简介:摘要目的了解人腺病毒(human adenovirus,HAdV)在不同疾病病原谱中的检出情况。方法对符合纳入标准的284个研究进行HAdV检出率的Meta分析,分析内容包括异质性检验、随机效应模型合并效应量、Meta回归、敏感性分析和发表偏倚。结果284个研究检出率波动较大、异质性较高,分别采用不同的方法降低或分析异质性:随机效应模型合并总检出率为4.21%(95%CI:3.80%~4.66%);亚组分析各组检出率分别为胃肠道症状疾病5.06%(95%CI:4.22%~6.06%)、呼吸道症状疾病3.97%(95%CI:3.53%~4.46%)、儿童4.50%(95%CI:4.06%~4.99%)、成人2.09%(95%CI:1.22%~3.56%)、抗原检测1.94%(95%CI:1.64%~2.30%)、核酸检测5.82%(95%CI:5.21%~6.49%)、抗体检测5.60%(95%CI:4.17%~7.48%)、中国东部地区3.67%(95%CI:3.18%~4.24%)、中部地区6.07%(95%CI:5.20%~7.08%)、西部地区5.00%(95%CI:4.03%~6.18%)、≤1 000样本量6.10%(95%CI:5.39%~6.91%)、>1 000样本量2.66%(95%CI:2.32%~3.05%);Meta回归分析有显著性的因素为疾病种类、年龄、检测方法、研究地区、样本量,调整R2=37.15%。结论HAdV检出率的研究,在异质性较大时,Meta分析对率的合并仍有待完善。不同疾病种类、不同年龄、检测方法、研究区域和样本量大小是引起异质性的部分原因。
简介:目的探讨构建携带人pre—mir181a基因的重组腺病毒载体,为基因治疗研究提供一种新的方法,并观察其在神经胶质瘤细胞U251细胞中的表达。方法以从Genesil公司购买的含有mir181a的质粒为模板扩增pre—mir181a基因,将回收的PCR产物片段克隆入pGenesil载体,获得重组质粒pGenesil—pre—mir181a。从pGenesil—pre—mir181a上通过LR体外同源重组将mir181amicroRNA表达框转移至pGSadeno腺病毒表达载体上。在体外用不同感染复数(M·O·I)值rAd5-mir181ab分别转染神经胶质瘤细胞U251细胞。采用流式细胞仪、RT—PCR方法检测目的基因的转染效率和表达。结果PCR、酶切鉴定以及序列测定与比对分析表明,重组腺病毒rAd5-mir181a构建正确。神经胶质瘤细胞U251细胞转染rAd5-mir181a的最高效率可达99%,转染后的神经胶质瘤细胞U251细胞表达相应的mir181a。结论本实验成功构建了含mir181a基因的重组腺病毒rAd5-mir181a载体,在体外能高效转染神经胶质瘤细胞U251细胞。
简介:摘要目的研究2018年4月至2019年3月济南市急性呼吸道感染病例中人鼻病毒、呼吸道合胞病毒及人腺病毒的感染情况及流行病学特点,并对分离出的人腺病毒做全基因组序列分析。方法采集2018年4月至2019年3月济南市第四人民医院、山东大学齐鲁儿童医院、章丘区人民医院的急性呼吸道感染住院病例患者的鼻/咽拭子样本共计1 969份,采用实时荧光定量PCR的方法检测样本中呼吸道相关病原体,包括人鼻病毒、呼吸道合胞病毒及人腺病毒的阳性率,并对分离出的7株腺病毒阳性标本进行测序,以确定腺病毒型别,并构建基因进化树进行分析。结果在收集的1 969份标本中,3种呼吸道病毒阳性病例共计242例,阳性检测率为12.30 %(242/1969),鼻病毒阳性率为3.00%(59/1969)、呼吸道合胞病毒阳性率为6.30 %(124/1969)、腺病毒阳性率为3.86%(76/1969)。不同年龄段间鼻病毒检出率差异无统计学意义(Fisher精确检验值8.376,P=0.720),不同年龄段间呼吸道合胞病毒、腺病毒检出率差异均有统计学意义(χ2=19.28、12.16;P=0.001、0.016)。不同性别间腺病毒检出率差异具有统计学意义(χ2=14.33,P<0.001),不同性别间鼻病毒阳性率和呼吸道合胞病毒阳性率均无统计学意义(χ2=0.30、2.90,P=0.862、0.089)。比较不同月份间三种病毒核酸阳性率,发现鼻病毒、呼吸道合胞病毒和腺病毒的检出率分别在10月份、12月份、11月份达到最高(分别为8.61%、26.50%和8.84%)。对测序的7株腺病毒阳性标本构建基因进化树后发现其均为HAdV-2型。结论2018年4月至2019年3月济南市急性呼吸道感染相关的人鼻病毒、呼吸道合胞病毒及人腺病毒在不同组别间有不同的流行病学特点,为急性呼吸道感染的早期预防和临床治疗提供参考依据。
