简介:目的:构建以绿色荧光蛋白eGFP为报告基因的毕赤酵母表达载体,为后续致病真菌功能基因的eGFP融合基因过表达作铺垫。方法:利用In-Fusion系统构建eGFP的表达载体PPICZαB-eGFP,氯化锂转化毕赤酵母X33,通过含Zeocin(100μg/mL)抗性的YPD培养基筛选,将得到的菌落X33-eGFP以引物3'-AOX/5'-AOX及eGFP-F/eGFP-R进行PCR,产物行琼脂糖凝胶电泳、测序验证eGFP片段是否成功插入,最后甲醛诱导表达。结果:以X33-eGFP为模板的PCR产物琼脂糖凝胶电泳结果显示片段eGFP成功插入至载体中,测序验证无突变。经甲醛诱导后的毕赤酵母X33-eGFP在蓝色荧光激发下,可观察到发出绿色荧光。结论:成功建立了毕赤酵母X33-eGFP,且证明了eGFP片段可以在毕赤酵母AOX启动子中得到表达。
简介:目的构建分泌表达具有生物学活性的重组人胰岛新生相关蛋白(rhINGAP)载体毕赤酵母。方法通过PCR扩增INGAP基因,插入到重组质粒α,/pUC18的α因子信号序列处,再将融合基因αINGAP重组到表达质粒pPIC9K,SalI酶切线性化重组质粒αINGAP/pPIC9K。电穿孔转化毕赤酵母,营养缺陷型培养基MD和G418筛选含高拷贝表达盒的酵母转化子,PCR鉴定是否含有目的基因INGAP,甲醇诱导rhINGAP的表达,Westernblotting鉴定目的蛋白,ELISA法定量测定其含量。结果重组表达质粒αINGAP/pPIC9K经酶切获得758bp片段,符合α因子与INGAP片段融合的长度,筛选得到3个阳性转化子,培养上清含有与抗INGAP抗体反应的蛋白。结论成功构建了分泌INGAP蛋白的毕赤酵母菌株。
简介:目的构建含Sonichedgehog(SHH)蛋白N端基因片段的毕赤酵母表达载体。方法通过BamH1、Xho1双酶切、T4连接酶连接,将SHH-N基因片段插入pET22b原核表达载体,构建pET22b-SHH-N质粒;经PCR扩增,产物再与pTA2载体连接,构建pTA2-SHH-N重组质粒;经EcoR1及Not1双酶切、T4连接酶连接,将SHH—N端基因片段插入pPIC9K质粒,构建pPIC9K-SHH-N重组质粒;通过线性化、脱磷酸化,将线性化pPIC9K-SHH-NDNA转染毕赤酵母菌株GS115,最后经PCR扩增和测序鉴定。结果转染的毕赤酵母经PCR扩增和测序证实含有SHH-N基因片段,与原始的基因片段序列完全一致。结论成功地构建含SHH-N蛋白基因片段的毕赤酵母表达载体。
简介:摘要目的观察思密达灌肠布拉氏酵母菌口服治疗小儿腹泻病的疗效,探讨小儿腹泻病治疗的新疗程新措施。方法将56例小儿腹泻病患儿随机分为两组,对照组26例常规给予一般治疗(口服思密达、妈咪爱、口服补液盐或静脉补液、利巴韦林静脉滴注等处理),治疗组30例,未给用口服思密达、妈咪爱,在一般治疗的基础上,给予布拉氏酵母菌口服,每日一次,每次一袋,思密达灌肠加用20-30ml生理水保留灌肠,每日1次或每日2次,连用3d,观察两组的病情变化。结果治疗组总有效率96.5%,显著优于对照组74%(P<0.05)。结论思密达灌肠布拉氏酵母菌口服治疗小儿腹泻病的疗效显著,且副作用少,值得临床推广应用。
简介:【摘要】 目的: 观察布拉氏酵母菌散治疗小儿便秘的效果。 方法: 在 我院 2018 年 4 月至 2019 年 4 月收治 小儿便秘患儿 中随机抽取 66 例,按照使用药物的方法将患儿均分为对照组(采用乳果糖 进行治疗 )与实验组(采用乳果糖 + 布拉氏酵母菌散进行治疗 ),每组 33 例,在治疗结束后,观察两组患儿的治疗效果。 结果:治疗前, 实验组、对照组患儿的每日大便次数分别为 ( 1.13±0.52 )次、( 1.15±0.56 )次 , 差异不具有统计学意义( P > 0.05 ),治疗 7d 后,实验组患儿的每日大便次数为 ( 2.53±0.19 )次 ,明显优于对照组患儿每日 ( 1.72±0.18 )次 的大便次数 , 差异具有统计学意义( P < 0.05 )。 结论: 布拉氏酵母菌散对小儿便秘具有明显的治疗缓解效果。
