简介:目的筛选一种既提高精子转染外源DNA效率,又保持解冻后精子活力的山羊精液冷冻—解冻方法。方法应用正交设计L9(3^4),因素分别为稀释液种类、稀释比例、降温时间和解冻液,每个因素选择3个水平,检测和比较解冻后精子转染外源DNA效率和精子活力。结果所选冷冻—解冻各因素对精液转染效率影响不显著[F(8,18)=1.032,P=0.449];平衡时间对冷冻—解冻活力影响极显著[F(2,24)=9.972,P=0.001],平衡1h极显著小于平衡2h和4h的精液活力(P=0.003,P=0.000),以平衡4h最好。用筛选的冷冻—解冻方法处理精液,解冻后精子的活力极明显降低(P=0.002);生存指数降低,GOT释放量增加,菌落数减少,与鲜精相比差异显著(P=0.018;P=0.016;P=0.018);精子畸形率增加,顶体完整率降低,与鲜精相比差异不显著(P=0.494;P=0.084)。结论优化了提高精子转染外源DNA效率的山羊精液冷冻—解冻方法。
简介:摘要:目的 通过对绒山羊精子冷冻保护技术的研究,探索影响冷冻效果的因素,并对相关的操作方法进行优化措施。方法 分别采用熏蒸法和程序法对绒山羊精子进行冷冻,选用不同体积的冷冻载体(1.8ml、0.5ml、0.25ml)。同时,也分别对原液、洗涤离心和梯度离心后的精液进行冷冻处理。结果 各种冷冻载体和冷冻方法对绒山羊精子冷冻前后的PR百分率和复苏率均有有影响。对于原液以及经过洗涤离心和梯度离心处理的精液,采用0.25ml冷冻载体的程序法冷冻呈现出最高的精子复苏率。对于熏蒸法冷冻精子,综合考虑,为体积为1.8ml的冷冻载体最适宜。结论 冷冻方法、冷冻载体的体积以及精液的处理方式是影响绒山羊精子冷冻效果的重要因素。通过优化这些因素,可以显著提高绒山羊精子的冷冻效果,进一步提高精子的复苏率。
简介:摘要:为筛选最适合长臀鮠精子超低温保存的冷冻保护剂,配制 5种不同种类的精子稀释液,以 7.5%DMSO(冻存剂为终浓度,下同)为精子冻存液,将精子分别保存于不同种类冷冻保护剂中,通过测定不同冷冻保护剂对精子激活率、快速运动时间和寿命的影响筛选适合长臀鮠精子超低温保存的最佳冷冻保护剂。结果显示,长臀鮠精子经过超低温保存 2周后,精子活性均显著降低,活力均不到鲜精的一半。 MPRS溶液作为稀释液保存效果最佳,其精子激活率、快速运动时间和寿命最高。研究表明, MPPRS溶液作为冷冻稀释液、 7.5%DMSO为冻存液可以较好的超低温保存长臀鮠精子。
简介:摘要目的通过meta分析方法评价使用精子库冷冻精液助孕出生的子代出生缺陷情况,为精液冷冻在辅助生殖中应用的安全性和可靠性提供科学依据。方法检索中国期刊全文数据库(CNKI)、万方数据库(Wanfang)、维普中文科技期刊数据库(VIP)、中国生物医学文献数据库(CBMDisc)及PubMed数据库截止至2019年10月1日所有收录的使用精子库冷冻精液行辅助生殖中有关子代出生缺陷的文献资料,严格按照纳入与排除标准筛选文献、提取资料,并根据STROBE声明中横断面研究评价标准进行文献质量评价。结果最终共纳入13篇文献,总样本量为33 398例,出生缺陷率为1.09%(95% CI=0.85%~1.32%),低于国家卫健委(原卫生部)发布的检测数据(1.53%,P<0.001)。供精人工授精(artificial insemination by donor,AID)组出生缺陷率为1.06%(95% CI=0.78%~1.35%),体外受精(in vitro fertilization,IVF)组为0.60%(95% CI=0.03%~1.22%),卵胞质内单精子注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)组为1.35%(95% CI=0.06%~2.75%),差异无统计学意义(P=0.785)。出生缺陷类别中,以循环系统先天性畸形发生率最高,其次为肌肉骨骼系统先天性畸形和变形、泌尿生殖系统先天性疾病等。结论使用精子库冷冻精液助孕未增加子代出生缺陷的风险,但受纳入研究的质量限制,上述结论尚需开展更多高质量研究予以验证。
