简介：【摘要】目的：思考及研究慢性阻塞性肺疾病急性加重期采用参苏饮合三子养亲汤加减联合甲强龙治疗的临床效果。方法：诊疗时间2019年5月至2020年5月，选择我院罹患慢性阻塞性肺疾病急性加重期的病例62例，数字表法分组，对照组31例予以甲强龙治疗，观察组31例予以参苏饮合三子养亲汤加减联合甲强龙治疗。结果：对比对照组，观察组各项指标差异存在统计学意义，P＜0.05。结论：慢性阻塞性肺疾病急性加重期采用参苏饮合三子养亲汤加减联合甲强龙治疗，效果显著。

简介：

简介：摘要目的探究125I-RSOAds-hTERT/PSA溶瘤腺病毒对前列腺癌靶向治疗作用以及对肿瘤微环境的影响。方法采用PCR扩增技术及双酶切连接技术构建125I-RSOAds-hTERT/PSA溶瘤腺病毒(125I-病毒复合物)。通过缺口末端标记法(TUNEL)染色，流式细胞实验以及Caspase-3的免疫印迹实验分别从体内和体外检测125I-病毒复合物对前列腺癌细胞的杀伤作用。通过酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测人前列腺癌细胞株PC3和小鼠前列腺癌细胞株RM-1培养上清液及血清中的白介素2(IL-2)、IL-10、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)等的分泌水平，探究125I-病毒复合物对瘤组织细胞因子分泌水平的影响。通过免疫组织化学法以及免疫荧光实验探究125I-病毒复合物对前列腺癌组织及癌细胞中CD24、CD44以及前列腺干细胞抗原(PSCA)表达的调节，同时检测瘤组织中CD32和血管内皮生长因子(VEGF)表达水平，以及CD4＋、CD8＋和巨噬细胞浸润情况。结果125I-病毒复合物体内、体外均可显著诱导癌细胞凋亡，同时显著高于125I组和病毒复合物组。同时IL-2(t＝-183.30、-38.20，P<0.05)、IL-10(t＝113.80、92.71，P<0.05)、TNF-α(t＝-73.20、-73.91，P<0.05)、IFN-γ(t＝-65.37、-139.70，P<0.05)在体内体外含量均升高。125I-病毒复合物可降低癌细胞及癌组织中CD24、CD44以及PSCA表达，减小癌组织重量(t＝8.55，P<0.05)，抑制癌组织血管生成，同时调节肿瘤组织中免疫反应。结论125I-病毒复合物溶瘤腺病毒对前列腺癌靶向可显著杀伤癌细胞，减少癌组织重量和血管生成，同时改善肿瘤微环境。

简介：摘要目的对1例疑似缺指(趾)-外胚层发育不良-唇腭裂综合征男性引产胎儿进行基因变异检测。方法采集先证者皮肤标本和其父母的血液标本提取DNA进行全外显子测序筛选可疑致病性变异位点，Sanger测序对可疑致病位点进行验证。结果检测到先证者中Tp63基因c.673C>T杂合错义变异，其父母均为野生型，该变异曾被报道导致手裂/足裂畸形。结论Tp63基因的c.673C>T杂合错义变异可能是该先证者的发病原因。本研究结果为该病的遗传咨询和分子诊断提供了依据，并扩大了该变异导致的临床表现谱。

简介：摘要：木雕是雕塑的一种，是我国著名的民间工艺，展现了不同地区的民俗风貌，具有独特的艺术价值和深厚的文化底蕴。木雕工艺品不仅仅观赏性强，而且还具有一定的实用性，所以在现代社会快速发展的背景下，我国对于木雕工艺的传承也尤为重视。比如，在当前的幼儿园美术教学过程中，教师可以合理地渗透木雕这一传统的民间工艺，进一步发扬和传承我国的优质民间艺术文化，深化幼儿对艺术的感知。由此，本文就着重分析如何彰显幼教美术特色，继承传统木雕工艺。

