简介：目的利用错配杂交和化学发光技术,建立一种检测MGMT基因启动子区过甲基化的定量分析方法.方法基因组DNA经过亚硫酸氢钠修饰,所有未甲基化的胞嘧啶都被转变为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶则不发生变化.设计特异的PCR引物（不合CpG位点）,同时扩增含有CpG位点甲基化或非甲基化目的MGMT基因启动子区,用两条分别与甲基化及非甲基化CpG位点互补的寡核苷酸探针与扩增产物杂交,化学发光检测,通过两条探针的杂交信号强度之比确定样品DNA中MGMT甲基化的程度.结果检测混合样品中MGMT基因的甲基化水平与结果完全相符,并可用于肿瘤组织样品的MGMT甲基化定量检测.结论与现有方法相比,本法是一种检测快速、操作简便的MGMT基因甲基化的定量检测方法.

简介：摘要目的研究不明原因自然流产患者绒毛组织中H19启动子区域甲基化水平与正常早孕绒毛的差异，并分析其可能的发生机制。方法收集不明原因自然流产及正常早孕的绒毛组织各30例，对组织中H19基因启动区域甲基化水平进行检测及对照分析，并对两组绒毛组织中的三种甲基转移酶的表达水平进行对照分析。结果H19上游DMR中甲基化水平检测结果提示两组间绒毛组织中H19启动子区域甲基化水平存在差异，自然流产组中甲基化水平明显低于对照组，差异有显著性（P<0.01），自然流产组绒毛组织DNMT1mRNA及蛋白的表达量与正常早孕组无明显统计学差异（P>0.05），而自然流产组绒毛组织DNMT3a及DNMT3b的mRNA及蛋白的表达量明显低于正常早孕组，差异有显著性（P<0.01）。结论自然流产患者绒毛组织中H19DNA甲基化水平的明显下降，下调DNA甲基转移酶中DNMT3a与DNMT3b的表达可能是甲基化水平差异的重要机制之一。

简介：本研究通过对急性白血病病人及体外肿瘤细胞株的DNA甲基化及基因表达的实验,探讨死亡相关蛋白激酶（death-associatedproteinkinase,DAPK）基因在急性白血病中的表达情况及其启动子区域甲基化的状态,并分析两者之间的相关程度.应用RT-PCR检测DAPK基因在白血病细胞及正常骨髓细胞中的表达;用巢式甲基化特异性PCR（n-MSP）法检测急性白血病患者及细胞株DAPK基因启动子甲基化状况;从第二轮巢式MSP扩增出的随机产物中挑选2个随机引物,交予专业机构克隆后进行序列分析.结果表明：DAPK基因在10例正常对照者骨髓标本中均有表达,DAPKmRNA在急性白血病病人骨髓标本中表达平均值为0.61±0.40,低于正常对照者,差异有显著性（P＜0.05）,其中52.94％（9/17例）的急性淋巴细胞白血病病人骨髓标本DAPKmRNA表达降低或缺失,急性髓系白血病病人数据为41.18％（42/102）;细胞株U-937显示基因表达正常,HL-60表达缺失;102例急性髓系白血病病人骨髓标本中33例存在DAPK启动子区甲基化,甲基化率为32.4％（33/102）;17例急性淋巴细胞白血病病人骨髓标本中8例存在DAPK启动子区甲基化,甲基化率为47％（8/17）;7例正常人骨髓标本DAPK启动子区均为非甲基化;细胞株U-937DAPK启动子区非甲基化,HL-60DAPK启动子区甲基化.ALL组与AML组患者骨髓细胞DAPKmRNA表达与其启动子甲基化均呈显著负相关（ALL组r=-0.855,P＜0.05;AML组r=-0.343,P＜0.05）,提示两者有密切的关联.结论：急性白血病患者中DAPK基因启动区甲基化与其mRNA的异常表达或失表达有关.

