简介：摘要目的观察血清微小RNA-145(miR-145)、微小RNA-15b(miR-15b)水平与脑梗死患者神经功能的相关性，指导未来对脑梗死患者神经功能进行有效保护。方法抽取2017年1月至2021年1月郑州颐和医院收治的231例脑梗死患者作为研究对象，均于入院时检测患者血清miR-145及miR-15b水平，并评估其神经功能，分析血清miR-145及miR-15b水平表达与脑梗死患者神经功能的关系。结果231例脑梗死患者中，轻度神经功能缺损94例，中度神经功能缺损106例，重度神经功能缺损31例。重度神经功能缺损组入院时血清miR-145相对表达量低于轻-中度神经功能缺损组，miR-15b相对表达量高于轻-中度神经功能缺损组(P<0.05)；两组其他相关资料比较差异未见统计学意义(P>0.05)。绘制受试者工作特征曲线发现，入院时血清miR-145及miR-15b水平用于预测重度神经功能缺损的曲线下面积均>0.80，有一定预测性能。结论脑梗死患者入院时血清miR-145、miR-15b水平表达与患者神经功能密切相关，早期检测两指标可预测患者重度神经功能缺损风险，并指导治疗方案的拟定。

简介：摘要目的探讨ICE方案(异环磷酰胺、卡铂、VP16)联合甲氨蝶呤对弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者的临床疗效及miR-451a、miR-15a表达的影响。方法前瞻性选取2013年3月至2018年5月长沙市第三医院56例DLBCL患者作为研究对象，依据随机数字表法分为观察组与对照组，各28例。对照组予以ICE方案治疗，观察组予以ICE方案联合甲氨蝶呤治疗。对比两组肿瘤控制率、毒副反应、治疗前后血清miR-451a及miR-15a表达水平、免疫功能(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)、血清肿瘤标志物[β2微球蛋白(β2-MG)、糖类抗原125(CA125)、乳酸脱氢酶(LDH)]水平，随访6～12个月统计两组生存率。结果观察组肿瘤控制率(92.86%)高于对照组(71.43%)(P<0.05)；治疗后两组miR-15a较治疗前降低，miR-451a较治疗前增高，且观察组miR-15a低于对照组，miR-451a高于对照组(P<0.05)；治疗后两组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+较治疗前降低，CD8+较治疗前增高(P<0.05)，但组间比较差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后两组CA125、LDH及β2-MG水平较治疗前降低，且观察组低于对照组(P<0.05)；观察组毒副反应发生率、治疗后6、9、12个月生存率与对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论ICE方案联合甲氨蝶呤治疗DLBCL可通过调节血清miR-451a、miR-15a表达，进一步提高治疗效果，降低血清肿瘤标志物水平，且毒副反应及对免疫损害小，安全性高。

简介：摘要目的探讨ICE方案(异环磷酰胺、卡铂、VP16)联合甲氨蝶呤对弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者的临床疗效及miR-451a、miR-15a表达的影响。方法前瞻性选取2013年3月至2018年5月长沙市第三医院56例DLBCL患者作为研究对象，依据随机数字表法分为观察组与对照组，各28例。对照组予以ICE方案治疗，观察组予以ICE方案联合甲氨蝶呤治疗。对比两组肿瘤控制率、毒副反应、治疗前后血清miR-451a及miR-15a表达水平、免疫功能(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)、血清肿瘤标志物[β2微球蛋白(β2-MG)、糖类抗原125(CA125)、乳酸脱氢酶(LDH)]水平，随访6～12个月统计两组生存率。结果观察组肿瘤控制率(92.86%)高于对照组(71.43%)(P<0.05)；治疗后两组miR-15a较治疗前降低，miR-451a较治疗前增高，且观察组miR-15a低于对照组，miR-451a高于对照组(P<0.05)；治疗后两组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+较治疗前降低，CD8+较治疗前增高(P<0.05)，但组间比较差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后两组CA125、LDH及β2-MG水平较治疗前降低，且观察组低于对照组(P<0.05)；观察组毒副反应发生率、治疗后6、9、12个月生存率与对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论ICE方案联合甲氨蝶呤治疗DLBCL可通过调节血清miR-451a、miR-15a表达，进一步提高治疗效果，降低血清肿瘤标志物水平，且毒副反应及对免疫损害小，安全性高。

简介：摘要目的探讨血清miR-134及miR-146b表达水平预测老年急性缺血性脑卒中(AIS)患者预后的价值。方法选取2017年1月至2019年10月海口市第三人民医院收治的162例老年AIS，根据改良Rankin量表(mRS)分为预后良好组(98例)和预后不良组(64例)，采用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分分为轻度组(46例)、中度组(75例)、重度组(41例)。采用实时荧光定量PCR检测各组血清miR-134及miR-146b表达水平。应用多因素Logistic回归分析老年AIS患者预后不良的危险因素。应用ROC曲线分析血清miR-134及miR-146b表达水平预测老年AIS患者预后不良的价值，Pearson相关分析老年AIS患者血清miR-134及miR-146b表达水平与NIHSS及mRS评分的相关性。结果AIS组血清miR-134(3.26±1.13比0.85±0.38)及miR-146b(2.27±0.93比0.56±0.21)表达水平明显高于对照组(t＝14.360、12.527，P<0.01)。预后不良组血清miR-134(4.35±1.46比2.28±0.85)及miR-146b(3.07±1.04比1.51±0.66)表达水平明显高于预后良好组(t＝13.520、11.242，P<0.01)。重度组血清miR-134及miR-146b表达水平均明显高于中度组和轻度组(t＝10.815、9.462，P<0.01)，且中度组血清miR-134及miR-146b表达水平均明显高于轻度组(t＝13.627、11.611，P<0.01)。多因素Logistic回归分析显示，血清miR-134[OR(95%CI)：2.470(1.603～4.927)]及miR-146b[OR(95%CI)：1.914(1.350～3.406)]水平升高是老年AIS患者预后不良的危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示，血清miR-134及miR-146b表达水平预测老年AIS患者预后不良的最佳截值分别为3.84、2.68，两项联合预测老年AIS患者预后不良的曲线下面积(0.926，95%CI：0.865～0.987)明显高于单项，其敏感度和特异度为92.4%和86.2%。相关分析显示，老年AIS患者血清miR-134及miR-146b表达水平与NIHSS评分及mRS评分均呈正相关(r＝0.806、0.871、0.785、0.842，均P<0.01)。结论血清miR-134及miR-146b表达水平升高与老年AIS患者神经功能缺损的严重程度及预后相关，两项联合预测老年AIS患者预后不良的价值较高。