简介：摘要目的探讨慢病毒介导的c-Myc启动子结合蛋白1 （MBP-1）过表达对结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法将体外培养的HCT116细胞分为以下3组：空白对照组，细胞未做任何处理；空载感染组，空载体对照慢病毒（LV-GFP）感染HCT116细胞；MBP-1过表达慢病毒组（MBP-1组），MBP-1过表达的重组慢病毒（LV-MBP-1-GFP）感染HCT116细胞。RT-PCR检测各组细胞中MBP-1 mRNA的表达，CCK-8实验检测细胞的增殖能力，流式细胞仪检测细胞的周期变化，Western blot检测细胞中MBP-1、NF-κB p65、c-Myc、CyclinD1及细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3的表达。三组间比较采用单因素方差分析，方差齐性采用F检验，若方差齐则组间比较采用LSD检验，若方差不齐则组间比较采用Dunnett检验。结果与空载感染组比较，MBP-1组在MBP-1 mRNA （1.02±0.15比4.56±1.03）、蛋白表达水平（0.18±0.01比0.72±0.10）、S期百分比[（39.12±2.18）﹪比（45.64±3.21）﹪]、G2/M期的百分比[（14.81±1.02）﹪比（23.16±2.12）﹪]、细胞中Bax蛋白（0.55±0.10比0.76±0.11）、cleaved caspase-3蛋白（0.45±0.08比0.81±0.11）表达水平均升高，差异具有统计学意义（P均< 0.001），而细胞48 h OD值（0.58±0.08比0.43±0.03）、72 h OD值（1.10±0.13比0.52±0.09）、细胞G0/G1期的百分比[（46.06±1.89）﹪比（31.36±2.02）﹪]、细胞中Bcl-2蛋白（0.52±0.10比0.23±0.02）、NF-κB p65蛋白（0.61±0.13比0.16±0.03）、c-Myc蛋白（0.79±0.15比0.43±0.05）、CyclinD1蛋白（0.62±0.09比0.32±0.01）的表达水平均降低，差异具有统计学意义（P均< 0.001）；空白对照组和空载感染组之间各指标差异无统计学意义（P > 0.05）。结论MBP-1过表达可抑制HCT116细胞增殖及诱导细胞周期阻滞于S期，其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路活化有关。

简介：摘要目的位于X染色体上的OPN1LW基因变异通常导致蓝色单色视。OPN1LW基因变异多发生在外显子区域，内含子区域的变异少见。本研究分析OPN1LW基因内含子新的剪切变异相关的X染色体连锁遗传性视杆视锥细胞营养不良合并近视家系的临床表型及基因突变特点。方法采用家系调查研究方法，收集2020年1月9日于河南省人民医院临床诊断为视杆视锥细胞营养不良合并近视1家系3代7名成员。对部分家系成员进行眼科检查，采集受试者静脉血并提取DNA，用河南省眼科疾病临床研究中心自主研发的眼后段疾病靶向捕获基因检测试剂盒PS400和全外显子测序法筛选致病基因。用一代Sanger测序和家系共分离法对筛选的靶基因进行验证，参照美国医学遗传学协会(ACMG)指南和在线工具SIFT、Polyphen2、Mutation Taster对新发现的变异位点进行致病性分析。结果先证者5岁，男，临床表现为双眼视力不佳，红绿色盲和眼球震颤。双眼眼前节检查未见明显异常。眼底可见视盘边界清、色淡，黄斑中心凹反光可见。光相干断层扫描(OCT)示双眼黄斑区部分椭圆体带反射模糊，呈颗粒样。全视野ERG显示，双眼暗视0.01 ERG波形记录不到，暗视、明视3.0 ERG a、b波振幅明显降低。先证者舅舅有相似的临床表型，但症状更严重。广角眼底照相示双眼高度近视眼底改变，周边视网膜萎缩并伴有散发黑色圆点病灶；自发荧光示周边视网膜呈弱荧光，中周部未见明显异常。2种二代测序结果均显示OPN1LW基因内含子1个新的半合子剪切变异c.112＋2T>G和SEMA4A基因1个新的杂合变异c.1913A>C(p.Y638S)。OPN1LW基因c.112＋2T>G变异进一步导致1号内含子经典的剪切体供体序列改变。根据ACMG指南分析显示，c.112＋2T>G致病性评分为PVS1＋PM2＋PP1，为致病性变异。结论本研究首次报道了与OPN1LW基因变异相关的X染色体连锁遗传性视杆视锥细胞营养不良合并近视家系的致病突变，且该新的致病变异位于基因内含子区域。这个结果与以往OPN1LW基因变异主要发生于外显子的认识不同，因此本研究扩大了OPN1LW基因致病突变谱和临床表现谱。