简介：摘要目的探讨Ｆａｓ蛋白、ＦａｓｍＲＮＡ的表达及Ｆａｓ基因的甲基化状态在非小细胞肺癌发生发展中的相互关系及临床意义。方法经手术治疗的非小细胞肺癌患者４２例（鳞癌１６例，腺癌２６例），收集肺癌组织、癌旁组织及正常肺组织。采用免疫组化Ｓ－Ｐ染色方法、逆转录聚合酶链式反应、重亚硫酸盐修饰及甲基化特异性聚合酶链式反应分别检测非小细胞肺癌患者癌组织、癌旁组织及正常肺组织中Ｆａｓ蛋白、ＦａｓｍＲＮＡ的表达情况及Ｆａｓ基因甲基化状态，并分析其在非小细胞肺癌形成过程中的相互关系。结果非小细胞肺癌组织的Ｆａｓ蛋白阳性表达率为３５．７１％，ＦａｓｍＲＮＡ阳性表达率为４５．２４％，明显低于其在癌旁组织及正常肺组织中的表达率（Ｆａｓ蛋白阳性表达率分别为６９．０４％和８５．７１％，ＦａｓｍＲＮＡ阳性表达率分别为７６．１９％和９０．４８％）。非小细胞肺癌组织Ｆａｓ基因甲基化率６４．２９％明显高于其在癌旁组织及正常肺组织中的甲基化率（分别为３０．９５％和２１．４３％）。非小细胞肺癌Ｆａｓ蛋白、ＦａｓｍＲＮＡ分别与Ｆａｓ基因甲基化呈显著负相关（Ｆａｓ蛋白ｒ＝#０．４７１，Ｐ＜０．０１；ＦａｓｍＲＮＡｒ＝#０．４６９，Ｐ＜０．０１）。结论与癌旁组织及正常肺组织相比，非小细胞肺癌组织中存在显著的Ｆａｓ基因高甲基化，ＦａｓｍＲＮＡ及Ｆａｓ蛋白表达下调。非小细胞肺癌Ｆａｓ表达与Ｆａｓ基因甲基化显著负相关。结果提示，Ｆａｓ基因高甲基化可能导致Ｆａｓ基因失活，从而影响肿瘤细胞的凋亡，导致肿瘤细胞异常增殖及免疫逃逸。

简介：为了明确苹果三倍体杂种后代中基因组DNA甲基化水平及模式的变化特征，本文以‘金冠’ב四倍体嘎拉’苹果的6l份三倍体后代为试验材料，采用MSAP分子标记技术对其进行了分析。结果表明：（1）61份三倍体杂种后代的总甲基化率在10．74％～28．86％之间，全甲基化率在7．87％～24．22％之间，半甲基化率在2．10％～11．84％之间。与母本相比，总甲基化和全甲基化呈上升趋势，半甲基化呈下降趋势；与父本相比，均呈下降趋势。（2）在苹果三倍体杂种的基因组加倍和重组过程中，发生了大量过或超甲基化和去甲基化变异，少量发生了次甲基化现象，极少部分的甲基化状态介于双亲之间。（3）共获得4条DNA甲基化差异片段，有3条能够在苹果基因组中检测到，且同源性较高，分别位于第1条和第12条染色体的叠连群上，但是具体功能没有描述。研究结果表明，苹果三倍体杂种后代的DNA甲基化水平与倍性相关性不大，在其形成过程中发生了大量的过或超甲基化变异，为苹果三倍体育种中表观遗传变异的研究提供了依据。

简介：目的系统评价去甲基化药物治疗中高危骨髓增生异常综合征（MDS）的有效性和安全性。方法计算机检索PubMed、EMbase、TheCochraneLibrary（2013年第3期）、webofScience、CNKI、VIP、WanFangData和CBM数据库，查找去甲基化药物治疗MDS的随机对照试验（RCT），检索时限均为从建库至2013年3月。南2位研究者按照纳入与排除标准筛选文献、提取资料和评价纳入研究的方法学质量后，采用RevMan5．1软件进行Meta分析。结果共纳人4个研究，816例患者。Meta分析结果显示：与最佳支持治疗方案相比，去甲基药物治疗方案对于中高危MDS患者在完全缓解率[OR=19．14，95％CI（5．33，68．7），P〈0．00001]、部分缓解率[OR=20．63，95％CI（5．76，73．93），P〈0．00001]、血液学缓解率[OR=3．58，95％CI（2．40，5．34），P〈0．00001]、Ⅲ／Ⅳ级粒细胞减少症发生率[OR=3．82，95％CI（2．67，5．47），P〈0．00001]、Ⅲ／Ⅳ级血小板减少症发生率[OR=3．98，95％CI（2．55，6．23），P〈0．00001]及病死率[OR=0．52，95％CI（0．35，0．77），P〈0．00001]方面更优，其差异均有统计学意义。部分患者会出现Ⅲ／Ⅳ级血细胞减少症及可耐受的非血液学不良反应。结论现有证据表明，去甲基化药物治疗MDS疗效明显，可延长疾病转化为白血病时间，降低病死率和提高患者生存质量。

