简介：本文总结了近几年真菌提取物的抗癌作用相关的研究成果。一方面包括了最近几年关于真菌提取物诱导癌细胞凋亡、抑制癌细胞增生、减少癌细胞血管生成的各种机制研究,另一方面归纳了多种真菌提取物对癌细胞抑制作用的研究结果。近几年的研究结果显示,真菌提取物能够抑制多种肿瘤细胞的增殖,并诱导其凋亡,其机制与Wnt、NK-κB、MAPK、线粒体凋亡等多种信号通路相关,靶点包括了p38、bcl-2、c-jun、IκB、β-catenin、Akt等多种与细胞生物活动密切相关的蛋白。

简介：以田间幼嫩叶片为试材,建立枣RNA改良CTAB提取法,改良之处包括利用巯基乙醇和PVP联合去除多酚、CTAB与异硫酸氰胍联合促进RNA释放及加入糖原提高产率等。改良CTAB法提取液组成：2%CTAB,4mol/L异硫酸氰胍,100mmol/LTris-HCl（pH8.0）,20mmol/LEDTA（pH8.0）,2%PVP,4%β-巯基乙醇,250μg/ml糖原。进而采用Trizol试剂法、改良CTAB法、改进SDS-酚法、热硼酸法和异硫氰酸胍法5种方法分别对枣组培苗、幼叶、幼嫩枝皮、根皮和枣果5种器官和组织进行了总RNA提取。结果表明,组培苗RNA提取以Trizol试剂法为最佳,田间幼叶和成熟果实宜采用改良CTAB法,幼嫩枝皮和根皮宜采用改良CTAB法或改进SDS-酚法;本研究建立的改良CTAB法可作为枣不同器官和组织RNA提取的通用方法;根据季节可从不同器官和组织中获得高质量RNA;枣组织RNA含量相差较大,以幼嫩叶片含量最高,其次为组培苗、枝皮、枣果和根皮。

简介：目的探讨6味中药2种方法提取成分对酵母菌的抑菌和杀菌作用。方法采用药基琼脂稀释法，测定6味中药水提和醇提成分对白念珠菌和糠秕马拉色菌的MIC和MFC。结果对白念珠菌：水提黄连、醇提黄柏、醇提土槿皮MIC范围分别为0．625—1．25mg／mL、0．625～1．25mg/mL、0．313—0．625mg／mL；均值均为0．625mg／mL；对糠秕马拉色菌：水提和醇提黄连MIC范围分别为0．625～1．25mg／mL和1．25mg／mL，均值均为1．25mg／mL。对白念珠菌：醇提土槿皮MFC范围0．625～2．5mg/mL，均值0．625rag／mL。结论水提黄连、醇提黄柏和土槿皮对白念珠菌有较强抑菌作用，其中醇提土槿皮有较强杀菌作用。水提和醇提黄连对糠秕马拉色菌有较强抑菌作用。

简介：目的探索一种新的真菌DNA提取方法,该方法操作简便,提取效率高,耗时较短,应用范围广.方法将酶消化和Chelex-100提取DNA方法联合起来,配制一种新的DNA提取试剂.通过真菌ITS4和ITS5通用引物进行PCR,对新的DNA提取试剂同市售的Takaralysisbuffer在DNA提取方面的效能进行评价,同时对DNA浓度和纯度进行测定.结果实验所用34株真菌,自配试剂成功提取出32株真菌DNA;Takaralysisbuffer成功提出27株真菌DNA.对于两种方法都没能提出DNA的2株真菌,经液氮研磨破壁后,自制试剂均成功提取;而Takaralysisbuffer仅成功提取DNA1株.结论同市售试剂Takaralysisbuffer比较,自配DNA提取液提取DNA质量相对较高,可用于临床常见感染真菌的PCR诊断.对于某些真菌,提取DNA之前先进行菌体破壁是必要的.