简介:摘要目的探讨人腺病毒7型(human adenovirus type 7,HAdV-7)感染对于炎症小体激活的影响及作用机制。方法采用免疫荧光检测HAdV-7对于THP-1分化的巨噬细胞的感染;应用ELISA方法检测HAdV-7感染对于IL-1β的激活;实时荧光定量PCR检测病毒感染对于NLRP3、pro-IL-1β、caspase-1等mRNA表达的影响;蛋白质免疫印迹实验(western blot,WB)检测病毒感染后细胞内NLRP3、pro-IL-1β的表达及上清中caspase-1和IL-1β蛋白表达情况。结果免疫荧光检测显示HAdV-7可感染THP-1分化的巨噬细胞,WB显示HAdV-7感染诱导细胞内pro-IL-1β蛋白表达上调,ELISA检测表明HAdV-7感染可诱导IL-1β的分泌表达(MOI=0.5,P=0.0008)。使用Ac-YVDK-cmk抑制caspase-1表达后,HAdV-7感染上清中IL-1β的表达被明显抑制(P=0.0025);HAdV-7感染caspase-1缺陷的THP-1分化的巨噬细胞,IL-1β的表达同样被显著抑制(P=0.0191)。荧光定量PCR检测HAdV-7感染可以诱导细胞内pro-IL-1β和NLRP3 mRNA表达上调(NLRP3:P=0.0004;pro-IL-1β:P=0.0007),同时WB显示HAdV-7可以诱导细胞内pro-IL-1β和NLRP3蛋白表达上调;使用NLRP3特异性抑制剂MCC950处理细胞,可抑制HAdV-7感染的细胞上清中IL-1β的表达(P=0.0027); HAdV-7感染NLRP3缺陷的THP-1分化的巨噬细胞,IL-1β的表达被明显抑制(P=0.0189)。分别使用TLR2、TLR4、TLR7/9信号传导抑制剂,抑制HAdV-7感染THP-1分化的巨噬细胞,结果显示抑制TLR4信号传导,细胞上清中IL-1β的表达水平有明显下调(P=0.0122);使用ROS抑制剂、组织蛋白酶B抑制剂,或抑制K+外流,分别处理HAdV-7感染THP-1分化的巨噬细胞,结果显示抑制组织蛋白酶B(P=0.0292),或抑制K+外流时(KCl, P=0.0022;Glibenclamide, P=0.0275),细胞上清中IL-1β的表达水平有明显下调。结论HAdV-7感染THP-1细胞激活NLRP3炎症小体,NLRP3炎症小体激活的第一信号通过Toll样受体4(TLR4)信号传导,第二信号主要通过半通道模型介导K+外流的和溶酶体破坏模型释放组织蛋白酶B的激活NLRP3炎症小体。
简介:摘要目的建立一种基于免疫层析法(Immunochromatographic assay, ICA)的快速简便的人腺病毒(Human adenoviruses,HAdVs)检测方法。方法利用抗原结合和病毒斑点实验检测发现单克隆抗体3C11和7E6能特异性结合所有测试的人腺病毒,以这两个抗体建立ICA方法。使用培养病毒及10份临床咽拭标本检测了该方法的特异性及灵敏性。结果该ICA能特异性结合HAdV-1、2、3、4、5、6、7、10及胃肠型HAdV-41,极限范围为0.16~103TCID50/ml,所有成功分离出病毒的临床样本也显示阳性。结论ICA检测方法是一种灵敏度高、特异性强、方便快速检测HAdVs的方法。
简介:目的:利用Adeasy-1系统,构建并鉴定CARP基因重组腺病毒载体.方法:PCR扩增含有CARP全长cDNA的片段,经测序验证无误后,亚克隆至pAdTrack-CMV穿梭质粒,再与pAdEasy-1质粒在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组产生腺病毒载体质粒.经过抗性筛选以及酶切鉴定得到阳性的重组质粒,再在293细胞中进行包装扩增,利用Adeasy系统上的绿色荧光蛋白标签鉴定病毒表达.结果:测序证实PCR产物为CARP全长cDNA;抗性筛选及酶切鉴定均表明重组腺病毒载体构建成功;转染293细胞3天后可见绿色荧光,回收病毒可以重复感染293细胞,证明病毒包装成功.