简介：摘要目的探讨AP患者血清miR-148a-3p和miR-551b-5p的表达水平及其临床价值。方法选取2017年1月至2020年9月间儋州市人民医院收治的152例AP患者的临床资料，根据病情严重程度将患者分为MAP组(70例)、MSAP组(40例)和SAP组(42例)，SAP组又根据患者预后情况分成生存组(25例)和死亡组(17例)。另选取50例体检健康者作为对照组。于患者发病当天采集空腹静脉血，采用实时定量PCR法检测各组血清miR-148a-3p和miR-551b-5p表达水平。绘制受试者工作特征曲线(ROC)，计算曲线下面积(AUC)，分析血清miR-148a-3p和miR-551b-5p表达水平对SAP预后判断的价值。采用Pearson法分析SAP患者血清miR-148a-3p与miR-551b-5p表达水平的相关性。结果AP组患者血清miR-148a-3p和miR-551b-5p表达水平均明显高于对照组(3.18±1.27比0.96±0.28，1.94±0.85比0.51±0.12，P值均<0.001)。SAP组血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表达水平均明显高于MSAP组、MAP组(4.36±1.70比2.84±1.10、2.50±0.92，2.80±1.04比1.68±0.53、1.42±0.45，P值均<0.001)。死亡组血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表达水平均明显高于生存组(5.30±1.95比3.47±1.40，3.62±1.37比2.08±0.91，P值均<0.001)。ROC曲线分析显示，miR-148a-3p与miR-551b-5联合判断SAP预后的AUC值明显高于miR-148a-3p、miR-551b-5p单项指标[0.943(95%CI0.886～0.997)比0.860(95%CI0.797～0.924)、0.822(95%CI0.765～0.880)]，其灵敏度为98.3%，特异度为84.6%。相关分析显示，SAP患者血清miR-148a-3p与miR-551b-5p表达水平呈正相关(r＝0.835，P<0.001)。结论AP患者血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表达水平明显升高，两者联合检测对判断SAP患者预后具有较好的价值。

简介：摘要目的研究miR-125b-1-3p在轮状病毒(rotavirus)复制过程中的作用和调控机制。方法将MA104细胞中的miR-125b-1-3p分别上调和下调后感染轮状病毒，通过RT-PCR分析miR-125b-1-3p的表达情况和轮状病毒拷贝数；免疫荧光分析miR-125b-1-3p对轮状病毒蛋白表达情况的影响；Western blot分析miR-125b-1-3p参与调控的相关蛋白表达情况。结果轮状病毒感染细胞后，miR-125b-1-3p的表达水平明显上调，上调miR-125b-1-3p后，轮状病毒的VP7、NSP3基因拷贝数下降，下调miR-125b-1-3p后，轮状病毒的VP7、NSP3基因拷贝数明显升高；上调miR-125b-1-3p的表达水平后轮状病毒蛋白荧光数下降，下调miR-125b-1-3p后，病毒蛋白荧光数增加；轮状病毒感染细胞16 h后PI3K/Akt通路活性受到抑制，上调miR-125b-1-3p能够抑制PI3K/Akt通路的活化。结论miR-125b-1-3p通过调控PI3K/Akt通路抑制轮状病毒的复制。研究结果为探讨miR-125b-1-3p和PI3K/Akt通路之间的具体调控机制研究提供了实验基础，为轮状病毒抗感染治疗提供了靶点。