简介：摘要目的观察探讨聚嘧啶束结合蛋白相关剪接子（PSF）高表达对糖基化终末产物（AGEs）诱导下人视网微血管内皮细胞（hRMECs）氧化损伤的保护作用及相应分子机制。方法将hRMECs分为正常组、空载组、PSF组、锌原卟啉（ZnPP）组及PSF+ ZnPP组进行实验。正常组细胞使用含有10％胎牛血清、青霉素/链霉素的DMEM培养基，置于37 °C、95％空气、5% CO2的密闭恒温培养箱中培养。空载组细胞采用空载慢病毒感染。PSF组细胞采用过表达PSF慢病毒感染。ZnPP组细胞采用ZnPP （10 mol/L）处理2 h。PSF+ZnPP组细胞采用过表达PSF慢病毒感染后，再用ZnPP （10 mol/L）预处理2 h。后四组细胞辅以AGEs刺激，HE、Hoechst33258染色法和流式细胞法观察PSF高表达对细胞损伤的保护作用以及ZnPP对PSF的拮抗作用。采用Western blot检测细胞中血红素氧合酶-1 (HO-1)、磷酸化（p）细胞外调节蛋白激酶（ERK）、核因子2相关因子2 （Nrf2）的蛋白表达。引入ERK通路的特异性拮抗剂U0126，Western blot验证U0126对PSF蛋白所诱导的HO-1表达的逆转作用。结果HE染色和Hoechst33258染色结果显示，PSF组受损细胞核数较正常组明显增加，较PSF+ZnPP组明显减少，差异均有统计学意义（F=27.5、38.7，P<0.05）。流式细胞法结果显示，PSF组细胞产生的ROS较正常组明显增加，较PSF+ZnPP组明显减少，差异有统计学意义（F=126.4，P<0.05）。Western blot检测结果显示，PSF组HO-1蛋白表达量较正常组、空载组明显增加，差异均有统计学意义（F=70.1，P<0.05）；AGEs处理30、60、120、240 min时pERK的蛋白表达量与15 min时比较，差异均有统计学意义（F=474.0，P<0.05）；PSF+/U0126-组HO-1、Nrf2蛋白表达量较PSF-/U0126-组明显增加，PSF+/U0126＋组HO-1、Nrf2蛋白表达量较PSF+/U0126-组明显降低，差异有统计学意义（F=30.2、489.4，P<0.05 ）。结论PSF高表达可以通过活化ERK通路，促进Nrf2转位入核进而诱导HO-1表达，从而保护hRMECs免受AGEs诱导的氧化损伤。

简介：摘要目的探讨肺表面活性蛋白B(surfactant proteins-B，SP-B)内含子4基因多态性与早产儿支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia，BPD)的相关性。方法选取2016年1月至2019年1月内蒙古医科大学附属医院新生儿科诊断为BPD的早产儿为病例组，同期同民族非BPD早产儿为对照组，进行前瞻性研究，采用聚合酶链反应扩增基因分析技术分析SP-B内含子4基因型及等位基因分布情况。结果共纳入BPD患儿74例，其中蒙古族30例，汉族44例；对照组134例，其中蒙古族56例，汉族78例。不论蒙古族或汉族患儿，SP-B内含子4基因均可检出野生型和变异型(包括插入型及缺失型)2种基因型。蒙古族BPD患儿变异型基因型频率及等位基因频率与对照组相比[36.7%(11/30)比19.6%(11/56)，21.7%(13/60)比12.5%(14/112)]差异无统计学意义(P>0.05)；汉族BPD患儿变异型基因型频率及等位基因频率均高于对照组[31.8%(14/44)比12.8%(10/78)，20.5%(18/88)比7.1%(11/156)]，差异有统计学意义(P<0.05)。结论SP-B内含子4基因变异可能与内蒙古地区汉族BPD患儿遗传易感性相关。

