简介:摘要目的探讨kindlin-1对神经病理性疼痛大鼠脊髓星形胶质细胞活化的影响。方法雄性SD大鼠18只,体重250~280 g,10~12周龄,采用随机数字表法将其分为3组(每组6只):假手术组(S组)、神经病理性疼痛组(NP组)和kindlin-1抑制组(K组)。采用坐骨神经慢性压迫法建立大鼠神经病理性疼痛模型,S组大鼠仅暴露坐骨神经不进行结扎。K组大鼠于术前21 d鞘内注射短发夹RNA (short hairpin RNA, shRNA)抑制kindlin-1表达,S组和NP组大鼠于术前21 d鞘内注射空载病毒进行对照。分别于术前1 d及术后1、4、7、10、13 d时测定机械刺激缩足反射阈值(paw withdrawal mechanical threshold, PWMT)和热刺激缩足反射潜伏期(paw withdrawal thermal latency, PWTL)。于术后13 d痛阈测定结束后处死大鼠取脊髓组织,采用免疫荧光双染标定kindlin-1与星形胶质细胞表达情况,Western blot法测定脊髓内kindlin-1的表达。结果与S组比较,NP组大鼠术后4、7、10、13 d时PWMT降低、PWTL缩短,脊髓内kindlin-1蛋白表达上调,kindlin-1的光密度(D)值增加,星形胶质细胞活化率升高(P<0.05);与NP组比较,K组术后4、7、10、13 d时PWMT升高、PWTL延长,脊髓内kindlin-1表达下调,kindlin-1的D值减少,星形胶质细胞活化率降低(P<0.05)。结论kindlin-1参与了神经病理性疼痛大鼠脊髓内星形胶质细胞的活化过程。
简介:摘要目的探讨大鼠神经病理性痛时长链非编码RNA(lncRNA)与kindlin-1/Wnt3a信号通路的关系。方法实验Ⅰ 7日龄SD大鼠,体重15~20 g,雌雄不拘,断头处死后取脊髓背角,提取并培养原代星形胶质细胞,加入LPS 1 μg/ml诱导星形胶质细胞活化24 h。采用PCR免疫共沉淀法筛选与kindlin-1结合的lncRNA,采用荧光原位杂交法观察星形胶质细胞中lncRNA FOXF1-AS1的定位,采用生物素标记磁珠法检测lncRNA FOXF1-AS1与kindlin-1的结合情况。实验Ⅱ 清洁级健康雄性SD大鼠30只,体重250~280 g,10~12周龄,采用随机数字表法分为5组(n=6):假手术对照组(C组)、神经病理性痛组(NP组)、lncRNA FOXF1-AS1过表达组(F组)、lncRNA FOXF1-AS1过表达+kindlin-1 shRNA组(FK组)和lncRNA FOXF1-AS1过表达+Wnt抑制剂组(FW组)。采用坐骨神经慢性压迫法建立大鼠神经病理性痛模型。F组于术前28 d时鞘内注射lncRNA FOXF1-AS1过表达慢病毒10 μl,其余各组鞘内注射空载病毒10 μl;FK组于术前21 d时鞘内注射kindlin-1 shRNA干扰腺病毒10 μl,其余各组鞘内注射空载病毒10 μl;FW组于术后1~3 d时鞘内注射Wnt抑制剂IWP-2 10 μl,其余各组于相同时点鞘内注射人工脑脊液10 μl。分别于术前1 d、术后4和7 d时测定机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)。于术后7 d时痛阈测定结束后处死大鼠取脊髓组织,采用Western blot法检测kindlin-1、Wnt3a和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达,采用ELISA法检测TNF-α和IL-1β含量。结果实验Ⅰ 表达于星形胶质细胞胞浆内的lncRNA FOXF1-AS1与kindlin-1具有结合作用。实验Ⅱ 与C组比较,NP组术后4和7 d时MWT降低,TWL缩短,脊髓kindlin-1、Wnt3a和GFAP表达上调,TNF-α和IL-1β含量升高(P<0.05);与NP组比较,F组术后4和7 d时MWT降低,TWL缩短,脊髓kindlin-1、Wnt3a和GFAP表达上调,TNF-α和IL-1β含量升高,FK组和FW组术后4和7 d时MWT升高,TWL延长,脊髓TNF-α和IL-1β含量降低,FK组脊髓kindlin-1、Wnt3a和GFAP表达下调,FW组脊髓kindlin-1上调,Wnt3a和GFAP表达下调(P<0.05);与F组比较,FK组和FW组术后4和7 d时MWT升高,TWL延长,脊髓TNF-α和IL-1β含量降低,FK组脊髓kindlin-1、Wnt3a和GFAP表达下调,FW组脊髓Wnt3a和GFAP表达下调(P<0.05)。结论lncRNA FOXF1-AS1可通过上调kindlin-1表达,激活Wnt3a信号通路,促进星形胶质细胞活化,进而调控炎症反应,参与大鼠神经病理性痛的过程。
