简介:在本研究中,我们制备了可注射型负载重组人类血管内皮生长因子(rhVEGF)的胶原基微球,用于组织工程中的缓释效应。将胶原溶液制备成油包水的乳浊液,然后加入水溶性交联剂碳化二亚胺进行交联反应,即可得到胶原基微球。通过控制表面活性剂的浓度和搅拌混合物乳化液的转速,可得到1um~30um直径的胶原基微球。微球的大小随着搅拌转速的增加而成反比例减小(在300r/min-1200r/min之间,每分钟增加100t,则微球直径减小1.8um),随着表面活性剂浓度的增加而成反比例减小(表面活性剂浓度在0.1%~0.5%之间时,浓度每增加0.1%,则微球减小3.1um)。胶原基微球分别在磷酸盐缓冲液和培养液中带8.86mv和3.15mv的少量正电荷。研究显示,rhVEGF的缓释可长达4周。释放的rhVEGF可诱导人类脐静脉内皮细胞的形成,表明释放出的rhVEGF仍具有生物活性。结果显示胶原基微球具有缓释rhVEGF的潜能。
简介:生物发光标记以其可视化,便捷,快速,灵敏,可用于活体研究等诸多优点越来越多地应用于科学研究中。本研究通过CaCl2方法将实验室构建的带有青海弧菌荧光素酶基因luxAB的重组质粒导入大肠杆菌Top10中,利用酶切和核酸电泳检测荧光素酶基因的存在,利用SDS-PAGE检测荧光素酶表达的情况,然后对其表达条件进行优化。单因素试验结果表明:在培养基初始pH值6.0,癸醛体积分数1.25‰,接种量1%,IPTG浓度0.1mmol/L,装液量50mL/150mL,温度37℃条件下,重组菌的发光度最大,即表达量最高。正交试验结果表明:当pH6,IPTG浓度0.08mmol/L,接种量1.2%,温度36℃时重组大肠杆菌表达情况最好,发光度达1262.7。本研究中的重组大肠杆菌为在益生菌等食品微生物中的应用提供技术依据。