简介：摘要

简介：摘要目的探讨微小RNA(miR)-193b-3p在新生脓毒症大鼠海马组织中的表达情况，以及其在脓毒症神经炎症反应中的作用及可能机制。方法将24只2 d龄SD大鼠按随机数字表法分为对照组与脂多糖组及阴性对照组与miR-193b-3p组，每组6只。脂多糖组、阴性对照组及miR-193b-3p组通过腹腔注射脂多糖(2.5 mg/kg)制备脓毒症模型，miR-193b-3p组和阴性对照组分别于脂多糖注射前3 d将5 µL miR-193b-3p模拟物或阴性对照物(20 nmol/L)注入大鼠侧脑室。将PC12细胞分为对照组、脂多糖组、miR-193b-3p组和脂多糖+miR-193b-3p组，其中miR-193b-3p组和脂多糖+miR-193b-3p组将miR-193b-3p模拟物转染入细胞内，脂多糖组和脂多糖+miR-193b-3p组细胞暴露于100 ng/mL脂多糖中孵育。采用基因芯片检测及双荧光素酶报告分析方法明确miR-193b-3p的靶基因。采用神经行为学评分评估各组大鼠特定时间点的神经功能，采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组大鼠海马组织或各组PC12细胞中miR-193b-3p及炎性细胞因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α mRNA的表达，采用免疫荧光双标染色检测各组大鼠海马组织中视黄酸受体相关孤儿受体α(RORα)与神经元特异性核蛋白(NeuN)、离子钙接头蛋白-1(IBA-1)或胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的共表达情况，采用免疫荧光染色检测各组PC12细胞中RORα的荧光强度。结果(1)基因芯片检测及双荧光素酶报告分析确定RORα为miR-193b-3p的靶基因。(2)与对照组相比，脂多糖组大鼠的神经行为学评分自脂多糖注射后6 h开始明显降低，24 h时达最低，差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比，脂多糖组大鼠海马组织中IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA的表达均明显升高，miR-193b-3p的表达明显降低，差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)与阴性对照组[(3.23±0.92)分]相比，miR-193b-3p组大鼠脂多糖注射后48 h的神经行为学评分[(7.51±0.84)分]明显增高，差异有统计学意义(P<0.05)。与阴性对照组相比，miR-193b-3p组大鼠海马组织中IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA的表达均明显降低，miR-193b-3p的表达明显增高，差异均有统计学意义(P<0.05)。(4)与对照组相比，脂多糖组大鼠海马组织中NeuN(+)RORα(+)细胞数量明显减少，差异有统计学意义(P<0.05)；与阴性对照组相比，miR-193b-3p组大鼠海马组织中NeuN(+)RORα(+)细胞数量明显增加，差异有统计学意义(P<0.05)。(5)与对照组相比，脂多糖组PC12细胞中RORα的荧光强度明显降低，IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA的表达均明显升高，差异均有统计学意义(P<0.05)；与脂多糖组相比，脂多糖+miR-193b-3p组PC12细胞中RORα的荧光强度明显增加，IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA的表达均明显降低，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论miR-193b-3p通过调控其靶基因RORα在海马神经细胞中的表达，抑制新生脓毒症大鼠的神经炎症反应。

简介：摘要目的探讨微小RNA 125b(miR-125b)对年龄相关性白内障晶状体上皮细胞(LECs)抗氧化应激能力的影响及其可能的作用机制。方法收集2018年7月至2019年3月于河南省立眼科医院接受白内障超声乳化手术的年龄相关性白内障患者24例24眼的晶状体前囊膜组织标本24份，同期纳入河南省立眼科医院眼库的20例20眼供体正常前囊膜组织20份，分别采用逆转录PCR和Western blot法检测并比较不同标本LECs中miR-125b和核因子E2相关因子2(Nrf2)的表达量；将人LECs细胞系HLEB-3细胞分为对照组和氧化应激模型组，采用不同浓度的H2O2(100、200、400 μmol/L)共培养细胞建立氧化应激细胞模型，对照组采用不含H2O2的培养基。细胞培养24 h后采用DCFH-DA荧光探针测定不同浓度H2O2处理组细胞内源性活性氧簇(ROS)含量，ELISA法检测总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)浓度；分别采用逆转录PCR和Western blot法检测各组细胞中miR-125b和Nrf2的表达水平。用含有miR-125b拟似物、miR-125b对照和miR-125b抑制物序列的质粒分别转染HLEB-3细胞24 h，采用DCFH-DA荧光探针法测定并比较不同转染组细胞中ROS含量，ELISA法检测T-AOC、SOD和GSH-Px活性及MDA浓度；采用双荧光素酶报告法验证miR-125b与Nrf2的靶向关系；采用Western blot法检测各转染组细胞内Nrf2蛋白表达水平；采用免疫荧光双染色法检测不同转染组细胞中Nrf2和Keap1的表达和定位。结果正常晶状体前囊膜组织中miR-125b和Nrf2的相对表达量分别为0.21±0.03和0.27±0.06，少于白内障前囊膜组织中的0.89±0.05和0.84±0.12，差异均有统计学意义(t＝15.355，P<0.05；t＝18.647，P<0.05)。各浓度H2O2处理组细胞中miR-125b和Nrf2相对表达量均明显高于对照组，miR-125b和Nrf2相对表达量随着H2O2浓度的增加而升高，差异均有统计学意义(均P<0.05)；与对照组比较，各浓度H2O2处理组细胞内T-AOC、SOD和GSH-Px活性均明显降低，ROS含量和MDA浓度均明显升高，差异均有统计学意义(均P<0.05)；与miR-125b对照组比较，miR-125b拟似物组细胞中T-AOC、SOD和GSH-Px活性均明显升高，ROS含量和MDA浓度均明显降低，差异均有统计学意义(均P<0.05)；miR-125b抑制物组细胞中T-AOC、SOD和GSH-Px活性均明显低于miR-125b对照组，ROS含量和MDA浓度均明显高于miR-125b对照组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。双荧光素酶报告结果提示H2O2刺激后细胞中Nrf2发生不同程度的核转移，miR-125b拟似物组细胞质中Nrf2荧光最强，核转移也最显著，细胞质中Keap1的表达微弱；miR-125b抑制物组细胞质中Nrf2荧光强度最弱，核转移少，细胞质中Keap1荧光表达增强。结论miR-125b能增强年龄相关性白内障LECs的抗氧化应激能力，其机制可能与miR-125b靶向刺激Nrf2表达上调，进而调控Keap1/Nrf2信号通路活性有关。