简介：目的探讨组蛋白赖氨酸去甲基化酶KDM5A在人牙髓细胞（hDPC）中的表达模式及成牙本质分化诱导对其表达量的影响。方法体外培养hDPC,实时荧光定量聚合酶链反应和Westernblot检测第1代至第8代（P1-P8代）hDPC中KDM5AmRNA和蛋白的表达量;免疫荧光检测KDM5A在hDPC中的分布;对P3代细胞进行成牙本质分化诱导,于第7天和第14天分别检测KDM5AmRNA和蛋白的表达水平。结果体外传代培养hDPC中可检测到KDM5A的表达,KDM5AmRNA和蛋白量均呈先增加后减少的趋势;hDPC细胞质及细胞核中均表达KDM5A;成牙本质向分化诱导7和14d,KDM5AmRNA和蛋白量高于未诱导组细胞,诱导14d表达量高于诱导7d（P〈0.05）。结论hDPC表达KDM5A,矿化诱导可提高KDM5A的表达。

简介：目的：探讨组蛋白去甲基化酶JMJD3对骨髓基质干细胞（bonemarrowstromalcells，BMSCs）体外多潜能性及成骨分化的生物学调控作用。方法：用离心和贴壁培养相结合方法分离培养大鼠四肢骨BMSCs，分别用含JMJD3-shRNA的绿色荧光蛋白（GFP）慢病毒干扰载体（实验组）及含无关序列的GFP慢病毒载体（对照组）转染BMSCs，Westernblot方法检测两组BMSCs中组蛋白H3第27位赖氨酸上三甲基化（H3K27me3）及干细胞多潜能转录因子Oct4、Nanog、Sox2的表达，并比较两组细胞的克隆形成率；实时定量RT-PCR、Westernblot、茜素红染色检测两组细胞的体外成骨分化能力。结果：与对照组相比，实验组BMSCs的H3K27me3表达水平升高，具有更强的克隆形成能力，且表达更强的Oct4、Nanog、Sox2等多潜能因子；体外成骨诱导7d后，实验组BMSCs中RUNX2等成骨分化基因表达下降，诱导14d后，钙结节形成较对照组少。结论：抑制JMJD3表达可增强BMSCs的干性特征，抑制其成骨分化。

简介：目的：探讨甲基化酶抑制剂5′-氮杂-2′-脱氧胞苷（5′-Aza-2′-deoxycytidine，5′-Aza-CdR）对结直肠癌细胞株HT-29和Lo-Vo中p16基因甲基化状态、mRNA及蛋白表达的影响。方法应用TaqMan探针为基础的实时定量PCR法、SYBRGreenPCR法及蛋白印迹实验（Westernblot）检测不同浓度5′-Aza-CdR处理前后HT-29和LoVo细胞中p16基因的甲基化状态、mRNA和蛋白表达。结果TaqMan探针为基础的实时定量PCR法检测HT-29和LoVo细胞中p16蛋白在药物作用后异常甲基化得到逆转；实时荧光定量PCR和WesternBlot检测到0．5、1．0、1．5μM5′-Aza-CdR处理后p16基因mRNA和蛋白均重新表达，具有统计学意义（P均＜0．05）。结论结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中p16启动子甲基化可能是导致该基因表达下调甚至失活的主要原因。5′-Aza-CdR能够较成功的逆转结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中p16基因的甲基化状态，并能恢复mRNA及蛋白重新表达。

简介：维亚康姆这艘娱乐航空母舰通过电视、电影、移动平台和在线网络等方式向160个国家或地区近6亿的用户传输旗下的音乐电视网、黑人娱乐电视网和派拉蒙电影公司所提供的节目。她在广播电视、户外广告和在线媒体等领域的不凡表现，世界各地的广告商提供了一个巨大平台。本文主要通过对维亚康姆在中国实行的一系列举措进行分析，从而为中国的传媒集团提供可借鉴之经验。

