简介：目的:探讨核酸适体KMF2-1a为基础的乳腺癌细胞靶向化疗药物载体的应用价值。方法:采用细胞仪检测人体乳腺癌MCF-1OAT1细胞内吞KMF2-1a的药物载体的作用,其结果以分光光度计检测。结果:核酸适体KMF2-1a及其药物载体可被MCF-1OAT1细胞特异性内吞。结论:核酸适体KMF2-1a可用于靶向治疗乳腺癌。

简介：选择60Coγ射线5Gy照射后第7天的人胚肺成纤维细胞(HELF),采用聚阳离子脂质体LipofectAMINE介导的基因转染法将人TGFβ1正、反义基因表达载体pMAMneo-TGFβ1和pMAMneo-AntiTGFβ1转入HELF,转染细胞经G418抗性筛选出来.提取培养细胞的染色体DNA,用DNA斑点印迹分析表明,它们能与neo基因特异杂交.用neo基因特异的PCR引物能从转染细胞扩增出276bp的阳性片段,而未转染细胞则扩增阴性.

简介：目的：建立基于Tet-on系统的可调控真核细胞表达小鼠尿激酶原激活剂（uPA）的诱导表达系统。方法：提取C57小鼠肾组织总RNA,RT-PCR扩增uPAcDNA序列;提取基因组DNA,扩增uPA编码区后最后一个外显子序列,构建pTRE2-uPAcDNA-700载体,将其与pTet-on瞬时共转染Huh7细胞系,24h后用强力霉素诱导表达,诱导后36h分别收集细胞和培养上清（诱导组）,提取细胞总RNA并进行细胞uPA转录水平的检测;采用溶圈法对细胞分泌至培养上清中uPA的生物活性进行检测,同时以转染但未诱导Hun7（未诱导组）和正常培养Huh7（正常对照组）细胞及培养上清作为对照。结果：与未诱导组和正常对照组相比较,仅诱导组在转录水平上扩增出目的条带;溶圈法证实转染的细胞不仅表达uPA,而且表达的蛋白具有一定的生物活性。结论：构建了可调控的uPA真核诱导表达系统,为进一步制备可调控肝细胞表达uPA转基因小鼠及进一步揭示uPA肝损伤机理奠定了基础。

简介：人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)是一种用于治疗血栓性心血管疾病的特效药物,它能激活血纤维蛋白酶原,后者使血块溶解,所以这种药物的开发为社会普遍重视。t-PA在人体血液中的含量极低,很难从天然材料中提取。如果应用转基因技术,将人t-PA基因转入动物体内,使其在乳腺中高效表达,从乳汁中提取大量的t-PA,将具有可观的经济效益和社会效益。转基因动物建立的前提条件是构建乳腺定位高效表达载体。为此,我们先将本所保存的t-

简介：目的：构建趋化因子CXCL12的重组腺病毒表达载体,观察其对间充质干细胞（MSC）中成骨特异性转录因子Runx2表达的影响。方法：将目的基因CXCL12全长cDNA模板进行PCR扩增、酶切后与pHBAd-MCMV-GFP载体结合,获得pHBAd-MCMV-CXCL12-GFP重组载体;将重组载体和包装质粒共转染HEK293细胞进行包装、扩增;利用所携带的绿色荧光蛋白基因测定病毒滴度,观察基因转染效率,QPCR和Western印迹检测CXCL12重组腺病毒转染后MSC中CXCL12和Runx2的表达。结果：酶切、PCR及测序结果证实CXCL12重组腺病毒载体构建成功,转染MSC后CXCL12和Runx2的表达明显升高,AMD3100可以降低CXCL12基因转染后MSC中Runx2的表达。结论：趋化因子CXCL12和MSC表面的CXCR4结合对MSC中成骨特异性转录因子Runx2的表达具有促进作用。

简介：目的：构建4E—BPl及其T37A、T46A、$65A、T70A突变体4E—BPl-4A基因表达的重组慢病毒载体，研究其对胃癌HGC27细胞生长的影响。方法：PCR扩增4E—BPl基因及其突变体aE—BPl-4A基因并克隆到pCDH载体，构建成pCDH-4E—BPl、pCDit一4E—BPl—4A，将其-9包装载体共转染293T细胞，包装成Lenti-4E—BPl及Lenti-4E—BPl—4A重组慢病毒载体，将此慢病毒感染胃癌HGC27细胞，Western印迹鉴定病毒载体介导的4E—BPl、4E～BPl—4A蛋白的表达，MTT、克隆形成和软琼脂方法研究过量表达4E—BPl、4E—BPl—4A对胃癌HGC27细胞生长的影响。结果：包装成Lenti-4E—BPl及Lenti-4E—BPl—4A重组慢病毒载体，并将此慢病毒载体感染胃癌HGC27细胞；MTT、克隆形成、软琼脂实验表明过量表达4E—BP!可抑制胃癌HGC27细胞的生长，过量表达4E—BP!一4A时抑制效果更明显。结论：构建了4E—BPl、4E—BPI-4A的重组慢病毒表达载体，在胃癌HGC27细胞中过量表达4E—BPl可抑制细胞生长，过量表达4E—BPl-4A的抑制效果更明显。