简介:目的:建立检测猪常见致病菌的反向斑点杂交方法。方法:将23SrRNA基因芯片用的针对12种细菌的25~30mer探针加长到30~38mer,2对通用引物序列不变。用地高辛标记下游引物,以尼龙膜为载体制备膜芯片,检验探针/膜杂交的特异性和敏感性;另外设计1条大肠杆菌K88基因探针、一段带K88探针的报告基因和1对报告基因的反向PCR引物,在PCR体系中增加封口的K88报告基因和反向引物对,被检样品扩增后进行膜杂交。结果:修改的13条探针与参考目标菌株在膜上成特异性杂交,对52个参考菌株和野外分离株的检测准确率为92%;膜杂交的敏感性与玻片芯片接近,最小检出量为100fgDNA;在尼龙膜上增加K88探针,与3重PCR产物杂交,可以检测到大肠杆菌K88毒力基因。结论:建立的反向斑点杂交方法简便快速,检测成本低,可用于仪器设备不足的实验室,同时可以加入检测如大肠杆菌K88等致病基因,提高基于保守基因的芯片的诊断能力。
简介:中草药作畜禽饲料添加剂,可充分利用天然资源,拓宽饲料添加剂原料来源,且可提高饲料利用率和畜禽的增重。随着我国畜牧业规模化饲养程度的不断提高和出口创汇畜牧业的迅猛发展,目前城乡兴起养猪热。为发挥中草药的优势,促进饲料工业发展,降低生产成本,增加社会、经济效益,我们自1992年以来研制出猪的催长防病中药饲料添加剂—“黄精散”,经试验,取得了较为满意的效果,现报告如下。材料与方法(一)试验猪的选择选自本村养猪场、出生日期相近的长白猪与土种猪杂交所产一代杂种60日龄断乳仔猪20头,这些仔猪均为健康无病且发育正常者。(二)“黄精散”猪催长防病饲料添加