简介：目的建立并评价FTA-DNA直接提取法在病原真菌分子鉴定中的应用。方法采用whatmanFTA-DNA直接提取法从25个不同种属的45株培养的菌株和6例临床标本中提取病原真菌DNA,用于病原真菌的测序鉴定。配制不同浓度的孢子悬液探索该方法的检测限和安全性。结果45株菌株扩增后均能得到1条清晰的DNA扩增片段,并成功测序。应用该方法亦成功从腹水、胸水、口腔拭子、宫颈拭子来源的临床标本中直接提取DNA并成功鉴定病原真菌。该DNA提取方法联合降落PCR能检测到1.0×103个cell/mL的孢子悬液,1.0×104个cell/mL及以下浓度的孢子悬液可以被FTA卡完全灭活。结论FTA-DNA直接提取法可快速有效地从培养的菌株及部分临床标本中提取并保存病原真菌DNA,用于病原真菌的测序鉴定。

简介：念珠菌是最主要的致病性真菌之一。随着医学分子生物学的发展，有关对念珠菌的致病基因及其表达的研究越来越广泛，进行这些研究的一个关键步骤就是RNA的提取。主要由几丁质组成的真菌的细胞壁厚且坚韧，因此破壁是提取念珠菌RNA的关键。

简介：目的探讨中药覆盆子提取物联合唑类药物的体外抗真菌作用。方法采用CLSI公布的M27-A方案微量液基稀释法和棋盘式微量稀释法,测定覆盆子提取物单用及联合唑类药物对不同念珠菌的MIC值和FICI指数。结果覆盆子不同溶液提取物与氟康唑均表现出协同关系,以覆盆子醇提物为例,单用对念珠菌的MIC80测定值范围主要集中在0.16～1.25mg/mL,与氟康唑合用后表现出协同关系（FICI≤0.5）,且MIC80测定值范围降至0.01～0.04mg/mL;合用后的氟康唑抗真菌活性也明显增强。另外,覆盆子醇提物与不同唑类药物合用后均有协同关系,其MIC80测定值由单用时大于10mg/mL降至0.04mg/mL。结论覆盆子醇提物和唑类药物单用时对耐药念珠菌的抑菌作用较弱,但二者合用后表现出明显的协同关系,对耐药念珠菌的抑菌作用明显增强。

简介：目的介绍一种从酵母、无绿藻及丝状真菌中提取DNA以用于PCR反应的方法。方法所用菌种包括临床分离的未知菌株和保藏菌株共23株：未知酵母菌（5株）、真皮毛孢子菌（1株）、糠秕马拉色菌（1株）、季也蒙念珠菌（5株）、未知丝状真菌（6株）、无绿藻（1株）、烟曲霉（2株）、拟青霉菌（1株）、茎点霉（1株）。用溶细胞酶（lyticase）结合Biospin真菌基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA，A260／A280检测纯度并计算质量浓度，用真菌通用引物ITS1／ITS4扩增真菌核糖体基因（rDNA）内转录间区ITS基因，经PCR扩增检验所提取的DNA质量。结果成功提取所有23株真菌基因组DNA，其纯度及质量浓度能满足PCR反应的要求。结论用溶细胞酶结合Biospin真菌基因组DNA提取试剂盒从酵母菌、无绿藻及丝状真菌提取的DNA可用于PCR反应。