简介：摘要目的探讨微小RNA-146a(miR-146a)靶向调控信号转导与转录激活子1(STAT1)的表达，以及其在颈动脉粥样硬化(CAS)血管内皮细胞中的功能。方法将4月龄雄性新西兰白兔按随机数字表法分成4组，每组10只：假手术组(sham组)、模型组、miR-146a-mimics-NC组(对照组)和miR-146a-mimics组(实验组)。分别尾静脉注射LipofectamineTM RNAiMAX和miR-146a-mimics-NC、miR-146a-mimics的混合液到对照组和实验组兔体内，sham组和模型组注射等剂量的生理盐水；采用L-蛋氨酸饲料喂养配合颈总动脉球囊损伤法构建CAS模型，sham组只剥离颈内动脉，不进行球囊扩张和结扎。4周后处死动物留取标本，HE染色、qRT-PCR、Western blot检测各组兔CAS病理改变、miR-146a和STAT1蛋白的mRNA表达、Janus激酶2(JAK2)和磷酸化STAT1(p-STAT1)的表达水平。分别提取标本中颈动脉的血管内皮细胞进行培养，EdU标记、Transwell小室、小管形成、TUNEL染色检测各组细胞的增殖能力、迁移能力、小管生成能力和凋亡。荧光素酶报告基因分析miR-146a和STAT1的调控关系。结果与sham组相比，模型组兔颈动脉标本中miR-146a的表达水平明显降低，而STAT1的mRNA、JAK2和p-STAT1的表达水平明显升高，内皮细胞的增殖能力、迁移能力、小管生成能力降低，细胞凋亡率升高，CAS病理明显；与模型组和对照组相比，实验组兔颈动脉标本中miR-146a的表达水平明显升高，而STAT1的mRNA、JAK2和p-STAT1的表达水平明显下降，内皮细胞的增殖能力、迁移能力、小管生成能力增强，细胞凋亡率下降，CAS病理明显好转，差异均有统计学意义(均为P<0.05)。荧光素酶报告基因分析证实miR-146a与STAT1靶向结合。结论MiR-146a能靶向调控STAT1的表达，过表达miR-146a能够抑制STAT1的表达，发挥其保护颈动脉内皮细胞的功能。

简介：摘要一例27岁男性患者，因肢体震颤3年就诊，诊断Kufor-Rakeb综合征（KRS），对多巴胺反应可。其基因检测提示ATP13A2基因存在2个新的突变，分别是28号外显子（exon）c.3367C>G（p.Leu1123Val）突变及21号外显子c.2278G>A（p.Val760Met）突变。

简介：摘要目的探讨冠状动脉粥样硬化性心脏病（CAD）患者固醇调节元件结合蛋白-2（SREBP-2）的启动子甲基化水平与血浆miR-33a以及血脂和心肌酶等生化指标的相关性。方法病例对照研究，2017年8月至2018年4月在湖北医药学院附属太和医院心内科三病区招募冠状动脉造影检查受检者100例，其中冠状动脉造影显示梗阻的CAD患者50例以及冠状动脉造影阴性的对照者50例。采集外周血样本，提取白细胞DNA，通过焦磷酸测序法检测SREBP-2启动子区两个片段，共计12个CpG位点的甲基化水平；提取血浆RNA，定量qPCR检测血浆miR-33a水平；分离血浆，采用全自动生化分析仪检测血浆中血脂、心肌酶、炎症相关因子等15项生化指标。通过Pearson和Spearman相关系数及多因素Logistic回归分析等统计学方法分析其相关性。结果CAD患者SREBP-2启动子区F1-4 CpG位点（转录起始点上游-103bp）甲基化水平显著高于对照组（4.56%±0.70% vs 3.54%±0.72%，t=-3.864，P<0.001）；F1-4位点的甲基化水平与血浆中miR-33a-5p水平和高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平呈负相关（r=-0.318，P=0.001；r=-0.225，P=0.024）。此外，校正年龄、性别、高血压、高脂血症和糖尿病病史混杂因素之后，F1-4高甲基化是CAD的独立风险因素（OR=2.452，95%CI=1.398~4.299，P=0.002）。结论DNA甲基化和miRNA可能协同调控CAD发病机制中异常的脂质代谢。