简介：摘要目的研究miR-133b对结肠癌细胞(SW620细胞)凋亡及放射敏感性影响并探讨其机制。方法采用脂质体法转染miR-con组(转染miR-con)、miR-133b组(转染miR-133b mimics)、si-con组(转染si-con)和si-HER-2组(转染si-HER-2) SW620细胞，然后进行0、2、4、6、8 Gy照射。使用qRT-PCR、Western blot、流式细胞术、克隆形成实验和双荧光素酶报告基因实验分别检测各组细胞中miR-133b表达、HER-2蛋白表达、细胞凋亡、细胞存活分数和细胞荧光活性。结果与照射前相比，照后SW620细胞中miR-133b表达降低(P<0.05)，HER-2表达升高(P<0.05)。过表达miR-133b、敲减HER-2均可降低SW620细胞存活分数(P<0.05)，促进细胞凋亡(P<0.05)。miR-133b可抑制野生型HER-2细胞荧光活性(P<0.05)，且可负向调控HER-2蛋白表达。结论miR-133b可抑制SW620细胞存活，促进细胞凋亡，增强放射敏感性，其机制可能与靶向HER-2有关。

简介：摘要目的探讨长链非编码RNA（lncRNA）CDKN2B-AS1靶向miR-98-5p对肺癌A549细胞增殖、侵袭的影响。方法体外培养肺癌A549细胞，分为对照组、pcDNA组（转染pcDNA）、CDKN2B-AS1组（转染pcDNA CDKN2B-AS1）和双转染组（转染pcDNA CDKN2B-AS1、pcDNA miR-98-5p）。检测A549细胞中CD-KN2B-AS1、miR-98-5p表达及PCNA、MMP-9蛋白表达，检测A549细胞活性、克隆数、克隆形成率、侵袭细胞数。结果与pcDNA组相比，CDKN2B-AS1组A549细胞中CDKN2B-AS1表达水平[（2.14±0.14）vs （1.03±0.10）]、各时间点的细胞OD值、细胞克隆数[（314.60±18.13）个比（220.08±12.46）个]、克隆形成率[（85.81±3.06）% vs （60.03±2.85）%]、侵袭细胞数[（233.30±18.98）个vs （140.84±12.30）个]及细胞中PCNA[（0.78±0.08）vs （0.48±0.07）]、MMP-9蛋白表达[（0.75±0.06）vs （0.38±0.06）]水平显著升高（均P<0.05），miR-98-5p表达水平[（0.23±0.03）vs （0.99±0.09）]显著降低（P<0.05）；与CDKN2B-AS1组相比，双转染组A549细胞中CD-KN2B-AS1表达水平差异无统计学意义（P>0.05），miR-98-5p表达水平显著升高（P<0.05），各时间点的细胞OD值、细胞克隆数、克隆形成率、侵袭细胞数及细胞中PCNA、MMP-9蛋白表达水平均显著降低（P<0.05）。结论lncRNA CDKN2B-AS1通过靶向抑制miR-98-5p表达对肺癌A549细胞增殖、侵袭具有促进作用。

简介：AbstractBackground:Long non-coding RNA (lncRNA) actin filament-associated protein 1 antisense RNA 1 (AFAP1-AS1) functions as a competing endogenous RNA to regulate target genes expression by sponging microRNAs (miRs) to play cancer-promoting roles in cancer stem cells. However, the regulatory mechanism of AFAP1-AS1 in cervical cancer (CC) stem cells is unknown. The present study aimed to provide a new therapeutic target for the clinical treatment of CC.Methods:Hyaluronic acid receptor cluster of differentiation 44 variant exon 6 (CD44v6)(+) CC cells were isolated by flow cytometry (FCM). Small interfering RNAs of AFAP1-AS1 (siAFAP1-AS1) were transfected into the (CD44v6)(+) cells. The levels of AFAP1-AS1 were measured by quantitative real-time PCR (qRT-PCR). Sphere formation assay, cell cycle analysis, and Western blotting were used to detect the effect of siAFAP1-AS1. RNA pull-down and luciferase reporter assay were used to verify the relationship between miR-27b-3p and AFAP1-AS1 or vascular endothelial growth factor (VEGF)-C.Results:CD44v6(+) CC cells had remarkable stemness and a high level of AFAP1-AS1. However, AFAP1-AS1 knockdown with siAFAP1-AS1 suppressed the cell cycle transition of G(1)/S phase and inhibited self-renewal of CD44v6(+) CC cells, the levels of the stemness markers octamer-binding transcription factor 4 (OCT4), osteopontin (OPN), and cluster of differentiation 133 (CD133), and the epithelial-mesenchymal transition (EMT)-related proteins Twist1, matrix metalloprotease (MMP)-9, and VEGF-C. In the mechanism study, miR-27b-3p/VEGF-C signaling was demonstrated to be a key downstream of AFAP1-AS1 in the CD44v6(+) CC cells.Conclusions:LncRNA AFAP1-AS1 knockdown inhibits the CC cell stemness by upregulating miR-27b-3p to suppress VEGF-C.

简介：摘要目的探讨miR-187-5p通过RANKL/NFκB信号通路对骨质疏松症中破骨细胞活性的影响及机制分析。方法使用小鼠巨噬细胞264.7细胞株（RAW246.7），设置正常组（con）、核因子κB配体的受体激活子（receptor activator of nuclear factor-κBligand，RANKL）诱导的骨质疏松症组（RANKL-induced OP）、阴性对照（mimic negative control，mimic NC）、OP+miR-187-5p模拟物（OP+miR-187-5p mimic），通过细胞计数试剂盒（the cell counting kit 8，CCK8）检测破骨细胞的增殖水平，RT-qPCR检测TRAPmRNA、miR-187-5p表达水平，免疫印迹检测p65和TNFα蛋白表达。最后，通过双荧光素酶报告基因（dual luciferase reporter assays）检测miR-187-5p和p65间的相互作用。结果RAW264.7细胞转染miR-187-5p后，OP组的细胞增殖水平和TRAP mRNA水平显著高于con组（P=0.008、0.017），OP+miR-187-5p mimic组细胞增殖水平和TRAP mRNA水平显著低于OP+miR-187-5p NC组（P=0.023、0.037）。而miR-187-5p在OP组显著低于con组（P=0.031），转染miR-187-5p mimic后升高其表达水平（P=0.041）。此外，OP组的p65和TNFα蛋白水平明显高于con组（P=0.034; P=0.024），OP+miR-187-5p mimic组的p65和TNFα蛋白水平显著低于OP+miR-187-5p NC组（P=0.028；P=0.036）。同时OP组的p65显著高于con组（P=0.039），OP+miR-187-5p mimic组的p65基因水平明显高于OP+miR-187-5p NC（P=0.025）。双荧光素酶报告分析，miR-187-5p与p65间存在靶向关系。结论miR-187-5p通过抑制NFκB信号通路抑制破骨细胞的活性。

