里士多德:为了发挥潜能。爱因斯坦:究竟是鼠过马路,或是马路过鼠,取决于你参考坐标。

  • 标签: 马路 亚里士多德 爱因斯坦 柏拉图
  • 简介:成骨蛋白-1(Op-1)是骨形态发生蛋白家族(BMPs)中一员,具有较强骨诱导活性,能够在体内、外诱导骨、软骨形成,完成骨修复能力.研究发现Op-1能治愈自体骨不能愈合缺损,加速骨折愈合,能有效地促进横突体内融合发挥脊柱融合作用.Op-1用作盖髓剂,可以减轻炎症反应,诱导牙本质再生.此外,Op-1还具有抗肾脏纤维化作用,保护肾小球完整性.

  • 标签: 成骨蛋白 骨诱导 脊柱融合
  • 简介:从贵州、云南、四川、陕西和辽宁收集了27份天麻样品,从64对AFLP选择性引物组合中筛选出16对组合,对不同分布区天麻遗传多样性进行分析。16对引物共产生548条大小在100~1500bp谱带,其中多态性带428条,多态性比率(PP)达78%,说明不同分布区天麻中存在一定遗传多样性,且AFLP可以有效地进行天麻遗传多样性分析。遗传差异分析结果表明,27个样品遗传距离在0.5930~0.0187,平均为0.2199,表明不同分布区天麻个体间存在一定遗传差异。5个省份样品中来自贵州样品遗传差异相对较大,表明贵州蕴藏着相对丰富基因资源,可以作为天麻遗传改良重要种质资源。不同变型AFLP分析结果显示,3种变型从分子上无明显差异,说明天麻种内变型仅仅是表型上变异,尚未在遗传上固定下来,对天麻几个变型划分是否成立还有待进一步研究。

  • 标签: AFLP 天麻 遗传多样性
  • 简介:对胶陀螺药材性状、显微特点、理化特性和分子鉴定等方面研究结果表明,子实体初期呈黄褐色球形,并带有黄棕色麻点,顶端逐渐开裂,产生一至多个不等裂口,裂口不断扩大,最后整个子实体表面呈黑色皱缩。子囊棒形。外囊盘被由圆形细胞组成,圆形细胞外侧生绒毛,细胞内含类似载色体物质;中囊盘被由埋在胶质中交错菌丝组成。采用子囊孢子弹射分离法所得菌丝有橘黄色菌丝和长有棒状等分生孢子有隔菌丝无色;从子实体组织分离培养菌丝状,无色,其中生有黑褐色或黄棕色圆形细胞,呈念珠状。胶陀螺子实体DNA序列与菌丝DNA序列同源性为99.65%,胶陀螺子实体DNA序列与GenBank数据库中AY789345比对,其同源性为99.80%。

  • 标签: 胶陀螺 性状鉴定 显微鉴定 理化鉴定 分子鉴定
  • 简介:真菌感染临床地位日益突出,已成为医院感染重要组成。随着国内外对真菌感染和致病真菌研究不断深入,新挑战也应运而生。近年来,真菌感染致病菌谱与以往相比不尽相同,许多新致病菌种被逐一报道,而原有的真菌引起疾病也出现了新临床表现。抗真菌药物研发加速和广泛应用同时,各种简捷灵敏药敏试验方法被建立起来并加以标准化,但致病真菌耐药现象则成为困扰临床难题。从分子耐药机制入手寻找打破真菌耐药壁垒突破口,是真菌学研究和新药研制目标;注重早期诊断,完善治疗方案,是治疗真菌感染关键。

  • 标签: 真菌病 医院感染 耐药
  • 简介:本文探讨了中医药对抗肿瘤生物免疫效应影响。以近年来临床和实验研究结果为基础,多方面阐述其在生物免疫效应中影响以达到抗肿瘤目的;最后表明中医药对生物免疫效应影响是中医药抗肿瘤最重要内在作用机理。

  • 标签: 中医药 抗肿瘤 生物免疫效应
  • 简介:采用气相色谱与质谱(GC-MS)联用分析,从超临界CO2萃取孢子油中鉴定出18种脂肪酸成分,包括6种不饱和脂肪酸、7种饱和脂肪酸、2种环链脂肪酸,以及己酸、辛酸、壬酸等短链脂肪酸.GC定量分析结果表明:灵芝孢子油中检出9种已知脂肪酸,不饱和脂肪酸总量为73.6%;其中,主体成分油酸(C18:1)、亚油酸(C18:2)和棕榈酸(C16:0)等含量分别为57.5%、13.4%、19.6%;此外,不饱和脂肪酸十六碳烯酸(C16:1)、亚麻酸(C18:3)等不饱和脂肪酸含量为2.2%、0.5%.

  • 标签: 灵芝孢子 超临界CO2萃取 油脂 脂肪酸 气相色谱分析