简介：摘要目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对前列腺癌细胞PC-3侵袭的影响以及组织蛋白酶B(Cathepsin B)在其中可能的作用机制。方法使用不同浓度EGCG培养组织来源为人前列腺癌分离自骨转移灶的PC-3细胞(购自中国科学院上海细胞库)，形态学检查分析PC-3细胞在侵袭、迁移上的改变；实验分为对照组与EGCG干预组(12.5、25.0、50.0、100.0 mg/L)，蛋白质印迹法(Western blot)，检测不同浓度EGCG对PC-3细胞Cathepsin B合成和分泌的影响；酶联免疫吸附(ELISA)实验，检测不同浓度的EGCG对PC-3细胞CathepsinB分泌的影响。研究历时2年。组间数据分析采用One-way ANOVA分析，组间两两比较采用Tukey方法。结果抑制侵袭实验中，除12.5 mg/L EGCG干预组(341.67±25.17，t＝2.230，P>0.05)侵袭细胞数相比对照组(376.33±9.50)差异无统计学意义外，25.0 mg/L EGCG干预组(241.00±3.60，t＝23.070，P<0.05)、50.0 mg/L EGCG干预组(170.67±13.31，t＝21.780，P<0.05)和100.0 mg/L EGCG干预组(72.66±6.80，t＝45.020，P<0.05)相比于对照组明显减少，差异均有统计学意义(F＝241.050，P<0.01)；抑制PC-3迁移实验中，12.5 mg/L EGCG干预组侵袭细胞数(0.550±0.030，t＝5.730，P<0.05)、25.0 mg/L EGCG干预组(0.430±0.018，t＝20.740，P<0.05)、50.0 mg/L EGCG干预组(0.320±0.025，t＝22.620，P<0.05)和100.0 mg/L EGCG干预组(0.260±0.017，t＝38.830，P<0.05)相比对照组(0.650±0.004)明显减少，差异均有统计学意义(F＝179.60，P<0.01)；Western blot结果显示，除12.5 mg/L EGCG干预组(3.870±0.151，t＝0.710，P>0.05)CathepsinB蛋白的合成和分泌相比对照组(3.99±0.25)差异无统计学意义外，25.0 mg/L EGCG干预组(3.29±0.12，t＝4.370，P<0.05)、50.0 mg/L EGCG干预组(2.88±0.10，t＝7.140，P<0.05)和100.0 mg/L EGCG干预组(2.060±0.085，t＝12.660，P<0.05)相比于对照组明显减少，差异均有统计学意义(F＝79.080，P<0.01)。ELISA实验显示，除12.5 mg/L EGCG干预组上清的Cathepsin B前酶光密度值比值(3.00±0.17，t＝2.040，P>0.05)和总组织蛋白酶B含量(50.23±1.75，t＝2.650，P>0.05)相比对照组(3.230±0.097)和(59.65±5.91)差异无统计学意义外，25.0 mg/L EGCG干预组(2.320±0.095，t＝11.610，P<0.05)和(39.42±4.07，t＝4.880，P<0.05)、50.0 mg/L EGCG干预组(1.410±0.061，t＝27.510，P<0.05)和(25.34±2.80，t＝9.090，P<0.05)、100.0 mg/L EGCG干预组(0.86±0.10，t＝29.470，P<0.05)和(13.80±1.57，t＝12.990，P<0.05)相比于对照组明显减少，差异均有统计学意义(F＝255.980，P<0.01和F＝78.950，P<0.01)。结论EGCG抑制前列腺癌细胞PC-3侵袭，其作用机制可能与其抑制Cathepsin B蛋白的合成与分泌相关。