简介：目的探讨白头翁汤正丁醇提取物（ButylalcoholextractofBaiTouWeng,BAEB）对小鼠外阴阴道念珠菌病（vul-vovaginalcandidiasis,VVC）的治疗作用.方法雌性昆明种小鼠72只,随机分为正常组、模型组、白头翁汤正丁醇提取物高剂量、中剂量、低剂量与氟康唑组,皮下注射雌二醇致小鼠假发情期,再阴道接种白念珠菌2×106CFU/mL,药物治疗7d.采用涂布法检测VVC小鼠的阴道真菌载荷量;HE染色法观察阴道组织的病理学改变;ELISA法检测小鼠阴道组织的IL-1β、IL-18的含量;qRT-PCR法检测小鼠阴道组织中NLRP3、ASC、caspase-1的mRNA表达.结果与正常组相比,模型组小鼠阴道黏膜层完全破坏,大量炎症细胞浸润;与模型组比较,BAEB组黏膜呈现不同程度的改善.与正常组相比较,模型组小鼠阴道组织IL-1β、IL-18含量升高,真菌载量明显升高,均具有统计学意义（P〈0.001）.阴道组织中TLR2、TLR4、NLRP3、ASC、caspase-1的mRNA含量分别上调,差异均有统计学意义（P〈0.001）.与模型组相比较,BAEB治疗组IL-1β、IL-18含量均降低,差异均有统计学意义（P〈0.001）.结论白头翁汤正丁醇提取物对小鼠外阴阴道念珠菌病具有治疗作用.

简介：目的探讨白头翁汤正丁醇提取物（ButylalcoholextractofBaiTouWengdecoction,BAEB）对分离自外阴阴道念珠菌病（vulvovaginalcandidiasis,VVC）的白念珠菌临床分离株（以下简称VVC临床株）生物膜形成的影响。方法采用微量稀释法测定BAEB对白念珠菌的最低抑菌浓度（MinimalInhibitoryConcentration,MIC）;甲基四氮盐（XTT）还原法测定BAEB对白念珠菌生物膜代谢活性的影响,Time-kill法检测BAEB对白念珠菌活菌数的影响;结晶紫染色法测定BAEB对白念珠菌生物膜生物量（Biomass）的影响;扫描电镜（SEM）观察BAEB对白念珠菌生物膜形态结构的影响;激光共聚焦显微镜（CLSM）检测BAEB对白念珠菌生物膜荧光信号强度的影响;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测生物膜相关基因UME6、PES1和HSP90的转录水平变化。结果BAEB对12株白念珠菌的MIC在64~256μg/mL之间,对白念珠菌生物膜的SMIC80（抑制80%生物膜形成的最低药物浓度）为1024μg/mL或以上;Time-Kill曲线显示在12h之后,512、1024μg/mL浓度的BAEB对白念珠菌均具良好的杀伤作用;结晶紫染色法表明512、1024μg/mLBAEB能够减少其生物膜生物量;SEM观察到1024μg/mLBAEB能够有效抑制白念珠菌在不同黏附介质上生物膜的完整度;CLSM显示512、1024μg/mL的BAEB可以明显降低生物膜荧光信号强度;qRT-PCR检测显示在256、512、1024μg/mL的BAEB作用下,UME6转录水平分别下调了72%、71%、77%,在512、1024μg/mL的BAEB下HSP90转录水平上调了2.23和3.31倍,而PES1未有明显变化。结论BAEB可以抑制白念珠菌VVC临床株体外生物膜的形成。

简介：目的通过静脉内接种的方法，构建播散性白念珠菌感染的兔模型，并用PCR评价伊曲康唑注射液治疗播散性念珠菌病的疗效。方法在接种后24h，用伊曲康唑注射液5rag／kg对兔模型进行治疗，1次／d，共14d。在不同的时间段取兔模型的静脉血，进行血培养和真菌通用引物以及白念珠菌特异性引物的PCR检测，监测伊曲康唑注射液治疗播散性白念珠菌感染的疗效。结果在接种白念珠菌后1h、6h，外周血中用PCR方法就能检测到白念珠菌，且能持续到8—10d；实验兔外周血血培养1h后阳性，持续到18h。实验结束后解剖实验兔，治疗组较对照组内脏器官的组织培养阳性率及菌落数低。结论PCR是一种快速和敏感的检测播散性念珠菌病的方法，伊曲康唑注射液治疗播散性白念珠菌病有效，但是真菌的清除率特别是肾脏组织的真菌清除率并不理想，治疗结束7d后，组织匀浆真菌培养仍然阳性。