简介：摘要目的研究咪唑安定对结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响，并探讨其机制是否与调控微小RNA-4458（miR-4458）/核因子κB（nuclear factor κB，NF-κB）通路有关。方法本研究于2019年12月至2020年10月开展实验。用不同浓度咪唑安定处理结肠癌细胞SW620，噻唑蓝法、Transwell实验检测SW620细胞增殖、迁移和侵袭，蛋白质印迹法检测细胞周期素D1（CyclinD1）、基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2，MMP2）、MMP9、磷酸化的NF-κBp65（phosphorylated NF-κB p65，p-p65）和磷酸化的NF-κB抑制蛋白-α（phosphorylated NF-κB inhibitory protein-α，p-IкBα）表达，实时定量聚合酶链反应分析miR-4458表达。转染miR-4458抑制物至SW620细胞，采用上述方法评估抑制miR-4458表达对SW620细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果咪唑安定处理显著降低SW620细胞增殖活力［（0.843±0.05）、（0.611±0.04）、（0.527±0.03）比（1.089±0.07）］、迁移能力［（147±10.49）个、（117±8.06）个、（83±6.13）个比（179±13.07）个］和侵袭能力［（113±8.67）个、（89±4.71）个、（61±3.79）个比（136±9.14）个］（均P＜0.05），并下调CyclinD1［（0.70±0.05）、（0.51±0.03）、（0.44±0.03）比（0.83±0.07）］、MMP2［（0.73±0.05）、（0.56±0.04）、（0.45±0.03）比（0.91±0.07）］、MMP9［（0.58±0.04）、（0.41±0.03）、（0.34±0.02）比（0.76±0.06）］、p-p65［（0.70±0.05）、（0.57±0.04）、（0.43±0.03）比（0.83±0.07）］和p-IкBα［（0.61±0.04）、（0.48±0.04）、（0.37±0.02）比（0.71±0.05）］蛋白的表达（均P＜0.05），上调miR-4458［（1.43±0.10）、（1.89±0.15）、（2.01±0.14）比（1.00±0.08）］表达（均P＜0.05）。抑制miR-4458表达显著增加SW620细胞增殖活力［（1.428±0.11）比（1.093±0.08）］、迁移能力［（237±19.76）个比（183±14.55）个］和侵袭能力［（179±14.12）个比（131±8.14）个］（均P＜0.05），上调CyclinD1［（1.37±0.11）比（0.85±0.06）］、MMP2［（1.58±0.12）比（0.93±0.08）］和MMP9［（1.11±0.09）比（0.77±0.06）］蛋白表达（均P＜0.05）。抑制miR-4458表达可减弱咪唑安定对SW620细胞增殖活力［（0.978±0.07）比（0.534±0.04）］、迁移能力［（173±9.84）个比（87±5.73）个］、侵袭能力［（143±11.04）个比（65±4.13）个］以及CyclinD1［（0.81±0.06）比（0.43±0.02）］、MMP2［（0.89±0.08）比（0.48±0.03）］和MMP9［（0.75±0.05）比（0.36±0.02）］蛋白表达的抑制作用（均P＜0.05）。抑制NF-κB通路可逆转抑制miR-4458表达对咪唑安定处理的SW620细胞增殖［（0.547±0.03）比（0.978±0.07）］、迁移［（76±4.19）个比（173±9.84）个］和侵袭［（61±4.05）个比（143±11.04）个］的影响（均P＜0.05）。结论咪唑安定通过上调miR-4458和抑制NF-κB活化对结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭产生抑制作用。

简介：摘要目的探讨miR-23b对人肝癌细胞恶性表型及其对仑伐替尼敏感性的影响。方法人肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721和QGY-7703细胞分别转染miR-23b mimic及其对照，CCK-8与EdU实验检测细胞增殖能力，Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力的变化情况，管腔形成实验检测细胞的血管生成拟态情况。组间均数比较采用t检验进行分析。结果CCK-8结果显示，转染120 h后miR-23b mimic组的肝癌细胞HepG2和SMMC-7721，其A值分别为0.325±0.011和0.537±0.026，明显低于对照组的0.430±0.017和0.752±0.051（P值均< 0.05）。Transwell实验结果显示，miR-23b mimic组肝癌细胞HepG2和SMMC-7721的细胞迁移数为（517.220±32.873）个和（242.327±20.793）个，显著低于对照组的（724.130±15.142）个和（424.432±27.212）个（P值均< 0.01）；同时miR-23b mimic组的细胞侵袭数为（55.671±7.514）个和(64.670±6.011)个，显著低于对照组的（124.320±11.782）个和（156.204±12.501）个（P值均< 0.01）。管腔形成实验显示，miR-23b mimic组肝癌细胞QGY-7703和SMMC-7721的成管分支数为（489.824±42.035）个和（435.201±44.143）个，明显低于对照组的（878.620±31.618）个和（785.430±38.723）个（P值均< 0.01）。并且，EdU结果显示miR-23b与仑伐替尼联合用药后，miR-23b mimic组肝癌细胞HepG2和SMMC-7721的EdU染色阳性率为32.905%±1.342%和24.811%±0.820%，显著低于对照组的52.623%±2.441%和38.702%±1.312%（P值均< 0.05）。结论miR-23b可抑制人肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭和血管拟态形成，并增强人肝癌细胞对仑伐替尼的药物敏感性。