简介：摘要目的探讨盐酸埃克替尼联合阿帕替尼一线治疗表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)21L858R突变的晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)的临床效果及安全性。方法采用前瞻性研究分析2014年5月至2017年5月秦皇岛市第一医院收治的Ⅳ期EGFR 21L858R突变的NSCLC患者63例的临床资料，其中40例患者仅接受盐酸埃克替尼一线治疗(盐酸埃克替尼组)，23例患者接受盐酸埃克替尼联合阿帕替尼一线治疗(盐酸埃克替尼联合阿帕替尼组)。评价两组患者的疗效及不良反应。采用电话或门诊方式随访，末次随访时间为2019年10月1日。结果盐酸埃克替尼组与盐酸埃克替尼联合阿帕替尼组的客观缓解率分别为52.0%(21/40)、73.9%(17/23)，疾病控制率分别为92.5%(37/40)、95.7%(22/23)，两组间比较差异无统计学意义(P值分别为0.115、1.000)。盐酸埃克替尼组与盐酸埃克替尼联合阿帕替尼组的中位无进展生存时间(progression-free survival，PFS)分别为8.6个月与12.1个月(χ2＝22.945，P<0.001)。进一步COX回归分析也显示阿帕替尼联合埃克替尼治疗较单药盐酸埃克替尼可延长患者的PFS(偏回归系数为－1.286，P<0.001)。两组总的不良反应发生率分别为72.5% (29/40)与82.6%(19/23)，盐酸埃克替尼组患者无3级以上不良反应，盐酸埃克替尼联合阿帕替尼组患者有1例发生3级不良反应，两组患者总的不良反应和≥3级的不良反应率相比，差异均无统计学意义(P值分别为0.540、0.365)。结论盐酸埃克替尼联合阿帕替尼一线治疗EGFR21L858R突变的NSCLC具有较好的近期效果，可提高患者的无进展生存时间，不良反应可耐受，可作为该类患者一线治疗的一种新选择。

简介：摘要目的研究微小RNA-16-5p（miR-16-5p）对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）和蛋白质印迹法（Western blotting法）检测人正常成骨细胞hFOB 1.19和骨肉瘤细胞MG63、Saos2、HOS内miR-16-5p、四分子交联体15（TSPAN15）mRNA和蛋白表达。在MG63细胞中转染miR-16-5p或si-TSPAN15，观察其在细胞增殖、迁移和侵袭中的作用。噻唑蓝（MTT）检测细胞增殖，Transwell法检测细胞迁移和侵袭，Western blotting法检测细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、TSPAN15、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶（p-PI3K）、磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）蛋白表达。Starbase网站预测结合双荧光素酶基因报告实验分析miR-16-5p与TSPAN15的靶向关系。将miR-16-5p和pcDNA-TSPAN1共转染，评估高表达TSPAN15对过表达miR-16-5p诱导的MG63细胞增殖、迁移和侵袭的影响。两组间数据的比较采用t检验。结果与hFOB 1.19细胞（1.00±0.12）相比，MG63、Saos2、HOS细胞中miR-16-5p表达量（分别为0.32±0.05、0.40±0.04、0.45±0.06）明显降低（F=156.204，P<0.05），TSPAN15 mRNA和蛋白水平显著提高（F=71.718、110.350，均P<0.05）。过表达miR-16-5p明显减少MG63细胞中CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达量及细胞存活率、细胞迁移数量和侵袭数量（F=150.136、117.228、154.971、89.479、98.373、130.880，均P<0.05）。敲减TSPAN15明显降低MG63细胞中CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平、细胞存活率、细胞迁移数量和侵袭数量（F=93.206、107.030、109.326、115.625、146.113、139.300，均P<0.05）。过表达miR-16-5p显著降低MG63细胞中p-PI3K、p-AKT蛋白表达量（F=156.755、181.419，均P<0.05）。miR-16-5p靶向调控TSPAN15的表达。高表达TSPAN15可部分逆转miR-16-5p对MG63细胞内TSPAN15、CyclinD1、MMP-2、MMP-9、p-PI3K、p-AKT蛋白表达、细胞存活率、细胞迁移数量和侵袭数量的抑制作用。结论miR-16-5p通过靶向TSPAN15基因并调控PI3K/AKT信号通路，从而抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭。