简介:目的了解深圳市2002-2009年CRF01-AE亚型Env基因V3环变异特征。方法采用Nested-PCR扩增Env区,对扩增产物进行测序,利用MEGA软件进行基因序列整理和分析。结果从2002-2009年,深圳市CRF01-AE亚型Env基因离散率从9.09%增长至13.13%,呈逐年递增趋势;共发现10种V3环顶端四肽类型,其中主要类型为GPGQ(77.38%)、GPGR(16.32%),所有类型顶端四肽比例在各年份存在上下波动趋势;每个时间段都有至少91.00%毒株使用CCR5作为辅助受体,1.00%~9.00%毒株不能做出预测,没有可被预测为使用CXCR4为辅助受体的毒株。结论从2002-2009年深圳市CRF01-AE亚型病毒变异随流行时间不断加大;V3环顶端四肽类型中GPGR比例变化最大;深圳地区大部分CRF01-AE毒株为巨噬细胞嗜性。
简介:摘要目的分析整合酶(IN)区主要耐药突变对HIV-1 CRF01_AE毒株耐药的影响,并比较与B亚型毒株的差异。方法根据美国斯坦福大学HIV耐药数据库选择7个IN区突变或联合突变(T66K、F121Y、Q148K、N155H、G118R、R263K、Q148K/N155H),通过无缝克隆同源重组及点突变的方法引入到HIV-1 B亚型感染性克隆pNL4-3和CRF01_AE感染性克隆pGX002的IN区,转染293T细胞包装病毒,在MT2细胞上扩大培养并测定感染性滴度。检测4种整合酶链转移抑制剂(INSTIs),拉替拉韦(RAL)、埃替拉韦(EVG)、多替拉韦(DTG)、比昔格韦(BIC)对14株突变病毒的半抑制浓度(IC50)及其与野生型病毒相比提高的倍数。结果成功构建携带7个IN区突变或联合突变的B亚型和CRF01_AE质粒,包装获得14株重组病毒,感染性滴度为104~106半数组织细胞感染剂量(TCID50)/ml,在MT2细胞高效复制,上清液中HIV-1 P24抗原浓度可达830~2 700 ng/ml。5个突变或突变组合(T66K、F121Y、Q148K、N155H、Q148K/N155H)均可导致CRF01_AE和B亚型毒株对RAL和EVG高度耐药,与野生病毒相比IC50分别提高200倍和2 000倍以上,相同突变导致RAL和EVG对CRF01_AE的IC50提高的倍数均显著低于B亚型(P<0.01)。Q148K/N155H突变导致B亚型和CRF01_AE对DTG和BIC高度耐药,IC50提高50倍以上,其他突变对DTG和BIC的药物敏感性几乎无影响。结论构建了基于CRF01_AE和B亚型的14株携带不同INSTI耐药突变的HIV-1毒株,5个突变可导致对RAL和EVG的高水平交叉耐药,同一突变导致B亚型毒株耐药程度显著高于CRF01_AE毒株。Q148K和N155H突变组合可导致DTG和BIC的高度耐药,表明DTG和BIC耐药的遗传屏障高,可有效抑制携带INSTI耐药突变的毒株,且无明显的亚型耐药差异。
简介:摘要目的描述一株新鉴定的流行重组型HIV-1 CRF103_01B在北京的检出情况,并分析其近全长基因组(near full-length genome,NFLG)遗传特征。方法对2017—2020年北京新诊断或初始抗病毒治疗病例进行HIV-1基因型耐药监测,发现5例疑似感染CRF103_01B毒株。通过逆转录、近末端稀释法,分两段巢式PCR扩增HIV-1 NFLG。获得的序列与分型参考序列进行基因比对,使用MEGA11软件构建邻接法(neighbor-joining,NJ)系统进化树。用SimPlot 3.5软件分析确定基因重组断点,绘制基因组结构图。基于亲本毒株同源NFLG序列比对,挑选较长的重组片段构建NJ进化树,判断可能的亲本毒株来源。用斯坦福大学HIV耐药数据库解析基因型耐药特征。结果共获得5条CRF103_01B NFLG序列,其中4例经男男性行为(men who have sex with men,MSM)感染,1例为女性。与从河北检出的4条CRF103_01B NFLG序列合并分析其重组特征:在CRF01_AE骨架上,gag、pol和nef-3'-LTR基因片段被B亚型重组替换[HXB2 nt 1111±19 - 1539±16,2531 - 4478±16(片段Ⅴ),9008±23 - 9615]。亲本来源分析显示,CRF103_01B的片段Ⅳ与Ⅴ分别与北京B亚型(BJMP3294B)和g5簇CRF01_AE序列(JX112804)聚集成大单系进化簇(bootstrap值分别为97%和100%)。9个CRF103_01B病例均携带非核苷类逆转录酶抑制剂类V106I突变。结论CRF103_01B毒株最可能起源于北京MSM人群,并在北京和河北等地的MSM人群中低水平持续流行,并经异性性途径向一般人群播散。需加强该毒株分子流行病学和耐药监测,关注疾病进展。
简介:摘要目的了解我国HIV-1 CRF55_01B感染者抗病毒治疗前对蛋白酶类抑制剂(PI)、核苷类逆转录酶抑制剂(NRTIs)、非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTIs)、整合酶抑制剂(INSTIs)的耐药程度以及耐药株的传播关系。方法对2018年全国抗病毒治疗前HIV耐药监测中CRF55_01B重组亚型感染者的血浆样本提取RNA,分别扩增蛋白酶/逆转录酶(PR/RT)区基因片段1 056 bp和整合酶(IN)区基因片段846 bp并测序,利用美国斯坦福大学HIV db Program数据库中全部收录药物进行耐药判定,运用HIV-TRACE软件进行HIV-1耐药传播网络分析,并重点分析了CRF55_01B整合酶基因区遗传多态性位点的突变情况。结果共分析来自全国26个省的178份样本,获得CRF55_01B PR/RT区序列170条以及对应样本的IN区序列170条,总体耐药率为15.3%(26/170)。PIs、NRTIs、NNRTIs、INSTIs耐药率分别为1.2%(2/170)、1.2%(2/170)、15.3%(26/170)、0.6%(1/170);耐药水平多为低度耐药,NNRTIs类耐药位点主要是V179D/E与其他位点协同出现,另有84.1%(143/170)单独携带V179D/E的感染者表现为潜在耐药;INSTIs类耐药位点为G163R,对EVG和RAL表现为低度耐药。在0.9% 最适基因距离阈值下构建分子网络,入网率为30.0%(51/170),耐药株在男男同性传播人群和异性性传播人群之间传播,并且都携带耐药位点E138G和V179E。在整合酶区CRF55_01B与CRF01_AE和B亚型在5个位点突变频率差异较高(T215A、G134N、I135V)。结论我国CRF55_01B感染者抗病毒治疗前即对NNRTIs类药物耐药率较高,携带E138G和V179E耐药位点的毒株存在成簇传播,CRF55_01B整合酶抑制剂耐药株处于低水平流行,但整合酶基因区存在的高突变率的遗传性多态性位点对药物敏感性有潜在的影响,所以新型重组毒株耐药对我国抗病毒治疗的影响还需要进一步监测和分析。