简介：摘要目的探讨miR-20a-5p、赖氨酸脱甲基酶6B(KDM6B)在骨肉瘤组织中的表达及miR-20a-5p靶向KDM6B对骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭及肿瘤生长的影响。方法收集2017年1月至2019年3月在中国医科大学附属第一医院接受治疗的20例骨肉瘤患者的临床病理标本和癌旁组织，采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测组织中miR-20a-5p及KDM6B mRNA表达水平。将骨肉瘤MG63细胞分为空白对照组、mimic NC组、miR-20a-5p mimic组和NC＋空载体组、miR-20a-5p＋空载体组、miR-20a-5p＋KDM6B组，采用qRT-PCR检测各组细胞miR-20a-5p和KDM6B mRNA表达水平，蛋白质印迹法检测KDM6B蛋白的表达水平，CCK-8法、细胞划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。按照随机数字表法将裸鼠分为NC＋空载体组、miR-20a-5p＋空载体组和miR-20a-5p＋KDM6B组，每组各5只，采用裸鼠移植瘤模型检测肿瘤细胞的生长能力。结果骨肉瘤组织中miR-20a-5p mRNA相对表达量为0.55±0.27，癌旁组织为1.22±0.28，差异具有统计学意义(t＝7.701，P<0.001)；骨肉瘤组织中KDM6B mRNA相对表达量为1.66±0.19，癌旁组织为1.00±0.15，差异具有统计学意义(t＝12.219，P<0.001)。转染miR-20a-5p后，KDM6B mRNA和蛋白表达水平均随miR-20a-5p表达水平的升高而降低。转染miR-20a-5p 48 h后，空白对照组、mimic NC组、miR-20a-5p mimic组细胞增殖能力分别为0.83±0.04、0.81±0.03、0.52±0.01(F＝89.655，P<0.001)，与空白对照组、mimic NC组相比，miR-20a-5p mimic组均受到明显抑制(均P<0.001)；NC＋空载体组、miR-20a-5p＋空载体组、miR-20a-5p＋KDM6B组细胞增殖能力分别为0.83±0.05、0.52±0.01、0.67±0.05(F＝43.919，P<0.001)，与NC＋空载体组相比，miR-20a-5p＋空载体组受到明显抑制(P<0.001)，与miR-20a-5p＋空载体组相比，miR-20a-5p＋KDM6B组显著增强(P<0.001)。空白对照组、mimic NC组、miR-20a-5p mimic组划痕愈合率分别为(32.51±2.73)%、(30.26±3.22)%、(13.52±1.77)%(F＝46.314，P<0.001)，与空白对照组、mimic NC组相比，miR-20a-5p mimic组均显著降低(均P<0.001)；NC＋空载体组、miR-20a-5p＋空载体组、miR-20a-5p＋KDM6B组划痕愈合率分别为(31.34±3.11)%、(12.15±1.64)%、(28.93±2.89)%(F＝47.511，P<0.001)，与NC＋空载体组相比，miR-20a-5p＋空载体组显著降低(P<0.001)，与miR-20a-5p＋空载体组相比，miR-20a-5p＋KDM6B组显著增强(P＝0.001)。空白对照组、mimic NC组、miR-20a-5p mimic组穿膜细胞数分别为114±16、108±11和42±6(F＝36.282，P<0.001)，与空白对照组、mimic NC组相比，miR-20a-5p mimic组均显著减少(均P<0.001)；NC＋空载体组、miR-20a-5p＋空载体组、miR-20a-5p＋KDM6B组穿膜细胞数分别为143±11、39±4、139±12(F＝112.120，P<0.001)，与NC＋空载体组相比，miR-20a-5p＋空载体组显著减少(P<0.001)，与miR-20a-5p＋空载体组相比，miR-20a-5p＋KDM6B组显著增多(P<0.001)。NC＋空载体组、miR-20a-5p＋空载体组、miR-20a-5p＋KDM6B组小鼠第21天肿瘤体积分别为(1 667.50±250.40)mm3、(129.20±21.00)mm3、(775.41±77.51)mm3，差异具有统计学意义(F＝77.651，P<0.001)；3组小鼠肿瘤重量分别为(1.35±0.18)g、(0.12±0.01)g、(0.61±0.03)g，差异具有统计学意义(F＝104.191，P<0.001)。结论miR-20a-5p在骨肉瘤组织中表达显著下降，KDM6B在骨肉瘤组织中表达显著升高，过表达miR-20a-5p可能通过靶向降低KDM6B的表达来抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移、侵袭及肿瘤生长能力。