简介:【摘要】目的:分析观察布拉氏酵母菌散在治疗小儿腹泻患者的临床效果情况。方法:选择 2017年2月至 2018年5月期间收治的90例小儿腹泻患者作为研究对象,随机分为两组,每组45例,对照组实施补液、抗生素、蒙脱石散的常规治疗,而实验组在常规治疗基础上实施布拉氏酵母菌散治疗,观察两组患者的腹泻医治情况。结果:实验组在腹泻持续时间、总腹泻时间、临床疗效总有效人数方面都要优于对照组,数据差异具有统计学意义,( P <0.05)。结论:与对照组相比,实验组在对小儿腹泻患者使用常规治疗基础上联合布拉氏酵母菌散治疗法后,总有效率高,腹泻治疗用时短,临床效果显著,值得推广。
简介:目的:研制高效分泌表达枯草芽孢杆菌β-甘露聚糖酶的毕赤酵母基因工程菌株。方法与结果:将优化设计的枯草芽孢杆菌MA139β-甘露聚糖酶基因用EcoRI/XbaI双酶切,克隆到诱导型表达载体pPICzoLA中α因子信号肽编码序列的下游,转化大肠杆菌筛选重组质粒,转化毕赤酵母X-33感受态细胞,经Zeocin筛选,获得重组表达菌株X-33/mann。将重组菌株在10L全自动发酵罐中进行高密度发酵培养,甲醇诱导72h发酵活力达到2100U/mL。重组甘露聚糖酶的最适催化温度为40℃,最适催化pH值为6.0。结论:枯草芽孢杆菌β-甘露聚糖酶在毕赤酵母中获得了高效分泌表达,具有开发作为饲料添加剂的潜能。
简介:轮状病毒是引起婴幼儿急性腹泻的最重要的病原体之一,在世界范围内,5岁以内的儿童约95%至少经历过一次轮状病毒感染,其中约1/5患儿需上医院就诊,1/65患儿需留院治疗,1/293患儿死亡[1],多数死亡病例发生在社会、经济不发达的国家和地区。轮状病毒肠炎以呕吐、腹泻等胃肠道症状为主要临床表现,可伴有不同程度的发热、脱水、酸碱失衡及电解质紊乱,并可有胃肠道外其他系统受累的表现。布拉氏酵母菌是一种真菌类微生态制剂,有文献资料显示,其能明显缩短急性腹泻病人的病程及住院时间[2,3]。本次研究观察布拉氏酵母菌佐治轮状病毒肠炎的临床疗效。现报道如下。
简介:摘要目的研究布拉氏酵母菌在小儿急性腹泻病的临床治疗中的治疗效果。方法将在我院接受治疗的120例小儿急性腹泻病患儿作为本次研究的对象,分为对照组和观察组。其中,对照组患儿接受服蒙脱石散进行治疗,观察组患儿则接受布拉氏酵母菌进行治疗。观察两组患儿的排便情况与用药反应情况。结果治疗后,观察组患儿的治疗有效率为95.00%,高于对照组的76.67%,两组患儿的数据比较有明显的差异,有统计学意义(P<0.05);两组患儿的不良反应率均为1.67%,数据无差异,不存在统计学意义(P>0.05)。结论布拉氏酵母菌在小儿急性腹泻病的临床治疗中,疗效佳,安全性高,值得推广
简介:摘要目的研究布拉氏酵母菌散剂对儿童腹泻的临床疗效与安全性,探讨其临床推广可行性。方法选取84例符合儿童腹泻诊断标准的患者随机分成观察组与对照组,其中观察组有43例,对照组41例。两组均采取抗病毒、水电解质紊乱调整以及抗炎等治疗,对脱水者采取口服的方式补充盐液补液等。治疗组在此基础加用布拉氏酵母菌散剂口服。比较两组患者的临床疗效与治疗3天内粪便量和腹泻持续时间等各项指标。结果观察组其治疗总有效率要显著优于对照组(χ2=12.682,P<0.05)。观察组治疗后第1天、第2天、第3天的粪便平均量都显著少于对照组(P<0.05);同时观察组腹泻持续时间也显著低于对照组(P<0.05)。结论布拉氏酵母菌制剂治疗儿童腹泻有着显著疗效与临床安全性,值得临床推广使用。
简介:摘要目的探讨研究在常规疗法的基础上辅助应用布拉氏酵母菌对小儿急性腹泻的临床效果。方法选取104例急性腹泻患儿,随机分为联合组(n=54)与传统组(n=50)。传统组实施常规疗法,联合组实施常规疗法+布拉氏酵母菌治疗。对比用药3d后平均大便次数、腹泻平均持续时间和临床疗效。结果联合组用药3d后平均大便次数明显少于传统组(P<0.05),前者腹泻平均持续时间明显短于后者(P<0.05);两样本疗效分布情况经秩和检验可发现差异有显著性(P<0.05),且联合组的总有效率为98.15%,远高于传统组的80.00%(P<0.05)。结论在小儿急性腹泻常规治疗时建议联合给予布拉氏酵母菌辅助治疗,不仅可促进腹泻症状消失,还可显著改善治疗效果。