简介:AIMTodeterminetheroleofcorticotropinreleasingfactorreceptor(CRF2)inepithelialpermeabilityandenterocytecelldifferentiation.METHODSForthispurpose,weusedratSpragueDawleyandvariouscoloncarcinomacelllines(SW620,HCT8R,HT-29andCaco-2celllines).ExpressionofCRF2proteinwasanalyzedbyfluorescentimmunolabelinginnormalratcolonandthenbywesternblotindissociatedcolonicepithelialcellsandinthelysatesofcoloncarcinomacelllinesorduringtheearlydifferentiationofHT-29cells(tenfirstdays).ToassesstheimpactofCRF2signalingoncoloniccelldifferentiation,HT-29andCaco-2cellswereexposedtoUrocortin3recombinantproteins(Ucn3,100nmol/L).Insomeexperiments,cellswerepre-exposedtotheastressin2b(A2b)aCRF2antagonistinordertoinhibittheactionofUcn3.Intestinalcelldifferentiationwasfirstanalyzedbyfunctionalassays:thetrans-cellularpermeabilityandthepara-cellularpermeabilityweredeterminedbyDextran-FITCintakeandmeasureofthetransepithelialelectricalresistancerespectively.Morphologicalmodificationsassociatedtoepithelialdysfunctionwereanalyzedbyconfocalmicroscopyafterfluorescentlabelingofactin(phaloidin-TRITC)andintercellularadhesionproteinssuchasE-cadherin,p120ctn,occludinandZO-1.Theestablishmentofmatureadherensjunctions(AJ)wasmonitoredbyfollowingthedistributionofAJproteinsinlipidraftfractions,afterseparationofcelllysatesonsucrosegradients.Finally,themRNAandtheproteinexpressionlevelsofcharacteristicmarkersofintestinalepithelialcell(IEC)differentiationsuchasthetranscriptionalfactorkrüppel-likefactor4(KLF4)orthedipeptidylpeptidaseIV(DPPIV)wereperformedbyRT-PCRandwesternblotrespectively.ThespecificactivitiesofDPPIVandalkalinephosphatase(AP)enzymesweredeterminedbyacolorimetricmethod.RESULTSCRF2proteinispreferentiallyexpressedinundifferentiatedepithelialcellsfromthecryptsofcolonandinhumancoloncarcinoma
简介:摘要:CRF顶盖排水系统投运至今发生过多次顶盖排水液位高,顶盖排水泵故障等一系列问题,由于顶盖水位过高可能导致下部油箱进水,导致油质乳化,这就影响了CRF系统的投运,影响机组的正常运行。本文对目前存在的问题进行探讨,并对问题提出了改进的建议。
简介:Therelationshipbetweentheauroralovalpattern,i.e.,location,size,shape,andintensity,andtheauroralelectrojetactivityindex(AEindex)isstudied.Itisfoundthatthemaximalauroralintensityisellipticallydistributed,andthelengthsofsemimajorandsemiminoraxesarepositivelycorrelatedtoAE.TheintensityalongthenormaloftheauroralovalcanbesatisfyinglydescribedbyaGaussiandistribution,andthemaximumandthefullwidthathalfmaximumoftheGaussiandistributionarebothpositivelycorrelatedtoAE.Basedonthesestatisticalresults,aseriesofexperimentalformulasasafunctionofAEaredevelopedtocalculatethelocation,size,shape,andintensityoftheauroraloval.TheseformulasarevalidatedbytheauroralimagesreleasedbySWPC/NOAA.
简介:继偏重商用领域的AP1900一体机后.微星又推出了主打家用娱乐领域的AE2010系列机型.其中.AE2010-T是具备触摸屏功能的产品,其售价相比不带触摸功能的AE2010高出1000元。AE2010-T采用20英寸的宽屏设计.屏幕分辨率为1600X900像素,虽然没有达到FullHD水准.但是已经超越不少一体机产品了。该机支持触摸屏操作.用户可以直接使用手指或是通过随机配备的触控笔操作,这样直观的操作方式令家中的老人和孩子也可以加入到使用电脑的行列中来.另外.在增强了触控操作功能的Windows7上市之后AE2010-T的触摸设计也具备很大的优势。