简介：摘要目的探讨吉非替尼敏感与耐药非小细胞肺癌(NSCLC)患者miR-200c、miR-19a、miR-155表达差异，并分析miR-200c、miR-19a、miR-155表达差异对患者预后的影响。方法选取2015年8月1日至2019年8月1日南京医科大学第四附属医院采用吉非替尼治疗的80例Ⅲ～Ⅳ期NSCLC患者作为研究对象，其中吉非替尼敏感患者36例，作为敏感组，吉非替尼耐药患者44例，作为耐药组。比较两组患者一般资料、血清miR-200c、miR-19a、miR-155水平，探究NSCLC患者吉非替尼敏感影响因素及血清miR-200c、miR-19a、miR-155与NSCLC患者临床病理特征的相关性。分析患者生存情况。结果与耐药组比较，敏感组患者吸烟例数较少(χ2＝5.541，P＝0.019)、临床分期Ⅲ期例数较多(χ2＝8.984，P＝0.003)、分化程度高分化例数较多(χ2＝8.673，P＝0.003)、淋巴结转移例数较少(χ2＝6.082，P＝0.014)、血清miR-200c、miR-19a、miR-155水平均较高(t＝7.249，P<0.001；t＝8.222，P<0.001；t＝10.467，P<0.001)。多因素logistic回归分析显示，吸烟(OR＝0.355，95%CI为0.149～0.845，P<0.001)、临床分期(OR＝0.494，95%CI为0.274～0.892，P＝0.021)、分化程度(OR＝6.062，95%CI为3.258～11.279，P＝0.013)、淋巴结转移(OR＝0.422，95%CI为0.245～0.726，P＝0.019)、血清miR-200c(OR＝5.521，95%CI为3.126～9.752，P<0.001)、miR-19a(OR＝5.384，95%CI为2.947～9.836，P<0.001)、miR-155(OR＝5.325，95%CI为3.058～9.274，P<0.001)水平均为NSCLC患者吉非替尼敏感的影响因素。血清miR-200c、miR-19a、miR-155水平与NSCLC患者临床分期(t＝3.230，P＝0.002，r＝-0.578；t＝3.188，P＝0.002，r＝-0.612；t＝3.123，P＝0.003，r＝-0.594)、分化程度(t＝2.586，P＝0.012，r＝0.610；t＝4.009，P<0.001，r＝0.632；t＝4.773，P<0.001，r＝0.594)、淋巴结转移(t＝2.902，P＝0.005，r＝-0.587；t＝3.721，P<0.001，r＝-0.629；t＝3.391，P＝0.001，r＝-0.614)均显著相关。与miR-200c、miR-19a、miR-155低水平患者比较，miR-200c(63.19% vs. 4.37%，χ2＝32.562，P<0.001)、miR-19a(61.01% vs. 4.75%，χ2＝37.807，P<0.001)以及miR-155(57.82% vs. 0，χ2＝44.454，P<0.001)高水平患者1年生存率均较高，差异均有统计学意义。结论血清miR-200c、miR-19a、miR-155水平在吉非替尼敏感NSCLC患者中明显升高，是吉非替尼敏感的重要影响因素，且与NSCLC患者临床分期、分化程度、淋巴结转移密切相关，血清高水平患者预后较好。

简介：摘要目的探讨miR-20a/106b在儿童脑干胶质瘤(BSG)恶性进展中的作用及其机制。方法回顾性纳入2012年1月至2017年12月天津市环湖医院(天津市脑系科中心医院)神经外科接受手术切除的13例儿童BSG患者和5例成人BSG患者。采用免疫组织化学染色法检测肿瘤组织标本中自然杀伤细胞2家族成员D(NKG2D)配体MICA的表达情况，采用生物信息学方法筛选出调控MICA的miRNA。应用人脑胶质瘤LN229和U251细胞株通过荧光素酶报告基因方法验证筛选出的miRNA与MICA的靶向调控关系，通过蛋白质免疫印迹(WB)实验检测miR-20a/106b转染LN229和U251细胞株后MICA的表达情况，通过乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测免疫细胞对LN229细胞株的毒性能力。通过向去胸腺幼年(3周龄)和成年(10周龄)雄性SD大鼠脑桥区立体定向注射LN229细胞株的方法制备BSG幼鼠(J-rat)和成年鼠(A-rat)模型，并根据注射细胞株不同各分为3组，依次为J-rat组、J-rat-scr组、J-rat-miR-20a/106b-d组和A-rat组、A-rat-scr组、A-rat-miR-20a/106b-u组(每组各3只)，通过免疫组织化学染色方法检测MICA的表达情况，采用MCID软件检测肿瘤的侵袭性，采用TUNEL法检测细胞凋亡。结果成人患者的MICA总阳性表达率较儿童患者高(分别为5/5、10/13，P<0.05)。检索结果显示，有23个可能调控MICA的microRNA，其中包括miR-20a和miR-106b。在LN229细胞株中，荧光素酶报告基因结果显示，转染pGL3-MICA-wt(野生型)质粒的荧光强度较对照组和转染pGL3-MICA-mut(突变型)质粒的强(均P<0.05)；WB结果显示，与空白对照组和无义序列组比较，AS-miR-20a组、AS-miR-106b组及AS-miR-20a/106b组MICA的表达均增加(均P<0.05)。上述实验在U251细胞株得到相似的结果。不同效靶比(20 ∶1，10 ∶1，5 ∶1)情况下，AS-miR-20a/106b组LDH的活性高于对照组和AS-miR-20a/106b＋ MICA mAb组(均P<0.05)，但后两组的差异无统计学意义(均P>0.05)。术后头颅MRI结果显示，3组幼鼠和3组成年鼠均成功制备脑干胶质瘤模型。MCID软件检测结果显示，J-rat-miR-20a/106b-d组I值较J-rat组、J-rat-scr组均降低(均P<0.05)；A-rat-miR-20a/106b-u组I值较A-rat组、A-rat-scr组均增加(均P<0.05)。免疫组织化学染色结果显示，J-rat-miR-20a/106b-d组的MICA染色强度均较J-rat组和J-rat-scr组增加(均P<0.05)，A-rat-miR-20a/106b-u组MICA的染色强度均较A-rat组和A-rat-scr组降低(均P<0.05)。体内凋亡实验显示，J-rat-miR-20a/106b-d组的细胞凋亡指数均较J-rat组和J-rat-scr组增加(均P<0.05)，A-rat-miR-20a/106b-u组的细胞凋亡指数较A-rat组和A-rat-scr组均降低(均P<0.05)。结论miR-20a/106b通过NKG2D途经达到的免疫逃逸是导致儿童型BSG恶性度高的重要原因。