简介:摘要目的对比载杆玻璃化冷冻法与程序冷冻法对人早期胚胎冷冻复苏的效果。方法收集并整理人早期胚胎冷冻复苏的相关资料,根据冷冻法的不同把他们分成研究组A和研究组B,研究组A采用载杆玻璃化冷冻法,研究组B采用程序冷冻法,周期数依次为122、64个。对比两组胚胎复苏的相关指标。结果研究组A的胚胎复苏率、胚胎完整率依次为97.1%、94.5%,研究组B依次为75.1%、70.8%,研究组A都比研究组B高;研究组A的胚胎丢失率的1.5%,研究组B是3.8%,研究组A比研究组B低,对比差异都较大(P<0.05)。研究组A的胚胎植入率、临床妊娠率分别是29.1%、59.8%,研究组B分别是18.0%、37.1%,研究组A都比研究组B高,对比差异较大(P<0.05)。结论载杆玻璃化冷冻法对人早期胚胎冷冻复苏的效果优于程序冷冻法,可明显提升胚胎植入率与妊娠率,更值得推广。
简介:【摘要】目的:探究分裂期胚胎冷冻中传统封闭式麦管(CPS)、开放式冷冻薄膜(Cryotop)、银质封闭式玻璃化冷冻系统(SSCVS)的冷冻保存效果。方法:2023年1月-2024年1月体外受精-胚胎移植(IVF-ET)助孕中由3原核(PN)发育的废弃的优质胚胎240个,随机分为CPS组(n=80)、Cryotop组(n=80)、SSCVS组(n=80),对比组间分裂期胚胎冷冻应用效果。结果:在胚胎冻融后存活率对比上,SSCVS组、Cryotop组高于CPS组,组对比差异显著(P<0.05),SSCVS组、Cryotop组差异不显著(P>0.05);在完整胚胎存活率对比上,SSCVS组、Cryotop组高于CPS组,组对比差异显著(P<0.05),SSCVS组、Cryotop组差异不显著(P>0.05)。结论:新型封闭式玻璃化冷冻系统SSCVS可以显著提高胚胎冻融后存活率与完整胚胎存活率,值得推荐。
简介:摘要目的探讨玻璃化冷冻和程序化冷冻对猕猴卵巢组织的冷冻保存效果。方法取新鲜的猕猴卵巢组织随机分成对照组(新鲜卵巢组织)、玻璃化冷冻组和程序化冷冻组,分别进行HE染色、窦前卵泡的分类计数及免疫染色,比较3组卵巢组织内卵泡形态学、各级卵泡正常率及磷酸化组蛋白H3(PHH3)的表达量的差异。结果①HE染色:3组中,始基卵泡、初级卵泡正常率差异均无统计学意义(P均>0.05);程序化冷冻组单层次级卵泡正常率[40.6%(28/69)]均低于玻璃化冷冻组[53.5%(38/71)]、对照组[60.7%(34/56)],3组间差异有统计学意义(P=0.044),但玻璃化冷冻组、对照组间差异无统计学意义(P>0.05);玻璃化冷冻组、程序化冷冻组多层次级卵泡正常率[23.4%(11/47),16.7%(7/42)]均明显低于对照组[57.3%(39/68)](P均<0.001),玻璃化冷冻组多层次级卵泡正常率高于程序化冷冻组,但差异无统计学意义(P>0.05)。②分离卵泡比较:玻璃化冷冻组、程序化冷冻组初级卵泡正常形态率均接近对照组,差异无统计学意义(P>0.05);玻璃化冷冻组和程序化冷冻组次级卵泡正常率[38.2%(34/89),23.7%(23/97)]明显较低,与对照组[56.4%(61/108)]比较差异均有统计学意义(P均<0.001);玻璃化冷冻组的次级卵泡正常形态率明显高于程序化冷冻组,差异有统计学意义(P<0.001);③ PHH3染色:玻璃化冷冻组颗粒细胞PPH3的阳性表达率接近对照组(P>0.05),程序化冷冻组卵泡颗粒细胞PHH3阳性表达率(58.72%±12.31%)明显低于对照组(67.58%±8.45%,P=0.04)和玻璃化冷冻组(62.87%±9.94%,P=0.03)。结论玻璃化冷冻和程序化冷冻均能有效地保存卵巢组织,但玻璃化冷冻对卵巢组织冷冻和复融过程中各级卵泡及颗粒细胞形态学的损伤明显低于程序化冷冻,更适合下一步人类卵巢组织的冷冻保存的研究。