简介:摘要利用在原核生物中观察到的规律成簇的间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)与相关的Cas(CRISPR- associated proteins)蛋白构成CRISPR-Cas系统作为真核细胞中的基因编辑工具为近年研究热点。效应蛋白由多个Cas蛋白组成,包括两个大类五型系统。Cas蛋白结合特定的核酸序列,具有核酸酶的功能用于可编程基因组编辑和表观遗传调控,同时在疾病诊断方面也有很好的发展前景。其中Cas6是一种独立于金属的单转位酶,依附在crRNA裂解产物上,可识别并在crRNA转录前的重复序列中裂解单个磷酸二酯键。核糖核酸内切酶Cas9为RNA引导的DNA裂解酶,是目前应用最广泛的基因编辑工具,同时在感染性疾病检测、癌性病毒感染的消除或灭活、肿瘤免疫治疗、肿瘤基因组和表观基因组的调控等方面显示出巨大的应用前景。RNA引导的核酸内切酶Cas12a具有两种不同的核酸酶活性,且该双重催化活性已被用于多重基因编辑。Cas12a的显著特性使其应用于目标DNA与RNA快速检测,成为CRISPR-Cas基因组编辑工具包的补充。RNA引导的RNA靶向核酸内切酶Cas13a是RNA引导、RNA激活的RNA酶,已被开发为RNA检测、RNA成像和RNA调控的强大工具,同时利用Cas13a构建高灵敏度及特异度的检测方法也可为感染性疾病在诊断过程中提供重要的理论依据。由此展开对CRISPR-Cas系统相关的Cas蛋白的深入研究,同时对上述系统在不同疾病中的重要应用等进行阐述,有助于为各项研究提供新思路,新方法。
简介:摘要目的基于重组酶介导的扩增技术(recombinase aided amplification,RAA)和CRISPR (clustered regularly interspaced short palindromic repeats)-Cas13a(CRISPR-associated protein 13a)检测,建立一种快速、灵敏且特异的重要境外输入性病毒检测方法。方法以流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)、黄热病毒(Yellow fever virus,YEV)、西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)、中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)、埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)、登革病毒(Dengue virus,DENV)、裂谷热病毒(Rift Valley fever virus,RVFV)、寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)为检测对象,设计特异性RAA扩增引物和CRISPR RNA(crRNA),建立RAA扩增结合CRISPR-Cas13a蛋白检测反应,评价方法的灵敏度和特异性,使用登革热疑似临床样本进行检测,并与荧光RT-PCR技术进行比较,同时检测其余7种病毒临床模拟样本。结果RAA扩增结合CRISPR-Cas13a蛋白检测方法能在39 ℃条件下,40~52 min内检测出8种输入性传染病病原体,灵敏度达到1~10拷贝/μl,并且这8种病原体之间无交叉反应,临床样本均可100%检测出。结论建立的RAA扩增结合CRISPR-Cas13a蛋白检测方法能够灵敏、特异且快速地检测出8种境外输入性传染病病原体。
简介:基因治疗是为网膜的退化疾病的潜在地有效的治疗。定期聚类interspaced短palindromic重复(CRISPR)/CRISPR-associated蛋白质9(Cas9)系统在眼的研究作为一个新编辑染色体的工具被开发了。在研究的最近的进展证明CRISPR/Cas9在在视网膜炎pigmentosa(RP)和leber的vivo产生动物模型以及基因治疗被使用了先天的黑(LCA)。它被与象联系adeno的病毒(AAV)那样的另外的技术结合也为诊所作为一次潜在的尝试显示出并且导致pluripotent干细胞(iPSCs)。在这评论,我们加亮在指向网膜的退化使用CRISPR/Cas9的进一步的前景的主要的点。我们也在治疗网膜的退化疾病强调这种技术的潜在的应用程序。
简介:CRISPR/CAS系统,原核生物,尤其是细菌的免疫系统,在抵抗外源性遗传物质如噬菌体病毒和外源质粒的入侵中起着一定的作用。也为其提供了后天免疫的功能,类似于哺乳动物的二次免疫。当细菌被病毒或外源性质粒入侵时,它们产生"记忆",从而抵御反复入侵。本文就CRISPR/Cas免疫方面的功能与进展进行了大致的概括。
简介:有效教学已经成为深入人心的教学理念和教学研究的重要主题,但在有效教学的设计和实践中却暴露了不少问题和隐忧.基于复杂适应系统(CAS)理论,探讨提出能解决上述问题和隐忧的有效教学方式——“团队适应性竞争”教学法,并通过数学教学实践中的性质或公式探究型教学以及问题解决型教学这两类教学的案例进行说明.该教学法的提出,意在对新课改能够更好地实施和发展起到“抛砖引玉”的作用.