简介：摘要目的探讨miR-20a/106b在儿童脑干胶质瘤(BSG)恶性进展中的作用及其机制。方法回顾性纳入2012年1月至2017年12月天津市环湖医院(天津市脑系科中心医院)神经外科接受手术切除的13例儿童BSG患者和5例成人BSG患者。采用免疫组织化学染色法检测肿瘤组织标本中自然杀伤细胞2家族成员D(NKG2D)配体MICA的表达情况，采用生物信息学方法筛选出调控MICA的miRNA。应用人脑胶质瘤LN229和U251细胞株通过荧光素酶报告基因方法验证筛选出的miRNA与MICA的靶向调控关系，通过蛋白质免疫印迹(WB)实验检测miR-20a/106b转染LN229和U251细胞株后MICA的表达情况，通过乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测免疫细胞对LN229细胞株的毒性能力。通过向去胸腺幼年(3周龄)和成年(10周龄)雄性SD大鼠脑桥区立体定向注射LN229细胞株的方法制备BSG幼鼠(J-rat)和成年鼠(A-rat)模型，并根据注射细胞株不同各分为3组，依次为J-rat组、J-rat-scr组、J-rat-miR-20a/106b-d组和A-rat组、A-rat-scr组、A-rat-miR-20a/106b-u组(每组各3只)，通过免疫组织化学染色方法检测MICA的表达情况，采用MCID软件检测肿瘤的侵袭性，采用TUNEL法检测细胞凋亡。结果成人患者的MICA总阳性表达率较儿童患者高(分别为5/5、10/13，P<0.05)。检索结果显示，有23个可能调控MICA的microRNA，其中包括miR-20a和miR-106b。在LN229细胞株中，荧光素酶报告基因结果显示，转染pGL3-MICA-wt(野生型)质粒的荧光强度较对照组和转染pGL3-MICA-mut(突变型)质粒的强(均P<0.05)；WB结果显示，与空白对照组和无义序列组比较，AS-miR-20a组、AS-miR-106b组及AS-miR-20a/106b组MICA的表达均增加(均P<0.05)。上述实验在U251细胞株得到相似的结果。不同效靶比(20 ∶1，10 ∶1，5 ∶1)情况下，AS-miR-20a/106b组LDH的活性高于对照组和AS-miR-20a/106b＋ MICA mAb组(均P<0.05)，但后两组的差异无统计学意义(均P>0.05)。术后头颅MRI结果显示，3组幼鼠和3组成年鼠均成功制备脑干胶质瘤模型。MCID软件检测结果显示，J-rat-miR-20a/106b-d组I值较J-rat组、J-rat-scr组均降低(均P<0.05)；A-rat-miR-20a/106b-u组I值较A-rat组、A-rat-scr组均增加(均P<0.05)。免疫组织化学染色结果显示，J-rat-miR-20a/106b-d组的MICA染色强度均较J-rat组和J-rat-scr组增加(均P<0.05)，A-rat-miR-20a/106b-u组MICA的染色强度均较A-rat组和A-rat-scr组降低(均P<0.05)。体内凋亡实验显示，J-rat-miR-20a/106b-d组的细胞凋亡指数均较J-rat组和J-rat-scr组增加(均P<0.05)，A-rat-miR-20a/106b-u组的细胞凋亡指数较A-rat组和A-rat-scr组均降低(均P<0.05)。结论miR-20a/106b通过NKG2D途经达到的免疫逃逸是导致儿童型BSG恶性度高的重要原因。

简介：摘要目的探讨miR-125b对宫颈癌细胞放射敏感性的影响及其可能的下游机制研究。方法实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time PCR，RT-qPCR)检测宫颈癌组织和细胞中miR-125b和Foxp3的表达量。HeLa细胞进行梯度剂量X射线(0、2、4、6 Gy)照射后，RT-qPCR检测HeLa细胞中miR-125b和Foxp3的表达量。下调miR-125b表达，经6 Gy X射线照射，MTT试验检测HeLa细胞增殖能力，Western blot检测Bax和Bcl-2蛋白表达量。通过Targetscan和双荧光素报告基因实验检测miR-125b与Foxp3的靶向关系。下调Foxp3表达，经6 Gy X射线照射，MTT试验检测HeLa细胞增殖能力，Western blot检测Bax和Bcl-2蛋白表达量。检测miR-125b通过Foxp3对HeLa细胞放射敏感性的影响。下调Foxp3后通过ELISA检测细胞上清液中IL-10和TGF-β的含量。结果宫颈癌组织和细胞中miR-125b的表达量显著降低，Foxp3表达量显著升高，miR-125b的表达量随着X射线放射剂量增加而升高，Foxp3表达量随着X射线放射剂量增加而降低。6 Gy X射线照射HeLa细胞后，下调miR-125b提高细胞增殖能力，使Bax表达量明显降低，Bcl-2表达量明显升高。miR-125b靶向Foxp3且负调控Foxp3表达。6 Gy X射线照射细胞后，下调Foxp3可显著降低HeLa细胞增殖能力，使Bax表达量明显升高，Bcl-2表达量明显降低。过表达miR-125b能够通过Foxp3增强HeLa细胞的放射敏感性。6 Gy X射线照射细胞后，下调Foxp3降低了细胞中IL-10和TGF-β的表达。结论上调miR-125b通过靶向和负调控Foxp3，从而增强宫颈癌细胞的放射敏感性，且作用机制可能与下调Foxp3使细胞中IL-10和TGF-β的表达减少有关。