简介:摘要目的评价大鼠神经病理性痛时脊髓kindlin-1/Wnt3a信号通路与炎症反应的关系。方法清洁级健康雄性SD大鼠24只,10~12周龄,体重250~280 g,采用随机数字表法分为4组(n=6):假手术组(SH组)、神经病理性痛组(NP组)、kindlin-1 shRNA组(K组)和Wnt3a抑制组(W组)。采用慢性坐骨神经压迫法建立小鼠神经病理性痛模型。于术前21 d时K组鞘内注射kindlin-1 shRNA腺病毒载体10 μl,SH组、NP组和W组鞘内注射病毒空载体10 μl。于术后1~3 d时W组鞘内注射Wnt抑制剂IWP-2 10 μl,SH组、NP组和K组鞘内注射人工脑脊液10 μl。分别于术前1 d、术后4和7 d时测定机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)。术后7 d痛阈测定结束后,处死大鼠取L4-6脊髓组织,采用ELISA法测定TNF-α和IL-1β含量,采用Western blot法检测kindlin-1和Wnt3a表达。结果与SH组比较,NP组、K和W组术后4和7 d时MWT降低,TWL缩短,脊髓TNF-α和IL-1β含量升高,NP组和W组脊髓kindlin-1和Wnt3a表达上调,K组脊髓Wnt3a表达上调(P<0.05);与NP组比较,K组和W组术后4和7 d时MWT升高,TWL延长,K组脊髓TNF-α和IL-1β含量降低,kindlin-1和Wnt3a表达下调,W组脊髓TNF-α和IL-1β含量降低,Wnt3a表达下调(P<0.05),kindlin-1表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论脊髓kindlin-1通过上调Wnt3a的表达,进而调控炎症反应,参与大鼠神经病理性痛的维持。
简介:摘要目的评价c-CBL过表达对神经病理性痛大鼠脊髓星形胶质细胞活化的影响及其与Kindlin-1的关系。方法清洁级健康雄性SD大鼠18只,10~12周龄,体重250~280 g,采用随机数字表法分为3组(n=6):假手术组(S组)、神经病理性痛组(NP组)和c-CBL过表达组(c-CBL组)。采用坐骨神经慢性压迫性损伤法制备大鼠神经病理性痛模型。于制备模型前1 d时c-CBL组鞘内注射c-CBL过表达载体10 μl,S组和NP组鞘内注射空载载体10 μl。分别于制备模型前1 d(T0)、制备模型1、4和7 d(T1~3)时测定大鼠机械缩足反应阈和热缩足反应阈。T3时痛阈测定结束后处死大鼠取L4~6脊髓,采用Western blot法检测脊髓Kindlin-1、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、TNF-α和IL-Iβ的表达。采用免疫共沉淀法检测Kindlin-1与c-CBL共表达情况。结果与S组比较,NP组和c-CBL组T2,3时机械缩足反应阈降低,热缩足反应阈缩短,NP组脊髓Kindlin-1、GFAP、TNF-α和IL-1β表达、c-CBL组脊髓c-CBL表达上调(P<0.05);与NP组比较,c-CBL组T2,3时机械缩足反应阈升高,热缩足反应阈延长,c-CBL组背髓Kindlin-1、GFAP、TNF-α和IL-1β表达下调,c-CBL表达上调(P<0.05)。免疫共沉淀结果显示:NP组Kindlin-1与c-CBL存在蛋白交互共表达。与NP组比较,c-CBL组脊髓Kindlin-1与c-CBL共表达增强。结论c-CBL过表达可通过下调脊髓Kindlin-1表达,抑制星形胶质细胞活化,进而减轻炎症反应,缓解大鼠神经病理性痛。
简介:摘要目的探索剪切波弹性成像(SWE)和Kindlin-2用来判断乳腺结节纤维化程度的价值。方法选取2016年9月至12月于解放军总医院第一医学中心就诊的102例乳腺结节患者,共102个结节,每例患者在手术或粗针穿刺前均行SWE检查。取得的组织进行天狼猩红染色和免疫组织化学染色检测胶原纤维和Kindlin-2水平。依据病理结果分为良性(64例共64个结节:43例纤维腺瘤、11例腺病和10例导管内乳头状瘤)和恶性(38例共38个结节:均为浸润导管乳腺癌)2组。2组间SWE指标(Emax、Emean和Emin)、胶原纤维和Kindlin-2表达水平的比较采用t检验,应用受试者操作特征曲线分析Emax和Emean的诊断效能,所有乳腺结节中胶原纤维强度和Kindlin-2表达水平与SWE指标的相关性用Pearson相关分析。结果浸润性导管癌的Emax、Emean、胶原纤维和Kindlin-2表达明显高于乳腺良性结节,差异均有统计学意义[(139.74±98.77)kPa vs(35.42±19.42)kPa,(65.91±60.71)kPa vs(18.29±13.83)kPa,80.25±8.51 vs 30.77±5.32,231.77±4596.01 vs 885.75±417.77;t=9.830、7.196、36.17、14.3,P均<0.05]。Emax与Emean值诊断恶性结节的最佳截断值是55.86 kPa和20.40 kPa,敏感度分别为83.30%和72.20%,特异度分别为88.90%和77.80%。胶原纤维强度、Kindlin-2表达均与Emax呈正相关(r=0.89、0.88,P均<0.001),但是与Emean无相关性。结论Emax、Kindlin-2和胶原纤维水平与乳腺结节恶性程度有关,SWE与Kindlin-2结合可判断乳腺结节纤维化程度,可用于诊断浸润性导管癌。
简介:你知道不莱梅吗?噢——它是一个美丽快乐的地方。不莱梅在哪儿呢?噢——有梦想的地方就有不莱梅。没错儿,不莱梅这个地方,早就存在于“很久很久以前”的童话里了……