简介:Precisebaseeditingishighlydesiredinplantfunctionalgenomicresearchandcropmolecularbreeding.Inthisstudy,weconstructedarice-codonoptimizedadeninebaseeditor(ABE)-nCas9toolthatinducedtargetedA·TtoG·Cpointmutationofakeysinglenucleotidepolymorphismsiteinanimportantagriculturalgene.Combinedwiththemodifiedsingle-guideRNAvariant,ourplantABEtoolcanefficientlyachieveadeninebaseeditinginthericegenome.
简介:Differentfluxeswereusedtosynthesizelongpersistencephosphors,calciumsulfidesactivatedbyEu2+andTm3+,byconvenientsolid-statemethod.ThephosphorusingNH4Fasafluxhasgoodcrystallinityandlargeparticlesize,itsstabilityagainstwaterandotheratmosphericcomponentsisenhanced,anditsafterglowislongerandfluorescentintensityismoreintensethanthoseofthephosphorusingNH4Clasflux.TheirPLintensitiesvariedwithtimeinmoistairweremeasured,noremarkablechangewasfoundforthosepreparedwithNH4FfluxincontrastwithNH4Clasflux.SousingNH4Fasfluxisagoodmethodtoenhancethestabilityofalkalineearthsulfides.
简介:设计习俗的核酸酶技术例如定期聚类短palindromic重复(CRISPR)联系了的interspaced(Cas)系统提供为昆虫编辑工具的吸引人的染色体功能的遗传。指向的基因mutagenesis由CRISPR/Cas9系统调停了在包括的几份昆虫订单被完成了双翅目,鳞翅目和翘目。然而,小成功都没在这些由于genomic信息和胚胎的microinjection技术的缺乏在农业害虫被报导昆虫种类。这里,我们报导CRISPR/Cas9系统在重要鳞翅类的害虫Spodopteralitura导致了有效基因mutagenesis。我们指向了S。litura腹A(Slabd--一)是重要胚胎的发展基因并且在决定昆虫的腹的片断的身份起一个重要作用的基因。指导Cas9送信人RNA和Slabd-A-specific单人赛领队RNA(sgRNA)的注射进S。成功地导致的litura胚胎典型abd--缺乏的显型,它在幼虫的阶段期间显示出异常分割和宫外的色素沉着。聚合酶链基于反应的分析表明Cas9/sgRNA建筑群有效地在S导致了指向的mutagenesis。litura。这些结果证明CRISPR/Cas9系统是为在象S那样的鳞翅类的害虫的染色体操作的一个强大的工具。litura。
简介:摘要目的构建跨膜蛋白超家族6成员2(Tm6sf2) E167K基因敲入小鼠模型。方法构建同时表达针对小鼠Tm6sf2基因特定位点的单链向导RNA Cas9的质粒和携带Tm6sf2 E167K片段的Donor质粒,将上述2质粒一起注射入小鼠受精卵,通过PCR检测和测序验证得到F0代阳性小鼠。统计F2代中野生(Wt)、杂合和敲入(KI)3种基因型小鼠的存活数量。选取F2代同窝Wt和KI雄性小鼠(8只/组)给予普通饮食8周,每周记录小鼠的体质量,检测两种小鼠葡萄糖代谢和脂质代谢等指标。组间比较采用独立样本t检验。结果基因型检测和测序结果表明Tm6sf2 E167K基因敲入小鼠模型建立成功。KI小鼠不存在胚胎纯合致死的表型。哺乳期内KI小鼠较Wt小鼠的体质量升高,两组差异有统计学意义(P < 0.05)。KI小鼠的空腹血糖(9.50±0.33)mmol/L较Wt小鼠的空腹血糖(7.80±0.30)mmol/L升高,两组差异有统计学意义(P < 0.05);KI小鼠的口服葡萄糖耐量试验2 h血糖(9.20±0.51)mmol/L较Wt小鼠的口服葡萄糖耐量试验2 h血糖(7.60±0.18)mmol/L升高,两组差异有统计学意义(P < 0.05)。KI小鼠的肝脏甘油三酯含量(8.40±0.55)mg/g较Wt小鼠的肝脏甘油三酯含量(7.30±0.63)mg/g升高,但差异无统计学意义(P < 0.05);两种小鼠的血浆甘油三酯水平差异无统计学意义(P > 0.05);肝脏油红O染色结果显示KI小鼠较Wt小鼠的肝小叶中央区有更多的脂质累积。结论Tm6sf2 E167K基因敲入小鼠构建成功。Tm6sf2 E167K基因敲入可引起小鼠葡萄糖代谢的异常,促进肝脏脂肪变性的发生。