简介:摘要目的构建miR-7-1启动子核心序列的真核表达载体,并初步探讨其意义。方法根据5’端缺失实验原理,设计引物,PCR法分别扩增含不同长度启动子序列和相同miR-7-1成熟体序列的产物;纯化、经KPNI和XHOI双酶切后将它们分别亚克隆入pGL3.0-Basic真核表达载体,并进行酶切及测序鉴定;将三个构建成功的pGL3.0-miR-7载体(分别命名为p-1189-miR-7,p-1731-miR-7,p-2192-miR-7)体外瞬时转染小鼠乳腺癌4T1细胞;用Real-timePCR检测各组中miR-7成熟体的表达水平;CCK-8法检测细胞生长的变化;最后,利用TRANSFAC数据库预测结合miR-7-1启动子核心序列的潜在转录因子。结果酶切和测序验证成功构建了p-1189-miR-7、p-1731-miR-7、p-2192-miR-7三个miR-7-1启动子真核表达载体;与表达载体p-1189-miR-7、p-1731-miR-7转染组相比,表达载体p-2192-miR-7瞬时转染4T1细胞后可有效表达miR-7成熟体,并显著抑制4T1细胞的体外生长(p<0.05),提示miR-7启动子序列-1593位点到-2024位点为核心序列;最后,预测结果显示NK2-同源盒-5(NK2-Homebox-5,NKX2-5)和肝细胞核因子4(hepatocytenuclearfactor4homeobox,HNF-4)可能是结合该核心序列的转录因子。结论成功构建了p-1189-miR-7,p-1731-miR-7,p-2192-miR-7三个miR-7-1启动子真核表达载体,并筛选到miR-7-1启动子的核心序列(-1593位点到-2024位点),为后续深入研究miR-7-1在乳腺癌发生中的作用及机制提供了前期实验基础。
简介:摘要助产士是孕产妇的守护神和心灵陪护人员,被世人称之为誉为“迎接生命的天使”。在国际助产联盟当中都倡导“人文关怀、和谐生育、自然分娩”的理念,倡导富有人文精神的助产人员为孕产妇在情感方面提供极大的支持来促进自然分娩。随着我国经济的发展,近些年兴起的家庭式分娩、拉玛泽减痛分娩法及导乐一对一陪伴分娩等方法均使分娩回归自然,在很大程度上大大降低剖宫产率,被认为是现代助产学的发展方向1。本文通过调查问卷的方式对现阶段我国的高职助产专业的学生人文素质状况进行了了解分析,同时,根据了所调查到的结果对助产教育专业的现状进行了详细的分析;最后,在工作过程和高职助产课程的基础上提成了人文素质养成的策略探究。