简介：摘要目的对国标法<水质有机磷农药的测定气相色谱法>方法进行优化与改进，使其更灵敏、准确、实用。方法优化样品萃取方法，改用弱极性毛细管色谱柱（HP-5）代替填充柱、火焰光度检测器（FPD）检测。结果实验表明，农药混标在0.01～1.0μg／ml浓度范围内线性良好，最低检出质量浓度为0.01～0.10μg／L，相对标准偏差为3.5％-5.6％左右，平均回收率在81.6％-92.6％左右。结论该方法操作简便快速，结果准确可靠，重复性好，适用于水中敌敌畏、乐果、甲基对硫磷三种有机磷农药残留量测定。

简介：我头发湿漉漉地出现在浴室昏黄的镜子昨天微博上我写下了两句：冲凉房的各种洗发水，一日衰老又一日的身体镜子里，我赤裸着身体身体随处携带的皮箱和房子当早晨离去，夜晚像鸟儿飞回疲倦的黑色素，密集在窗口

简介：

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简介：该项目是澳大利亚一处新的公其花园，坐落于墨尔本中心地区以南30km处的克兰本皇家植物园内。该项目通过具有创新性和互动性的设计，展现出澳大利亚植物群的特点，并赋予其教育意义。

简介：摘要目的观察亚砷酸(ATO)联合反应停、维生素Ｃ(VitC)治疗难治性复发性多发性骨髓瘤(MM)的疗效及安全性。方法19例难治复发MM患者，应用亚砷酸(10mg/d)联合反应停(200～300mg/d)、VitC(2g/d)，连用４周。结果部分缓解(PR)47%，疾病稳定(SD)32%，疾病进展(PD)21%。主要不良反应为白细胞减少、消化道反应及肝功能损害。结论ATO联合反应停、VitC治疗难治性复发性MM有效率较高，且毒副反应低，很有临床应用前景。

简介：采用密度泛函理论的B3LYP方法、从头算的MP2方法和自洽反应场极化连续模型（PCM）,在6-311＋＋G（2d,2p）基组水平上研究了N,N’-二甲基-S-异苯并呋喃在气相和溶液中发生S→N烷基重排反应的机理、溶剂效应和取代基效应.结果表明：该反应通过四元环机理和双位迁移机理生成产物,在气相和溶剂水中,双位迁移途径的能垒均比四元环途径低,反应主要通过双位迁移途径生成产物.在气相,苯环上发生-Cl,-NO2和-OCH3取代时,双位迁移途径的能垒在MP2/6-311＋＋G（2d,2p）水平上比没有取代时分别低4.18,7.61,4.96kJ/mol,反应的取代基效应不明显.而在溶剂水中,苯环上发生-Cl,-NO2和-OCH3取代时,双位迁移途径的能垒在PCM-MP2/6-311＋＋G（2d,2p）水平上比气相时分别低37.73,39.96和37.17kJ/mol,反应的溶剂化效应非常明显.理论研究结果与实验观察结果一致.

简介：买房与租房众所周知，房价是国家经济状况的风向标之一。无论在中国还是澳大利亚，房价都是人们普遍关心的热点。和中国不同，在澳大利亚还有租房这一重要的选项，所以即使人们面临婚姻，也还不必马上买房。

简介：该项目位于阿兰特萨镇的中心区域，是该镇城市化改造项目的二期工程。在分析并判断了项目所在地的情况之后，设计师认为以下几个问题亟待解决：港口公共空间和港湾（以及海洋）之间缺乏视觉联系；原有的历史文化建筑，如小教堂和渔民合作社（当地的渔民组织），并没有与场地内原有的植物景观结合在一起；该镇中心区域缺少能够举办各种活动、丰富居民生活的公共空间；在场地内预留出建设市民活动中心的空间，使之与公园相得益彰；公共停车场需要修整。

简介：我的女儿亚莉常常抱怨说自己没有好运气，她总是觉得她的弟弟尼克很幸运。“幸运的事情接二连三地发生在尼克身上，我真的很羡慕他。我相信有运气这回事。”亚莉说，“我怎样才能得到好运气呢？”亚莉常常这样问我，但我总是不知如何才能给她一个让她满意的答案。因为我不是一个迷信的人，