简介:目的:利用昆虫细胞表达系统真核表达并纯化小电导钙激活钾离子通道蛋白1(KCNN1)。方法:以基因重组方法构建杆状病毒穿梭质粒reBacmid-KCNN1,将其转染至杆状病毒/Sf9细胞表达系统表达目的蛋白,并用Western印迹鉴定KCNN1的表达水平;用Ni-IDA-SepharoseCL-6B亲和层析柱纯化裂解细胞上清中的KCNN1,并用Western印迹鉴定纯化结果。结果:KCNN1在Sf9细胞中高效表达,通过亲和层析获得了纯化的KCNN1。结论:膜蛋白KCCN1在昆虫细胞Sf9中的表达与纯化,为深入研究其分子生物学功能提供了材料,也为全长膜蛋白的体外表达提供了一套可借鉴的实验方法。
简介:Humanμ-opioidreceptor(HμOR)withatagofsixconsecutivehistidinesatitscarboxylterminushasbeenexpressedinrecombinantbaculovirusinfectedSf9insectcells.Themaximalbindingcapacityforthe[^3H]diprenorphineand[^3H]ohmefentanyl(Ohm)were9.1±0.7and6.52±0.23nmol/gprotein,respectively.The[^3H]diprenorphineor[^3H]OhmbindingtothereceptorexpressedinSf9cellswasstronglyinhibitedbyμ-selectiveagonists[D-Ala^2,N-methyl-Phe^4,glyol^5]enkephalin(DAGO),Ohm,andmorphine,butneitherbyδnorbyκselectiveagonist.Na^+(100mM)andGTP(50μM)couldreduceHμORagonistsetorphineandOhmaffinitybindingtotheoverexpressedHμOR.μ-selectiveagonistsDAGOandOhmeffectivelystimulated[^35S]GTPγSbinding(EC50=2.7nMand6.9nM)andinhibitedforskolin-stimulatedcAMPaccumulation(IC50=0.9nMand0.3nM).Theagonist-dependenteffectscouldbeblockedbyopioidantagonistnaloxoneorbypretreatmentofcellswithpertussistoxin(PTX).TheseresultsdemonstratedthatHμORoverexpressedinSf9insectcellsfunctionallycoupledtoendogenousCi/oproteins.
简介:目的检测HighFive昆虫细胞系对BALB/c裸鼠致瘤性情况,以确保其作为疫苗生产细胞株的安全性。方法将裸鼠随机分为5组,分别为HighFive基础细胞库细胞试验组、HighFive最高限制代次细胞试验组、HEp-2细胞阳性对照组、CEF细胞阴性对照组和不作任何处理的空白对照组,用细胞悬液背部皮下接种裸鼠。3周和12周后对裸鼠解剖及病理组织学检查,其是否有肿瘤形成。结果阳性对照HEp-2细胞组裸鼠接种后3周注射部位形成结节,病理组织学检查为鳞状细胞癌;阴性对照CEF细胞组和HighFive细胞组均无结节形成,接种后12周经解剖用病理组织学检查,均无肿瘤形成。结论基础代次和最高限制代次HighFive细胞均不具有致瘤性,可安全地应用于疫苗生产。
简介:负子负子。背负孩子。负子背上的“小馒头”是它的儿女们。雌虫把蛋蛋生在雄虫背上,排得整整齐齐,雄虫就背着这些卵宝宝,直至它们破壳降生为止。负子是水生昆虫,雄虫常背着雌虫四处游走(也许是旅游),“夫妻”俩形影不离。