简介:摘要目的探讨人骨髓间充质干细胞体外培养的可靠方法。方法采用人手术切下的骨头标本,运用全骨髓贴壁法分离培养hBMSCs;观察并绘制生长曲线;取生长状态良好的第四代细胞,通过形态学、流式细胞仪检测表面标志物等鉴定hBMSCs;诱导hBMSCs分化为成脂肪细胞,鉴定本实验所分离的hBMSCs是否具有多向分化能力。结果第四代细胞CD29和CD44阳性表达率分别为100%和99.8%,CD31和CD45阳性表达率分别为0.8%和0.4%。流式细胞仪检测证明本研究分离培养hBMSCs的方法可以获得高纯度的间充质干细胞。hBMSCs体外诱导向脂肪细胞分化16d后,镜下可见胞浆内充满圆形脂滴,油红O染色阳性,诱导成脂肪细胞分化率为85.1±3.2%,证实本实验分离的hBMSCs具有多向分化能力。结论采用手术切下的骨性关节炎标本,运用全骨髓贴壁法可获得稳定、均质性良好的hBMSCs,并具有多向分化能力。本方法能为临床上分离、培养人骨髓间充质干细胞提供了另一种可靠的路线。
简介:【摘要】目的:研究改良法体外分离培养成年大鼠骨髓间充质干细胞实验情况。方法:用全骨髓贴壁法对成年大鼠BMSCs分离,创设含胎牛血清10%(FBS)的DMEM/F12培养组是对照组,含10%FBS、10ng/mL表皮生长因子(EGF)的DMEM/F12培养组是实验组,经对显微镜倒置对两组原代、传代后BMSCs形态与生长进行观察,用流式细胞仪对观察组P6、P10细胞表面展开标记。结果:换液时,造血细胞渐渐消除,BMSCs按集落为中心逐渐分裂增殖,对照组BMSCs原代培养7-9d时,细胞会融合为单层。观察组BMSCs原代细胞到融合时间达5-6d。原代BMSCs形态不相同,是由梭形、宽大的扁平状细胞构成。结论:10%FBS、10ng/mL表皮生长因子(EGF)的DMEM/F12全骨髓粘壁法培养BMSCs可使其更加稳定与边界,短时间取得较多纯度高的成年大鼠BMSCs,满足组织工程对种子细胞要求。
简介:目的阐明CHML经皮瘤内注射治疗乳癌的效果并探讨其机理,明确CHML有无骨髓抑制及肝肾功能损伤等副作用.方法5周龄裸鼠共30只,分别于右腋后皮下直接种植人MCF-7乳癌组织块(0.2cm×0.2cm×0.2cm),制成乳癌动物模型.2周后,肿瘤直径长至0.2~0.8cm,随机分成2组,分别给予CHML及生理盐水局部浸润注射.治疗组CHML剂量按瘤体大小为50mg/cm3,隔2d局部注射1次,共3次.对照组给予相应容量的生理盐水.治疗前及治疗后分别测ALT、AST、ALP、BUN及白细胞数,以明确有无肝肾功能损伤和骨髓抑制.第1次注射后48h,两组分别处死5只裸鼠,对肿瘤进行原位末端标记(TUNEL),以明确有无凋亡.完成局部注射后2周,处死所有裸鼠,解剖并行病理检查,明确两组肿瘤愈合及淋巴结转移情况.结果(1)局部注射后48h治疗组5只裸鼠的肿瘤均出现不同程度的凋亡(+~+++),而对照组仅有个别细胞凋亡(-).(2)实验结束时,治疗组肿瘤全部脱落,且无残存癌细胞;而对照组肿瘤明显增大,瘤体直径平均(0.94±0.34)cm,两组有显著统计学差异(P<0.001).(3)治疗前后ALT、AST、ALP、BUN及白细胞均无明显变化,两组比较无统计学差异.结论CHML瘤内局部注射可有效杀灭乳腺癌细胞,并可诱导凋亡,且无抑制骨髓和损伤肝肾功能的副作用.
简介:【摘要】提升分队保障人员训练质效,是确保部队有效履行职能使命的重要支撑,文章以实战化训练为牵引,结合当前分队保障人员训练现状,从“问题、原因、对策”三个方面入手,坚持以新军事训练大纲为抓手,结合具体问题,“对症下药”,探索分队保障人员提升路径。
简介:目的建立可行的人骨髓间充质干细胞(humanmarrowmesenchymalstemcells,hMSCs)的培养方法,并对其生物学特性进行初步研究。方法于2013年1月—2014年6月采用密度梯度离心法和贴壁法分离培养hMSCs,用免疫组织化学(免疫组化)法鉴定表面标志并分析其核型,光镜观察其生长和形态变化。结果本实验分离的hMSCs纯度高、贴壁好,以长梭形为主,至少在传代培养6代内增殖快,性状稳定。免疫组化染色显示hMSCs表达CD29和CD44,不表达CD45及CD34,核型正常。结论密度梯度离心法可获得增殖活跃且纯度较高的hMSCs,有特征性表型,适合体外较长期的培养hMSCs。